肿瘤治疗药物敏感性测试的研究进展

目的:了解肿瘤治疗药物敏感性测试的相关研究进展。方法:依据文献,从临床试验方法、动物生物学试验方法、细胞生物学试验方法、分子生物学试验方法等方面对肿瘤治疗药物敏感性测试的研究进行综述,并分析其特点。结果与结论:临床试验方法为病理取材后对病理组织进行免疫组织化学等相关测试,手段包括免疫组织化学技术、免疫荧光技术等,但该类测试较复杂,不利于临床开展,所得结果没有诊断意义;动物生物学试验方法即动物体内测试方法,包括裸鼠移植药敏实验和肿瘤肾包膜下移植实验,但该类测试大多操作复杂、费用昂贵、不宜规模化;细胞生物学试验方法原理为分离肿瘤细胞后经体外培养,经药物作用,直接或者间接测试活细胞数量来判断药物敏感性,包括MTT法、三磷酸腺苷生物发光法等,但该类测试过程复杂,结果重复性不好,所得结果对药物的副作用没有体现,总体临床符合率不高;分子生物学试验方法为针对靶向药物的药敏测试方法,包括基因突变测试、基因多态性测试、基因表达测试等,但该类测试需要较专业的仪器和技术,费用昂贵,不利于临床大量开展。选择合适的模型和结果判断方法、控制测试费用是肿瘤治疗药物敏感性测试中需要解决的关键问题。随着肿瘤治疗药物敏感性测试技术的发展,在药物靶向剂型的研究、药物治疗个体化方案设计等方面都将因之发生重大变革。

生猪养殖场仔猪白痢大肠杆菌分离、鉴定及药物敏感性试验

仔猪白痢为仔猪常发疾病,严重制约生猪养殖产业。试验以沈阳地区某规模化生猪养殖场患白痢的63头仔猪为研究对象,对其进行病原菌分离、鉴定及药物敏感性试验。结果表明,该场仔猪白痢主要病原菌为大肠杆菌,共得到大肠杆菌分离株55株。分离株对磺胺甲基异恶唑耐药率最高、其次为青霉素;分离株对头孢噻呋最敏感。分离株多药耐药现象较为严重,同时耐受5种抗菌药物的分离株最多,占27.3%。

武汉市某医院临床病原微生物的分布及耐药性监测

目的了解武汉大学人民医院临床分离病原微生物的分布及对常用抗菌药物的敏感性,为临床预防性使用抗菌药物及医院感染控制提供理论依据。方法采用全自动细菌鉴定药敏系统BD-Phoenix-100对所有分离菌株进行鉴定和药物敏感性测试。结果 2017年2月至2018年2月武汉大学人民医院共分离临床病原微生物8 380株,其中革兰阳性菌占40.5%,革兰阴性菌占59.5%。产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌的检出率为44.6%,对复合制剂氨苄西林/舒巴坦和阿莫西林/克拉维酸处于中介的菌株分别占37.9%和30.2%。耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)检出率为40.0%,未分离出对万古霉素、替考拉宁和利奈唑胺耐药的菌株。碳青霉烯耐药鲍曼不动杆菌(CRAB)检出率为70.7%,CRAB和碳青霉烯耐药铜绿假单胞菌(CRPA)对黏菌素的敏感率超过99.0%,碳青霉烯耐药肠肝菌科细菌(CRE)对替加环素的敏感率为100.0%。结论该院临床重要耐药菌株的检出率较高,耐药菌株的出现为临床抗感染治疗带来挑战,应积极采取感染控制措施。

三株双歧杆菌鉴定及遗传特征分析

目的对3株双歧杆菌用不同方法进行鉴定,并结合药物敏感性测试结果和全基因组测序(WGS)数据,对菌株获得性耐药元件及其可转移性进行分析。方法分别采用生化、基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)及WGS方法对3个益生菌产品中分离的3株双歧杆菌进行鉴定,测试菌株对氨苄西林等8种抗生素的敏感性,结合WGS数据,使用在线数据库分析菌种携带的获得性耐药元件,并对其可转移性进行分析。结果对3株双歧杆菌,生化方法可给出较为可靠的属水平鉴定结果;MALDI-TOF MS方法可给出可靠的种水平鉴定结果;基于WGS结果计算平均核苷酸一致性和DNA-DNA杂交值,可给出可靠的种和亚种水平鉴定结果,结合wgSNP及wgMLST分析,3株菌鉴定结果均为动物双歧杆菌乳亚种。3株菌对四环素和庆大霉素均呈现敏感性下降表型,其中庆大霉素敏感性下降与厌氧菌种转运系统缺乏有关,为固有表型;3株菌染色体上均携带tet(W),且其下游均存在IS5序列,说明该耐药基因可能为可转移元件,经与GenBank中58个来自不同种属细菌的tet(W)对比发现,动物双歧杆菌乳亚种中的tet(W)序列具有一定的保守性。结论双歧杆菌的鉴定与遗传特征分析应结合生化、MALDI-TOF MS、抗生素敏感性和WGS等技术综合开展,尤其WGS技术不仅可以对双歧杆菌进行亚种水平的精准鉴定,还可以针对耐药元件及可转移性进行深入分析,为益生菌相关菌种产品的研发和监管、益生菌类保健食品行业的健康发展提供有力的技术支撑。

类器官模型在胰腺癌中的研究进展

目的总结类器官模型在胰腺癌中的临床应用情况及未来应用前景。方法检索近几年来国内外关于类器官模型在胰腺癌中的相关研究的文献并进行综述。结果近年来,胰腺癌类器官模型的构建主要采用手术切除的癌组织、细针穿刺抽吸活检获得的癌组织或人多能干细胞衍生的上皮细胞构建;根据胰腺癌类器官保留了原发肿瘤的组织学、结构异质性等特点来进行胰腺癌生物学标志物的筛选,如细胞外囊泡中的微小RNA、glypican-1、膜联蛋白A6以及蛋白质生物学标志物细胞角蛋白7和20、细胞肿瘤抗原p53、Claudin-4、糖类抗原19-9等。根据类器官模型能够维持原发肿瘤组织特性的研究结果以及胰腺癌类器官药物敏感性数据与胰腺癌患者的临床结果之间存在高度相关性的结果提示,未来利用胰腺癌类器官进行的药物敏感性的数据可避免无效化学药物治疗,以提高治疗应答率和减轻化学药物毒性,可为胰腺癌患者合理选择个体化治疗方案。结论类器官模型用于胰腺癌生物学标志物筛选和类器官模型与胰腺癌个体化治疗及药物敏感性测试方面有较多研究成果,它可在体外模拟胰腺癌发病和进展的复杂病理生理学特征,并保留了原发肿瘤细胞的生理特性和基因表型,有望成为发现胰腺癌生物学标志物、测试药物敏感性及制定个体化胰腺癌治疗方案的新型平台,可进一步促进胰腺癌的研究进展。

新型分枝杆菌荧光报告噬菌体的构建及其在结核分枝杆菌药敏检测中的应用

目的设计基于纳米荧光素酶(Nluc)的新型荧光报告系统,构建新型分枝杆菌荧光报告噬菌体ΦFN,分析该噬菌体检测结核分枝杆菌耐药性的能力。方法构建P_(furAma)启动子控制表达的Nluc荧光报告系统,将其整合至耻垢分枝杆菌基因组中,测试其在分枝杆菌的荧光报告能力;随后将P_(furAma)-nluc报告系统整合到TM4分枝杆菌噬菌体基因组中,构建新型分枝杆菌荧光报告噬菌体ΦFN;通过调整药物预处理时间、感染时间等条件,建立ΦFN检测分枝杆菌耐药性的快速检测流程,在96孔板中检测52株已知耐药性的结核分枝杆菌临床分离株对3种一线抗结核药物耐药的耐药性。结果整合型表达荧光报告系统P_(furAma)-nluc的耻垢分枝杆菌可报告下限达到100菌落形成单位(colony-forming unit,CFU),低于已报道的P_(left)启动子表达nluc系统。新型分枝杆菌荧光报告噬菌体ΦFN可通过孔板读值法在24 h内检测到分枝杆菌的存在,检测下限达到100 CFU。药物与待测菌预培养48 h后再加入噬菌体孵育24 h,敏感菌在105 CFU以下均无法检测到荧光信号,可有效区分敏感株并进行耐药性的快速检测。以罗氏药敏实验作为金标准,使用ΦFN检测52株结核分枝杆菌临床菌株对利福平、异烟肼和链霉素的耐药性,检测准确性分别是51/52、48/52、49/52。结论利用新型重组荧光报告噬菌体检测结核分枝杆菌对利福平、异烟肼、链霉素的耐药性具有极高的准确性,报告时间仅需3 d,有望成为一种快速简便的结核分枝杆菌耐药性检测新方法。