药物代谢酶CYP3A在中国肾移植人群的遗传多态性

目的:建立药物代谢酶CYP3A4、CYP3A5的多个等位基因分型方法,为进一步从基因水平研究CYP3A与机 体对药物反应的个体差异本质及其与药物代谢的相关性提供分子生物学实验方法;探讨药物代谢酶CYP3A在中 国肾移植人群的遗传多态性。 方法:用聚合酶链反应 限制性片段长度多态性(PCR RFLP)法及特异性等位基因 扩增(PCR ASA)法分别建立了CYP3A的CYP3A4亚型三个新突变点(CYP3A4 4、 5、 6)及CYP3A5亚型的 CYP3A5 3基因分型方法,并对中国肾移植人群进行基因分型。 结果:CYP3A4 4、 5、 6、CYP3A5 3在中 国肾移植人群的基因频率分别为0.75%、0.76%、0.75%和27.83%;个体突变率分别为2/133、3/197、3/200和 55/115。 结论:研究结果提示,中国肾移植人群中CYP3A4 4、 5、 6、CYP3A5 3的存在可能使其表达的药 物代谢酶活性改变,从而影响药物在体内的代谢过程。

仙茅对正常/虚寒大鼠孕烷X受体及其介导的药物代谢酶CYP3A和运转蛋白P-gp的影响

目的:明确仙茅对正常、虚寒大鼠孕烷X受体(PXR)调控药物代谢酶CYP3A和转运蛋白P-gp的作用差异,为探讨其药效表达差异机制奠定基础。方法:连续21d肌注氢化可的松粉针剂20mg·kg-1·d-1塑造虚寒大鼠模型。从第15天开始,正常、虚寒大鼠连续7d分别灌胃仙茅大、小剂量(30、20g/kg)水煎液。观察正常和虚寒状态下仙茅对PXR及其介导的药物代谢酶CYP3A和转运蛋白P-gp的影响。结果:仙茅大、小剂量分别给予虚寒大鼠后,能使虚寒大鼠降低的肝脏微粒体CYP3A活性、小肠P-gp及肝脏PXR蛋白表达水平不同程度升高(P<0.05,P<0.01)。而仙茅大、小剂量分别给予正常大鼠后,各指标变化均不明显。结论:仙茅对虚寒状态的治疗作用可能与其可升高虚寒大鼠PXR及其介导的CYP3A和P-gp有关。

虚寒状态下药物代谢酶CYP3A和转运蛋白P-gp变化的体内外实验研究

目的通过体内外实验探讨虚寒状态下药物代谢酶CYP3A和转运蛋白P-gp变化。方法连续14 d每天肌注氢化可的松粉针剂(20 mg/kg)制造虚寒大鼠模型,观察正常、虚寒大鼠肝、小肠CYP3A活性和小肠P-gp蛋白水平;选用L02细胞和Caco-2细胞作为细胞模型,分别用正常和虚寒状态大鼠血清对其进行干预,分别观察L02细胞中CYP3A活性和Caco-2细胞中P-gp蛋白水平。结果虚寒模型大鼠肝和小肠微粒体CYP3A活性显著降低(P<0.05),小肠P-gp蛋白表达显著降低(P<0.05)。虚寒状态L02细胞中CYP3A活性明显降低(P<0.05),但虚寒状态Caco-2细胞中P-gp蛋白水平没有显著变化。结论体内、外实验共同验证了虚寒状态下CYP3A活性处于低下状态,至于Caco-2细胞中P-gp没变化,可能与Caco-2细胞株本身为癌细胞,P-gp高表达有关。

CYP3A4酶介导的人类药物代谢性别差异

药代动力学的性别差异是临床上药物疗效的重要影响因素。引起药代动力学性别差异的比较重要的分子因素包括药物代谢酶和药物转运体等。CYP3A4是人体含量最丰富的酶,具有广泛的代谢底物。大部分体内、外研究表明CYP3A4底物的代谢具有明显的性别差异,女性体内的代谢快于男性。该文系统综述人肝脏CYP3A4酶介导的药物代谢性别差异的研究进展。

转录因子DECl对药物代谢酶（CYP3A4）的调节作用

药物代谢酶包括参与I相代谢的细胞色素氧化酶CYP450超家族（CYPlAl／2、181、2A6、286、2C8、2C9、2（：19、2D6、2El、3A4／5／7）、乙醛脱氢酶（ALDH）、乙醇脱氢酶（ADH）和参与Ⅱ相代谢的N一乙酰基转移酶（NATl／2）、尿苷三磷酸葡萄糖醛酸基转移酶（UGT）等。其中细胞色素氧化酶P450是一组结构和功能相关的超家族基因编码的同工酶，参与大多数内源性物质（如脂肪酸、维生素、胆酸）的代谢，外源性物质（如药物、毒物）的解毒，前致癌物质（如芳香类物质）的激活等方面发挥重要的作用。因此，药物代谢酶不仅影响外源性物质代谢而与药理毒理学相关，并且影响内源性的脂代谢而与动脉粥样硬化等心血管疾病相关。

小肠CYP450酶在药物代谢中的作用

小肠是口服药物的主要吸收器官,同时也是进行药物代谢的重要场所。小肠黏膜上皮细胞含有大量Ⅰ、Ⅱ药物代谢酶,其中以CYP450酶最为重要,参与众多药物的生物转化。小肠CYP450主要有CYP1A1、CYP2C9、CYP2C19、CYP2J2、CYP2D6、CYP3A6种同工酶,其中CYP3A和CYP2C在小肠中表达最高,分别约占CYP450总含量80%和16%。与肝脏相比,小肠CYP450酶活性及其表达更易受到外源性化合物影响。本文重点讨论小肠CYP450s活性与表达及其在药物代谢中的作用以及由CYP450s的诱导或抑制引起的药物相互作用。

体内代谢法研究糖类药物对大鼠CYP3A4的影响

目的研究不同结构的糖类药物对肝药酶的影响,从而对这些新药进行安全性评价,并预测它们与其他药物合用的不良相互作用。方法通过研究肝药酶的专属探针药物的体内代谢过程的变化,进而判断不同结构糖类药物对这些酶有无诱导或抑制作用。结果SPMG对雌雄大鼠均有显著的抑制作用,但AOSC对CYP3A4无影响。结论结构不同的药物对CYP3A4的影响存在明显的差异,药物与各种与CYP3A4酶代谢有关的药物合用时,应充分考虑其对肝药酶的不同影响,以避免潜在的毒性或不良反应。

脑梗死二级预防中CYP3A4代谢与非CYP3A4代谢的他汀类药物对氯吡格雷抗血小板聚集功能的影响及降脂疗效的比较

目的观察脑梗死二级预防患者服用高强度的阿托伐他汀(40 mg/d)或瑞舒伐他汀(20 mg/d)对氯吡格雷(75 mg/d)抗血小板聚集功能的影响及降脂疗效。方法初选80例,最终入组并观察完成66例脑梗死二级预防患者,随机分为阿托伐他汀组和瑞舒伐他汀组各33例,所有患者随访3个月,分别于服用氯吡格雷前、服用氯吡格雷1 w后、加用他汀1 m后、3 m后测定血小板聚集功能,检测血脂、肌酶、肝酶等相关指标,观察3 m内的主要心脑血管等不良事件。结果服用氯吡格雷(75 mg/d)能明显降低血小板聚集率,两组患者在加用他汀1 m后、3 m后的血小板聚集率均未发生明显变化,且同期对比无差异。3 m随访期间,服用高强度的他汀后两组患者的CHOL、LDL-C较基线明显降低(P<0.05),但同期对比无差异(P>0.05);随访期间两组患者均未为发生心脑血管不良事件,但有个别患者出现肌酶或肝酶升高,两组对比无差异(P>0.05)。结论脑梗死二级预防患者服用高强度的阿托伐他汀或瑞舒伐他汀对氯吡格雷的抗血小板聚集功能未产生明显的影响,且降脂疗效相近。

药物代谢酶CYP2D6和CYP2C19的基因多态性与个体化治疗

药物代谢酶的活性高低是决定药物代谢强度和持久性的主要因素。参与药物代谢的酶主要有细胞色素P450（cytochromep450，CYP450）同工酶、N-乙酰转移酶（N．acefyltransferase，NAT）、醇脱氢酶（alcohol dehydrogenase，ADH）和酯酶（esterase）等，而在众多代谢酶中，CYP450酶起着非常重要的作用，它可代谢降解大约40％～50％的药物。CYP450酶又称混合功能氧化酶或单加氧酶，是一种以血红蛋白为辅基的B族细胞色素超家族蛋白酶，广泛存在于动物、真核有机体、植物、真菌和细菌中，是必不可少的结构酶。

CYP3A4高表达细胞模型及其应用于药物代谢研究进展

细胞色素P450酶3A4(cytochrome P450 3A4,CYP3A4)属于细胞色素P450酶家族,参与多种化合物代谢及相互作用,是药物(尤其是口服药物)筛选和代谢研究的重要对象。该文按年代顺序对国外文献中CYP3A4高表达细胞模型的建立及在药物代谢中的应用进行综述,旨在将这一有价值的模型引入到新药研究中。

临床前大鼠药物代谢酶CYP2D6亚型HPLC技术研究

目的:建立测定临床前大鼠药物代谢酶2D6亚型活性的 HPLC 方法。方法:HPLC 法测定大鼠尿液及肝微粒体中探针药物右美沙芬(DM)、其代谢物去甲右美沙芬(DX)及内标物丁丙诺啡(BP)的含量。采用 Hypersil-C_6H_5柱(250mm×4.6mm,5μm),以0.01mol-L^(-1)磷酸二氢钾-0.01mol·L^(-1)已烷磺酸钠-乙腈-甲醇(33:33:80:54,v/v,pH4.0)为流动相,流速1.0mL·min^(-1),荧光检测器激发波长280nm,发射波长310nm。结果:本方法稳定性良好,尿样 DM 在0.04～1.20mg·L^(-1)内线性良好(r=0.9981),DX 在3.12～100.0mg·L^(-1)内线性良好(r=0.9971)。肝微粒体重组样品 DM 在30.0～180.0mmol·L^(-1)内线性良好(r=0.9980),DX 在5.0～50.0mg·L^(-1)内线性良好(r=0.9976),日内、日间样品 RSD 均小于10%,样品-20℃保存30d 后测定稳定良好,体外肝微粒体实验 RSD 小于10%。结论:本方法稳定、准确,可用于新药临床前药物代谢酶途径及药物相互作用研究。

药物代谢酶CYP2C9基因的研究进展

药物代谢酶CYP2C9参与约10%的药物代谢和一些重要内源性物质及前致癌物的代谢,根据突变基因代谢药物的能力,可分为快代谢型(EM)和慢代谢型(PM)。CYP2C9突变基因不仅影响药物代谢,且可能引起癌症和心血管疾病发病率的变化。现对CYP2C9基因突变的发生频率及对药物代谢的影响做一介绍,并阐述CYP2C9酶的主要突变形式及我国人群基因突变对易感疾病的影响。

采用特异性探针药物法测定双峰驼CYP3A酶活性

【目的】探究双峰驼CYP3A酶体外活性及其对外源性药物代谢的影响。【方法】将双峰驼禁食过夜12 h,颈静脉放血处死后,立即于肝门静脉处采集块状肝脏组织,洗去血污称重匀浆后,采用Ca2+沉淀法制备双峰驼肝微粒体,并通过BCA法测定其蛋白含量。同时优化双峰驼肝微粒孵育体系,取不同浓度的双峰驼肝微粒体蛋白悬液(0.016、0.031、0.063、0.125、0.250、0.500、1.000、2.000 mg·m L-1)、不同浓度的探针药物咪达唑仑(MDZ)(7.813、15.625、31.250、62.500、125、250、500、1 000μg·m L-1)分别加入到孵育体系中,37℃预孵育5 min后,加入NADPH溶液后再孵育不同时间(0、2、5、10、15、20、25、30 min)。待反应完全后加入冰冷的甲醇和地西泮(DZP)溶液,涡旋混匀,800μL全部混合液体经14 500 r/min离心20 min后,取20μL上清液进行高效液相色谱紫外检测(HPLC-UV),确定最适底物浓度、最适酶浓度以及最适孵育时间。分别取浓度为7.813、15.625、31.250、62.500、125、250、500、1 000μg·m L-1 MDZ探针药物溶液20μL与双峰驼肝微粒体共同孵育15 min后,以混有内标DZP的冰冷甲醇终止反应,采用高效液相色谱紫外检测法测定反应产物1'-羟基咪达唑仑(1'-OHMDZ)的动态含量,计算出部分药物动力学参数。色谱条件:Sigma-Aldrich/Supelco Discovery C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm);流动相为V(乙腈)﹕V(0.01 mol·L-1 PBS缓冲液)=40﹕60;等浓度洗脱20 min;检测波长为254 nm;流速为0.8 m L·min-1;柱温为30℃;进样量为20μL。【结果】使用Ca2+沉淀法制备的双峰驼肝微粒体保持了酶的良好活性,能满足后续体外药物代谢试验的基本要求,经BCA法测定其蛋白含量为(1.936±0.052)mg·m L-1。双峰驼肝微粒体蛋白悬液、探针药物MDZ、PBS缓冲液、Mg Cl2溶液以及NADPH溶液构成双峰驼肝微粒体孵育体系,随着孵育时间的延长,酶和底物进一步反应,当MDZ浓度为125μg·m L-1(终浓度为7.073 nmol·m L-1),肝微粒体浓度为2.000 mg·m L-1(终浓度为0.050 mg·m L-1)时,孵育15 min,酶和底物的结合最紧密,并呈现出饱和的状态,故确定其终浓度和时间为最适浓度和最佳孵育时间。经HPLC-UV法测定,1'-OHMDZ、MDZ和DZP的出峰保留时间分别为6.710、11.383和15.263 min,各成分色谱峰分离良好,且不受肝微粒体孵育体系中其他干扰峰的影响。HPLC检测方法的精密度、稳定性及回收率的试验结果均符合色谱测定的基本要求,即成功建立了准确、灵敏、可靠、重现性好的双峰驼CYP3A酶特异性探针药物的检测方法。以底物MDZ浓度和反应产物1'-OHMDZ生成速率进行Lineweaver-Burk双倒数作图,分别计算出最大反应速度Vmax和米氏常数Km。经Origin Pro8.6软件进行线性回归分析得到最大反应速度Vmax为(0.380±0.028)nmol·mg-1·min-1,米氏常数Km为(9.603±3.229)nmol·m L-1,以此体现酶和底物的反应情况,并对双峰驼CYP3A酶的活性进行了间接测定。【结论】成功建立了跟踪检测CYP3A酶的特异性探针药物MDZ及其代谢产物浓度的高效液相色谱紫外检测方法。MDZ在体内经CYP3A酶的特异性氧化代谢后主要生成1'-OHMDZ,本文以MDZ的代谢产物1'-OHMDZ的生成速率为检测指标,首次对双峰驼CYP3A酶的体外活性及酶与底物的相互作用特点进行了研究。

探针药物法评价柚皮苷对人肝微粒体CYP2E1酶代谢活性的影响

目的:考察柚皮苷对CYP2E1酶代谢活性的影响,以探讨与其它以CYP2E1为主要代谢酶的药物联用时,是否可能产生潜在的相互作用。方法:在人肝微粒体代谢体系中,以氯唑沙宗作为底物探针,建立表征CYP2E1酶代谢活性的HPLC检测方法,分别考察体外代谢体系的最适宜底物浓度、代谢时间、pH值以及孵育温度。在确定的条件下,将柚皮苷稀释成不同浓度,分别与氯唑沙宗共同孵育于人肝微粒体代谢体系中,测定在有或无柚皮苷存在下氯唑沙宗的剩余量,以评估柚皮苷对CYP2E1酶代谢的影响。结果:在人肝微粒体孵育体系中,氯唑沙宗代谢最适宜的体外代谢条件为底物浓度2.4g/L,代谢时间3.5h,pH 7.5,孵育温度37℃。柚皮苷对CYP2E1酶代谢活性有一定的抑制作用,IC50为10.07μmol/L。结论:柚皮苷对经CYP2E1酶代谢的药物可能会产生微弱的药物相互作用。

CYP3A5基因型与肾移植受者他克莫司药物代谢的相关性研究

他克莫司是大环内酯类基础免疫抑制剂,广泛用于器官移植术后预防和治疗排异反应[1]。它具有治疗窗窄、个体间药物代谢动力学差异大的特点,目前一直采用监测血药浓度的方法调整用药剂量。通过药物基因组学的研究,Evans等人发现由于药物吸收、分布的差异导致不同个体间疗效及不良反应的差异。

重组肝CYP3A4与CYP3A29细胞微粒体药物代谢动力学比较

目的比较巴马小型猪CYP3A29和人CYP3A4稳定表达重组肝癌细胞株微粒体的药物代谢特征,在分子水平为巴马小型猪作为临床前药物代谢实验动物提供科学依据。方法以CYP3A特异性代谢底物硝苯地平、睾酮及其抑制药酮康唑为探针药物,将探针药物与重组CYP3A4、CYP3A29细胞微粒体在优化的微粒体浓度、药物浓度、孵育时间等条件下进行体外孵育,高效液相色谱法检测其药物代谢(抑制)动力学参数,并将二者进行比较分析。结果巴马小型猪CYP3A29与CYP3A4在硝苯地平和睾酮代谢差异无统计学意义(P>0.05)。酮康唑的抑制活性为:当代谢底物为硝苯地平时,酮康唑对CYP3A29和CYP3A4的半数抑制浓度分别为0.090,0.132μmol·L-1(P<0.05);当代谢底物为睾酮时,酮康唑对CYP3A29和CYP3A4的半数抑制浓度分别为0.056,0.032μmol·L-1(P<0.05)。结论重组CYP3A29与CYP3A4细胞微粒体对硝苯地平和睾酮活性差异不显著;酮康唑对重组CYP3A29与CYP3A4细胞微粒体硝苯地平和睾酮代谢活性有差异。

CYP3A4基因多态性对药物代谢及其个体化给药的影响

CYP3A4是一种重要的药物代谢酶,参与多种药物的体内代谢,该酶的活性在不同的体内,种族和联用药物之间存在着明显的差异。本文综述了CYP3A4酶的基因多态性对药物代谢的影响,以期为指导临床合理用药打下理论基础,确保临床合理用药的安全性和有效性。

广东人群药物代谢酶CYP2C9基因A895G位点多态性研究

目的调查广东人群CYP2C9基因第6外显子895A>G位点多态性情况。方法 PCR扩增跨越该位点的DNA片断,用VpaK11BI酶切PCR产物,通过PAGE-银染判断基因型。结果在受检的252例广东人中,共检出3例A895/G895杂合子,余者皆为野生型纯合子A895/A895。结论广东人群存在CYP2C9895G即CYP2C9*16等位基因,其频率为0.006。本研究为广东人群使用CYP2C9底物药提供了参考依据。