葡萄糖转运蛋白1(GLUT-1)抑制剂BAY-876体内活性的正电子发射型计算机断层显像(PET)检测

目前,葡萄糖转运蛋白(glucose transporter,GLUT)不仅是细胞摄取葡萄糖的功能与物质保障,同时也是恶性肿瘤抗肿瘤药物治疗的新型干预靶点。建立GLUT抑制剂的体内活性评价方法具有重要意义。利用正电子发射型计算机断层显像检测仪(positron emission computed tomography,PET)对小动物肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)肿瘤模型进行PET检测,建立GLUT抑制剂的小动物体内活性检测方法。在HCC细胞系中检测GLUT-1的表达,选取GLUT-1表达水平最高的细胞系接种BalB/c免疫缺陷动物皮下,形成免疫缺陷动物皮下肿瘤模型。连续三日口服灌胃给药,给予动物5 mg/kg的GLUT-1抑制剂BAY-876后,进行PET检测。动物行尾静脉注射200μCi的核素探针^(18)F-FDG,约30 min后进行PET检测。在此基础上,使用盖革计数器检测动物肿瘤与血液的放射性强度比较。在所选细胞系中,MHCC-97H细胞中GLUT-1的表达显著高于其他细胞系,BAY-876治疗动物能够显著抑制MHCC-97H皮下肿瘤组织对18F-FDG的摄取。GLUT-1抑制剂BAY-876能够显著抑制HCC细胞对葡萄糖的摄取,成功建立了利用PET检测GLUT抑制剂动物体内活性的PET检测方法。

近交系小鼠C57BL/10和C57BL/6的全基因组学差异研究

目的:利用全基因组测序方法比较近交系小鼠C57BL/10和C57BL/6的基因组差异,并筛选免疫应答差异基因,对建立药物体内活性评价动物模型具有重要参考意义。方法:采用Illumina Hiseq 2500测序平台对近交系小鼠C57BL/10进行全基因组测序,与近交系小鼠C57BL/6参考全基因组进行比对。将变异检测得到的SNP位点,去掉同义突变之后,利用NCBI中BioMart进行功能注释。提取出免疫相关的转录本ID、基因ID和功能注释的信息,并与近交系小鼠C57BL/6参考全基因组进行比对。结果:获得C57BL/10小鼠原始数据量80.871G,过滤后的有效数据量79.322G,通过与C57BL/6小鼠参考基因组比对和基因功能分类,筛选出4个免疫应答差异基因。结论:本研究发现近交系小鼠C57BL/10和C57BL/6基因组的免疫应答基因存在显著差异。在分析中筛选出4个小鼠免疫应答差异基因,为建立生物制品体内评价实验动物模型和标准化提供了新的线索和技术手段。

近交系小鼠C57BL/6和C57BL/10的转录组差异研究

目的:对近交系小鼠C57BL/6和C57BL/10进行转录组测序,对比其转录组差异,发现免疫反应相关差异基因,为药物体内活性评价动物选择提供参考。方法:采用Illumina Hiseq 2000测序平台进行测序,通过短序列分析获取转录本,通过基因功能分类(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)数据库进行测序结果分析。结果:获得38 553 614个C57BL/6小鼠的原始序列和37 721 318个C57BL/10小鼠的原始序列。获得118 002个转录本,注释了46 193个差异基因。38 106个转录本注释到2 196个GO分类中,GO分类主要分为3类:细胞成分,分子功能和生物过程。1 600个转录本注释到254个KEGG通路中。另外,发现了4 651个单核苷酸(SNP)位点。结论:通过二代测序方法发现近交系小鼠C57BL/6和C57BL/10转录组存在显著差异基因。在KEGG通路分析中筛选了一系列与小鼠免疫应答相关的差异基因,为建立小鼠免疫评价模型积累了数据,对药物实验动物体内活性检测分析具有参考意义,为生物制品评价用实验动物的标准化提供技术支撑。