超声微波协同提取药桑叶生物碱及其保肝活性研究

本研究以药桑叶为原料,采用单因素结合响应面法优化了药桑叶生物碱的超声微波协同提取工艺,并采用四氯化碳致小鼠急性肝损伤模型评价了药桑叶提取物(MNLE)的保肝活性。结果表明药桑叶生物碱的最佳提取工艺为:料液比1∶54 g/mL,乙醇浓度79%,微波功率300~0 W(0~7 min),超声功率493 W,提取时间29 min,提取温度70℃,在此条件下生物碱提取率可达11.325 mg/g。药效学试验结果显示,与模型组相比,MNLE能明显降低血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)水平以及肝组织丙二醛(MDA)和一氧化氮(NO)水平(P<0.05或P<0.01),升高肝组织超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽(GSH)水平(P<0.05或P<0.01),肝组织病理学变化也得到了明显改善。结果表明MNLE具有较好的保肝作用,其作用机制与其抗氧化活性相关。

药桑叶多糖提取工艺优化及其降血糖活性研究

采用Box-Behnken试验设计对药桑叶多糖提取条件(液料比、提取温度、提取时间)进行优化,并用对硝基苯-α-D-吡喃葡萄糖苷(p-NPG)法对药桑叶多糖进行α-葡萄糖苷酶抑制活性测定。结果显示,药桑叶粗多糖提取最佳工艺为:在液料比25∶1(mL∶g),提取温度90℃、提取时间3 h条件下,药桑叶粗多糖提取率最高为(13.39±0.53)%。降血糖初步研究结果为:药桑叶粗多糖对α-葡萄糖苷酶有较好的抑制活性,其半抑制浓度(IC_(50))为0.96 mg/mL。

新疆药桑叶多糖的分离纯化及结构研究

研究了新疆药桑叶多糖的分离纯化及初步的结构分析。采用DEAE-Cellulose-52及Sephadex G-200分离纯化药桑叶多糖,采用聚酰胺薄层层析及GC法测定药桑叶多糖的组成,凝胶过滤法测定其相对分子质量,红外光谱测定其苷键类型。粗多糖经DEAE-52分离得到6个多糖级分W1、W2、N1、N2、N3和N4,其中的4个级分W1、N1、N2和N4经Sephadex G-200纯化后,各个级分的洗脱峰均为单一对称峰。聚酰胺薄层法及GC法确定药桑叶多糖由葡萄糖、半乳糖、甘露糖、鼠李糖、阿拉伯糖及木糖等单糖组成。测得W1、N1、N2和N4的分子量分别为71 331Da,60 049Da,35 825Da和21 374Da。红外光谱中有典型的多糖吸收峰及α-型糖苷键。

HPLC法同时测定新疆药桑叶中6个活性成分

目的建立HPLC法同时测定新疆药桑叶中绿原酸、芦丁、异槲皮苷、紫云英苷、白藜芦醇和槲皮素的方法。方法采用PMC pack ODS色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以0.2%磷酸水溶液-0.2%磷酸乙腈溶液为流动相,梯度洗脱,检测波长为360 nm,体积流量0.6 mL/min。结果 6种成分在45 min内均达到完全分离,绿原酸、芦丁、异槲皮苷、紫云英苷、白藜芦醇及槲皮素的平均回收率分别为98.8%(RSD为0.26%)、102.3%(RSD为0.89%)、100.4%(RSD为0.95%)、100.8%(RSD为0.60%)、98.9%(RSD为0.19%)、98.3%(RSD为0.46%)。结论本方法操作简单、结果准确,具有较好的重复性和稳定性,为药桑叶的质量控制提供实验数据。

一测多评法测定新疆药桑叶中4种活性成分的含量

目的采用一测多评法测定新疆药桑叶中的4种活性成分的含量。方法采用HPLC测定新疆药桑叶中4种成分的含量,流动相5mL·L^(-1)磷酸水溶液(A)-乙睛(B)梯度洗脱(0~8 min,80%~85%A;8~20 min,80%A;20~30 min,80%~95%A);检测波长:344nm。选择芦丁为内标物,测定其与紫云英苷、异槲皮苷和绿原酸的相对校正因子,计算新疆药桑叶中4种成分的含量,并比较一测多评法的计算值与外标法实测值的相似度。结果一测多评法和外标法测得的绿原酸、异槲皮苷和紫云英苷的含量相似度均达到0.999。结论建立的一测多评法适用于新疆药桑叶中4种成分的含量测定,相对校正因子可靠。

新疆药桑叶多糖中单糖组成的气相色谱分析

目的分析新疆药桑叶多糖中单糖的组成及含量。方法将新疆药桑叶多糖用4mol·L-1三氟醋酸水解12h,加入10mg盐酸羟胺、0.5mL吡啶和0.5mL醋酸酐于水解产物中进行衍生化反应,反应生成糖腈乙酸酯衍生物,采用气相色谱法测定药桑叶多糖的单糖组成。用Rtx-5毛细管色谱柱(30m×0.25mm,0.25μm);载气为N2;进样温度为235℃;检测器温度为280℃;进样量为1.0μL。柱温为程序升温,初始柱温155℃,维持1min,以0.4℃·min-1的速率升高到160℃,维持2min后,以0.5℃·min-1的速率升高到169℃,再以0.2℃·min-1的速率升高到172℃。结果新疆药桑叶多糖中鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖的摩尔组成比例为7.16∶9.59∶1.09∶1.05∶12.36∶15.52。结论该方法简便、灵敏、准确可靠,可用于新疆药桑叶多糖中单糖的含量测定。

药桑叶中黄酮类物质的薄层色谱鉴别和活性筛选及含量测定的研究

建立药桑叶中黄酮类物质的薄层鉴别及HPLC法测定其含量的方法,并对黄酮类物质进行抗氧化活性筛选。甲醇为溶剂超声提取桑叶中的黄酮类物质,以乙酸乙酯：水：甲酸：甲苯（17∶2∶2∶0.8）为展开剂于高效硅胶G板上展开,Al Cl3为显色剂,365 nm下检视。以二苯代苦味肼自由基（DPPH）溶剂显色,筛选抗氧化活性。采用PMC pack ODS色谱柱,以乙腈-0.01 mol·L^-1醋酸铵溶液（p H=4.8）为流动相,梯度洗脱,检测波长350 nm,流速1.0 m L·min^-1。桑叶中的芦丁、异槲皮苷及紫云英苷在紫外灯下出现明显斑点,薄层-生物自显影实验发现芦丁和异槲皮苷在紫色背景下呈淡黄色斑点,证明二者具有抗氧化活性。3种成分在35 min内均达到完全分离,芦丁、异槲皮苷和紫云英苷的平均回收率及含量分别为95.6%（0.85-1.14 mg·g^-1）、97.4%（0.66-0.85mg·g^-1）及96.2%（0.09-0.29mg·g^-1）（RSD〈3%）。结论：本法操作简便,准确可靠,可用于药桑叶中黄酮类物质的薄层色谱鉴别及含量测定。

HPLC-ELSD法测定新疆药桑叶中1-脱氧野尻霉素的含量

该研究采用高效液相色谱-蒸发光散射检测(HPLC-ELSD)法测定新疆药桑叶中1-脱氧野尻霉素(1-DNJ)的含量,色谱柱为Waters XBridge^(TM) HILIC(2.1 mm×100 mm,5μm),乙腈-水(85∶15,V/V)为流动相,流速0.2 mL/min。结果表明,1-DNJ在1.2~12.0μg/mL质量浓度范围内线性关系良好,平均回收率为98.25%,相对标准偏差(RSD)为1.16%。该方法快捷简便、结果可靠,可用于药桑叶中1-脱氧野尻霉素含量的分析检测。

新疆药桑叶中1-脱氧野尻霉素定性及定量分析

目的：建立新疆药桑叶中1-脱氧野尻霉素（DNJ）的TLC定性鉴别及HPLC定量分析方法。方法：以正丁醇-冰醋酸-水（4．5：1．2：1．2）为展开剂，在高效硅胶G薄层色谱板上展开，氯-联甲苯胺为显色剂。采用YMC—pack ODS—A色谱柱（250mm×4．6mm，5μm），以甲醇（A）-0．1％醋酸水溶液（B）为流动相，等度洗脱（65％A，35％B），检测波长为263nm，流速为1．0mL·min-1。结果：新疆药桑叶中的DNJ在白光下检视，出现明显斑点，Rf值为0．41。DNJ的平均回收率为99．5％（RSD=1．3％），测得不同产地药桑叶中DNJ的含量为0．79—3．42mg·g-1。结论：建立的方法简便、可行、灵敏、专属性强，重复性好，可用于新疆药桑叶的质量控制。

药桑叶中1-脱氧野尻霉素(DNJ)的薄层鉴别的研究

建立了药桑叶中DNJ的薄层鉴别的方法。分析了不同薄层板、展开剂、显色剂及温度对分离的影响。在试验中,以正丁醇-冰醋酸-水(5∶2∶1)为流动相在硅胶G板上展开,茚三酮为显色剂,药桑叶提取物中在与DNJ标准品相对应位置上出现相同颜色的斑点,Rf为0.36。分离后的斑点圆整、清晰,重现性好,符合薄层层析要求,可用于药桑叶的质量控制。

新疆药桑叶中五种活性成分的薄层色谱鉴别

目的:建立新疆药桑叶中同时鉴别五种活性成分的薄层色谱方法。方法:分析不同薄层板、检视方式、展开剂、显色剂对五种活性成分分离的影响。结果:在366nm下以V(甲苯):V(乙酸乙酯):V(甲醇):V(甲酸)=10:3:5:3.5为展开剂在硅胶G高效板上展开,1%三氯化铝为显色剂,药桑叶中芦丁、槲皮素、异槲皮苷、紫云英苷和绿原酸五种成分均得到有效的分离,斑点圆整、清晰,比移值在0.2~0.8之间,符合薄层层析要求。结论:此试验为新疆药桑叶的质量控制提供快速的鉴别方法。

新疆药桑叶中三种氨基酸类成分的定性鉴别

目的建立新疆药桑叶中氨基酸类成分的薄层鉴别方法,为控制新疆药桑叶的质量提供依据。方法采用薄层色谱法对新疆药桑叶中所含的白氨酸、苏氨酸、γ-氨基丁酸进行定性鉴别。结果定性鉴别薄层色谱特征明显,专属性强。结论建立的方法简便、可行、灵敏、精确、专属性强,重复性好,可作为新疆药桑叶的质量控制方法 。

新疆药桑叶中γ-氨基丁酸的分析

目的对新疆药桑叶中的γ-氨基丁酸进行定性和定量分析。方法定性TLC鉴别以正丁醇∶冰醋酸∶水（4∶2.2∶1）为展开剂,茚三酮为显色剂;定量HPLC测定采用YMC-pack ODS-A色谱柱（250 mm×4.6 mm,5μm）,以磷酸盐缓冲液（p H=6.8）（A）-甲醇（B）为流动相,梯度洗脱,体积流量1.0 m L/min,检测波长335 nm,采用邻苯二甲醛柱前衍生。结果 TLC斑点圆整清晰,呈明显暗红色,分离度良好,Rf值为0.61。γ-氨基丁酸在1.006-84.504μg/m L范围内线性关系良好,平均回收率为99.8%（RSD=1.4%）,10个产地含有量差异明显。结论该方法简便灵敏,专属性强,重复性好,可用于新疆药桑叶的质量控制。

RP-HPLC法测定新疆不同产地药桑叶中芦丁、异槲皮苷的含量

目的考察新疆不同产地、不同采摘时间药桑叶中芦丁、异槲皮苷的含量变化。方法采用反相高效液相色谱法（RP-HPLC）,以大连依利特Hypersil ODS（150mm×4.6mm,5μm）为色谱柱,进样量20μl,流动相为乙腈（A）-水（B）-0.2%磷酸溶液（pH=4.8）（C）,梯度洗脱[0min,A-C（18∶82）;4min,A-C（21∶79）;10min,A-C（8∶92）],流速1.0ml/min,检测波长为358nm,柱温为25℃。结果不同产地、不同采摘时间的药桑叶中芦丁和异槲皮苷的含量均有一定的差异,喀什地区、5~6月份二者含量较高。结论药桑叶中芦丁和异槲皮苷的含量与产地和采摘季节等有关,尤其以季节的影响大。

新疆药桑叶中黄酮类化合物的分离及其抗氧化活性评价

以自由基清除率为评价指标,利用制备液相从药桑叶醇提物的乙酸乙酯萃取部分中分离黄酮单体化合物,并采用1,1-二苯基-2-硝基苯肼(DPPH)自由基和2,2-联氮基-双-(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二氨盐(ABTS)自由基清除法对单体化合物进行抗氧化活性评价。结果表明,从乙酸乙酯萃取部分分离得到4个单体化合物,分别为化合物Ⅰ、化合物Ⅱ、化合物Ⅲ、化合物Ⅳ,对DPPH自由基清除率的半数抑制浓度(IC50)分别为0.004 4 mg/m L、0.003 7 mg/m L、0.003 0 mg/m L、0.078 0 mg/m L,对ABTS自由基清除率IC50分别为0.021 mg/m L、0.014 mg/m L、0.012 mg/m L、0.087 mg/m L。4个单体化合物均具有很强的抗氧化活性,且抗氧化活性顺序化合物Ⅲ>化合物Ⅱ>化合物Ⅰ>化合物Ⅳ。

新疆药桑叶中黄酮类化合物的分离与鉴定

采用色谱分离技术从药桑叶醇提物的乙酸乙酯萃取部分分离黄酮类化合物,通过核磁共振(NMR)和高效液相-串联质谱(HPLC-MS-MS)鉴定其结构。分离得到四个黄酮类化合物,结构表征为芦丁(1)、槲皮素-3-O-葡萄糖苷(2)、金丝桃苷(3)、山奈酚-3-O-β-D-吡喃葡萄糖(4)。其中化合物(3)、(4)首次从新疆药桑叶中分离得到。

新疆药桑叶醇提物3种活性初步研究

研究新疆药桑叶醇提物的生物活性。以80%乙醇于30℃环境下浸提药桑叶粗粉,浸提液减压浓缩后依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取,浓缩至干,分别得到石油醚相、乙酸乙酯相、正丁醇相和水相。用Hela细胞为肿瘤模型,以MTT法研究各萃取物的抗肿瘤活性;用对DPPH自由基清除率评价各萃取相的抗氧化活性;用体外α-葡萄糖苷酶抑制模型探究各萃取相的降血糖活性。抗肿瘤能力按照由强到弱为:乙酸乙酯相>正丁醇相>水相。各相均有一定的抗氧化能力,抗氧化能力由强到弱:乙酸乙酯相>正丁醇相>石油醚相>水相。降血糖活性表现为:乙酸乙酯相>正丁醇相>水相>石油醚相。药桑叶醇提物具有较好的生物活性,其中乙酸乙酯相具有良好的抗肿瘤、抗氧化和降血糖活性。

药桑叶多糖的脱蛋白工艺与抗氧化活性研究

以新疆药桑叶为原料,采用水提醇沉法获得药桑叶粗多糖,利用Sevage法脱除粗多糖中的蛋白质,通过单因素试验、正交试验对药桑叶多糖脱蛋白工艺进行优化,并对脱蛋白前后的多糖进行DPPH自由基抗氧化活性试验。结果表明,药桑叶多糖的最佳除蛋白工艺条件为多糖溶液与Sevage试剂的体积比为1∶2,脱蛋白时间为20 min,脱蛋白次数为3次,蛋白质除去率可达到76.54%,多糖损失率为20.80%,脱蛋白后获得的多糖抗氧化活性比脱蛋白前的活性强。

药桑叶中活性物质的提取及对α-葡萄糖苷酶的抑制作用

以药桑叶为实验原料,通过集成提取工艺,获得3种含量稳定的粗提物成分,研究其对α-葡萄糖苷酶的抑制作用,并进行不同粗提物间组合物对α-葡萄糖苷酶抑制活性的研究。采用乙醇提取、柱色谱分离纯化等方法,获得桑叶中具有潜在降血糖活性的黄酮、多糖和生物碱粗提物;利用α-葡萄糖苷酶抑制模型评价3种粗提物对α-葡萄糖苷酶的抑制作用,并进一步采用CompuSyn软件对不同粗提物间的相互作用进行统计学分析。结果表明:桑叶中黄酮、生物碱、多糖粗提物对α-葡萄糖苷酶均具有抑制活性,且生物碱粗提物的抑制活性显著高于阳性对照(阿卡波糖),多糖粗提物在高质量浓度作用下具有α-葡萄糖苷酶抑制作用,表现为抑制作用与多糖质量浓度成正比;在本实验所使用的质量浓度与剂量配比内3种粗提物相互组合时,黄酮+生物碱组合、多糖+生物碱组合表现为拮抗作用;黄酮+多糖组合、黄酮+多糖+生物碱组合在高质量浓度下对抑制α-葡萄糖苷酶表现为协同作用。

药桑叶中金丝桃苷及其异构体分离鉴定

应用色谱分离法和高效制备液相色谱法研究药桑叶中金丝桃苷及其异构体分离制备方法。结果表明,药桑叶95%醇提物经乙酸乙酯萃取,过已活化的D-101型大孔吸附树脂经中压柱色谱可得到金丝桃苷及其异构体的混合物。将混合物用高效制备液相分离,制备液相色谱柱为Waters Xbridge(300 mm×21 mm,10μm),流动相为95%乙腈-5%水(含0.1%甲酸),上样量100 mg,流速15 mL·min^(-1),柱温40℃,检测波长285 nm,得到纯度为98.7%、97.8%以上两种纯物质,经核磁共振和质谱分析鉴定其结构为金丝桃苷、槲皮素-3-O-葡萄糖苷,二者互为同分异构体。