禽致病性大肠杆菌中四种抗氨基糖苷类药物耐药基因的分子流行病学调查

氨基糖苷类药物曾经是临床最为常用而有效的抗生素,长期应用与不合理使用使得该药物效果不尽理想。本研究参照GenBank中耐药基因相关序列,设计引物,结果从禽源大肠杆菌基因组中扩增出4种抗氨基糖苷类药物基因aadA1、strA、strB、aph(3′),经pGEX-T-easy和pET32a载体克隆和序列分析,证明扩增获得的基因序列与GenBank中参考序列同源性达到97%以上。对分离保存的216株禽致病性大肠杆菌进行氨基糖苷类药物耐药基因的分子流行病学检测,结果表明:aadA1阳性率高达49.1%,strA和strB的阳性率分别为56%和65.7%,aph(3′)的阳性率为16.2%;近三分之二的被检菌株携带有2种以上氨基糖苷类药物耐药基因。药敏试验结果显示所有被检菌株对链霉素耐药率为68.9%,而对阿米卡星的耐药率为38.9%。本研究结果说明禽类细菌的耐药性与相关耐药基因的检出率基本呈正相关,临床日益严重的耐药现象与耐药基因的普遍存在有着很大的关系,提示控制禽源耐药细菌对人类健康与卫生安全有重要意义。

儿科临床分离株中质粒介导喹诺酮类药物耐药基因qnr在产ESBLs或AmpC酶大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中的流行

目的了解质粒介导喹诺酮类药物耐药基因qnr在儿科临床分离产ESBLs或AmpC酶大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中的流行情况与分布特点。方法琼脂稀释法测定抗生素MIC;PCR检测喹诺酮类药物耐药基因qnrA、qnrB和qnrS及相应ESBLs和AmpC酶基因;接合试验检测qnr基因是否可通过质粒转移;肠杆菌基因间重复一致序列-聚合酶链反应(ERIC-PCR)检测qnr阳性菌株的同源性。结果702株儿科临床分离产ESBLs或AmpC酶大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌共检出含qnr基因菌株99株(14.1%),其中qnrA、qnrB和qnrS的检出率分别为1.1%(8株)、4.0%(28株)和9.5%(67株),其中3株菌同时含有qnrA和qnrB,1株含qnrB和qnrS。在99株qnr阳性菌株中,有88株(88.9%)检测到至少1种bla基因。20株qnr阳性菌株通过接合试验传递成功。相对于受体菌,接合子对环丙沙星的MIC提高了2～125倍。ERIC-PCR显示99株qnr阳性菌株有不同的DNA条带,提示其可能属于不同的克隆株。结论在702株儿科临床分离产ESBLs或AmpC酶大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中,质粒介导喹诺酮类药物耐药基因qnr携带率为(14.1%),qnrS为最流行的亚型。88.9%的qnr阳性株携带1种或1种以上bla基因。

2012-2013年山东省禽源大肠杆菌中质粒介导喹诺酮类药物耐药基因的检测

为研究近年来山东省禽源致病性大肠杆菌中质粒介导喹诺酮类药物耐药（plasmid-mediated quinolone resistance， PMQR）基因的基因型分布，及其对喹诺酮类抗生素的耐药性的影响，分别采用针对qnrA、qnrB、qnrC、qnrD、qnrS、oqxA、oqxB与qepA 8个耐药基因的通用引物，对93株2012-2013年分离自山东省的禽源大肠杆菌进行PCR检测，并对其进行了5种喹诺酮类药物的药敏试验。结果表明山东省禽源大肠杆菌对5种喹诺酮类抗生素均产生了较高耐药性（50.54%-86.30%）；PMQR基因携带率达到60.21%（56/93），其中26.88%（25/93）的菌株携带2种PMQR基因，1.07%（1/93）的菌株携带3种PMQR基因；qnrA、qnrB、qnrC、qnrD与qepA基因未被检测到，qnrS、oqxA和oqxB基因在山东省禽源致病性大肠杆菌中分布较为广泛，其检出率依次为22.58%（21/93）、40.86%（38/93）和24.73%（23/93）。

犬源大肠杆菌质粒介导的喹诺酮类药物耐药基因的检测及药物敏感性分析

采用PCR方法检测了102株犬源大肠杆菌中质粒介导的喹诺酮类药物耐药(plasmid-mediated quinolone resistance,PMQR)基因的分布,并采用微量肉汤稀释法测定了6种抗菌药物对犬源大肠杆菌的最小抑菌浓度(MIC)。在被检测的8种PMQR基因中,仅有oqx A、oqx B、qnr S这3种耐药基因被检测出,检出率分别为9.80%、11.76%和14.70%,其中同时含有2种耐药基因的菌株检出率为8.82%,同时含有3种耐药基因的菌株检出率为4.90%;犬源大肠杆菌对喹诺酮类药物已经具有较高的耐药性,其对恩诺沙星、环丙沙星和氧氟沙星的耐药率分别达到了71.57%、64.71%、48.04%。

多药物耐药基因多态性与缺血性脑卒中患者阿司匹林抵抗的相关性分析

目的:探讨多药物耐药基因多态性与缺血性脑卒中患者阿司匹林抵抗的相关性。方法:选取缺血性脑卒中患者230例,根据其对阿司匹林的敏感程度,将阿司匹林敏感(AS)80例设为对照组,阿司匹林抵抗(AR)150例设为研究组,对两组多药物耐药基因进行检测,分析其与缺血性脑卒中患者阿司匹林抵抗的相关性。结果:研究组吸烟患者概率、空腹血糖水平以及总胆固醇水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),研究组性别、年龄、高血压病史、饮酒史、三酰甘油水平、高密度脂蛋白以及低密度脂蛋白水平与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05);研究组等位基因检测数量为158,对照组组等位基因检测数量为446,其中研究组C3435T位点的T等位基因频率及CT+rI-11基因型高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);阿司匹林抵抗独立危险因素包含吸烟史、基因型、空腹血糖、总胆固醇(P<0.05)。结论:C3435T基因多态性与阿斯品抵抗有关,吸烟史、基因型、空腹血糖以及总胆固醇含量是阿司匹林抵抗的独立危险因素。

核酸杂交方法:测定与研究药物耐药基因扩散的应用

DNA-DNA 杂交法在生物学和医学方面应用的前景核酸杂交法是当代生物学最革命和公认的方法之一。它是建立在分子的单链互补生成双链杂交特性的基础上,杂交可以在溶液中或固体底垫如硝基纤维或尼龙膜上进行,在后一种情况下,需将 DNA 或消化及游离出核酸的细胞悬乳液固定在膜上,将双链的DNA 变性,生成的单链分子与膜共价结合。当加上 DNA 探针即标记的变性核酸分子时,则在有一定同源性的探针与固定在膜上的DNA 之间产生杂交。探针可以应用研究者感兴趣的基因或任何其它的 DNA 片段,以及基于已知核苷酸序列的 DNA 片段而合成的寡核苷酸。采用大小为10～40个核苷酸组成的合成寡核苷酸可以绝对准确地判断存在于生物材料中的必需基因或核苷酸都份。DNA

mcr-1基因阳性禽源性大肠埃希菌耐药基因研究

目的调查鲁中地区禽源性大肠埃希菌mcr-1基因的携带情况,了解mcr-1基因阳性禽源性大肠埃希菌对常用β-内酰胺类药物、氨基糖苷类药物、喹诺酮类药物耐药基因的携带情况,掌握其耐药性。方法收集2020年4月至2021年10月鲁中地区3家大规模养殖场302份健康活鸡、鸭肛拭子新鲜粪便,对分离的大肠埃希菌用聚合酶链反应(PCR)检测mcr-1基因的携带率。对mcr-1阳性大肠埃希菌,采用BD凤凰hoenix TM 100 NMIC/ID-4复合板鉴定菌种及进行药敏试验,采用PCR检测各种β-内酰胺类药物耐药基因、氨基糖苷类修饰酶耐药基因、16S rRNA甲基化酶耐药基因和质粒介导的喹诺酮类药物耐药基因。结果302份样品中共分离出291株禽源性大肠埃希菌,其中27株携带mcr-1基因,mcr-1基因携带率为9.3%。27株mcr-1基因阳性禽源性大肠埃希菌中:超广谱β-内酰胺酶(ESBL)基因CTX-M-14、CTX-M-15、TEM-1携带率分别为100.00%(27/27)、70.37%(19/27)、74.07%(20/27);质粒介导AmpC酶耐药基因CMY-2携带率为14.81%(4/27);未检出bla SHV、bla DHA、OXA等β-内酰胺类药物相关耐药基因;未检出碳青霉烯酶基因;16S rRNA甲基化酶耐药基因rmtB及氨基糖苷类修饰酶耐药基因aac(6′)-Ⅰb-cr、ant(3″)-Ⅰ的携带率分别为25.93%(7/27)及25.93%(7/27)、92.59%(25/27);喹诺酮类药物耐药基因qnrS的携带率为81.48%(22/27),未检出qnrA、qnrB基因。对多黏菌素B、头孢噻肟、头孢西丁、左氧氟沙星、复方磺胺甲噁唑表现出了100.00%耐药,对头孢吡肟、头孢他啶、氨曲南、哌拉西林/他唑巴坦、阿米卡星和庆大霉素的耐药率分别为85.19%、33.33%、62.96%、14.81%、25.93%和77.78%,未出现对碳青霉烯类药物耐药的菌株。结论禽源性大肠埃希菌mcr-1基因的携带率为9.3%,是引起多黏菌素耐药的主要耐药机制。mcr-1基因阳性禽源性大肠埃希菌同时携带多种耐药基因,表现出多重耐药的特征。

宏基因组二代测序技术在微生物群抗微生物药物耐药基因研究中的应用现状和研究进展

抗微生物药物耐药性(antimicrobial resistance,AMR)是一个跨地区、跨领域和跨学科问题,涉及临床医学、动物医学、环境健康学及政策研究等,全球各地均面临着严峻的AMR局面。随着生物技术的发展,宏基因组二代测序技术(metagenomic next generation sequencing,mNGS)的出现为抗微生物药物耐药基因(antibiotic resistance genes,ARGs)的研究带来了巨大突破和转机。本文阐述了研究AMR的重要性和mNGS技术的发展现状,分别总结了mNGS技术在人、动物和环境领域ARGs研究的应用现状,并对基于宏基因组测序的ARGs在人-动物-环境界面的多生境和多层面研究进行了展望。

多药物耐药基因多态性与缺血性脑卒中患者阿司匹林抵抗的相关性

目的 探讨多药物耐药（ABCB1/MDR1）基因多态性与缺血性脑卒中患者阿司匹林抵抗（AR）的关系。方法 纳入2014年9月至2016年5月在青岛大学附属医院神经内科因脑梗死住院的患者300例，根据血栓弹力图（TEG）结果将其分为阿司匹林抵抗（AR）组和阿司匹林敏感（AS）组。采用聚合酶链反应–限制性片段长度多态性技术（PCR–RFLP）和直接测序方法对ABCB1基因C1236T、G2677T/A、C3435T 3位点进行基因多态性检测。结果 C1236T、G2677T/A、C3435T两两间分别存在连锁不平衡（D′＝0.8；r2＝0.9）。位点C3435T T的等位基因频率在AR组和AS组中分别为57.3%和43.1%，差异有统计学意义（χ2＝9.143，P＝0.002），且AR组中（CT＋TT）基因型高于AS组，差异亦有统计学意义（χ2＝4.369，P＝0.037）。而C1236T和G2677T/A等位基因频率及基因型分布在两组间差异均无统计学意义。对3位点所构建的单倍型进行分析，单倍体（C–T–T）的OR值为1.602 （χ2＝5.374，P＝0.02），单倍体（C–G–C）的OR值为0.495（χ2＝8.775，P＝0.003），单倍体（T–G–C）的OR值为3.010 （χ2＝5.846，P＝0.015），单倍体（T–T–T）的OR值为3.308（χ2＝4.650，P＝0.031）。结论 C3435T基因多态性与缺血性卒中患者AR有关。单倍体（C–T–T，T–G–C，T–T–T）亦与缺血性卒中患者AR发生有关。

耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌抗菌药物及消毒剂耐药基因研究

目的了解耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)抗菌药物及消毒剂耐药基因流行病学状况。方法对40株MRCNS菌进行mecA、aac(6′)/aph(2″)、aph(3′)-Ⅲ、ermA/B/C、tetM、qacA/B检测。结果40株MRCNS菌mecA、aac(6′)/aph(2″)、aph(3′)-Ⅲ、ermA/B/C、tetM、qacA/B基因阳性株分别为39、32、15、30、2、6株,阳性率分别为97.5%、80.0%、37.5%、75.0%、5.0%、15.0%;其中同时检出mecA基因、aac(6′)/aph(2″)/和(或)aph(3′)-Ⅲ基因、ermA/B/C基因26株(65.0%)。结论65.0%MRCNS菌已同时携带mecA基因、aac(6′)/aph(2″)/或aph(3′)-Ⅲ基因、ermA/B/C基因。

禽源大肠杆菌β-内酰胺类耐药基因检测与耐药相关性分析

为了研究禽源大肠杆菌分离株对β-内酰胺类药物的耐药性与耐药基因相关性,以K-B纸片法对禽源34株大肠杆菌分离株进行氨苄西林和头孢唑啉药物敏感试验;应用PCR技术对β-内酰胺类耐药基因进行检测。结果表明:blatem-1和bla CMY-2阳性率分别为73.5%和52.9%,药敏试验结果显示所有被检菌株对氨苄西林耐药率为67.6%,而对头孢唑啉的耐药率为41.1%。本研究结果说明禽类细菌的耐药性与相关耐药基因的检出率基本呈正相关,临床日益严重的耐药现象与耐药基因的普遍存在有着很大的关系,提示控制禽源耐药细菌对人类健康与卫生安全有重要意义。

牛源大肠杆菌质粒介导喹诺酮类耐药基因的检测分析

为研究近年来新疆地区牛源大肠杆菌中质粒介导喹诺酮类药物耐药基因的分布及其对喹诺酮类抗生素的耐药情况,本研究于2016-2018年从新疆石河子、沙湾、奎屯、玛纳斯和伊犁5个地区12个规模化奶牛场分离出116株牛源大肠杆菌,药敏试验检测其耐药性,同时利用PCR扩增PMQR耐药基因。药敏试验结果显示,62.93%的菌株对氨苄西林耐药,耐药率最高。对链霉素、四环素、卡那霉素和恩诺沙星的耐药率依次为56.90%、54.31%、43.10%和42.24%。对头孢他啶和头孢噻肟的耐药率较低,分别为7.76%和11.21%。分离菌主要携带qnrA、qnrS和aac(6′)-Ⅰb-cr 3种耐药基因;116株大肠杆菌中有31株携带PMQR的耐药基因,检出阳性率为26.72%,其中26株仅携带1种PMQR耐药基因,占所有菌株的22.41%,4株携带2种PMQR耐药基因,占所有菌株的3.45%,1株携带3种PMQR耐药基因,占所有菌株的0.86%。综上所述,新疆地区牛源大肠杆菌质粒介导喹诺酮类药物基因主要为qnrA、qnrS和aac(6′)-Ⅰb-cr 3种,且对恩诺沙星、诺氟沙星、环丙沙星、左氧氟沙星均产生不同程度的耐药性。

潍坊市肉鸭源大肠杆菌喹诺酮类药物耐药性的检测

为研究近年来山东省肉鸭源致病性大肠杆菌对喹诺酮类药物的耐药性,本研究将2010年以来分离自山东省潍坊市发病肉鸭的232株大肠杆菌进行了洛美沙星、培氟沙星、氧氟沙星、诺氟沙星等4种喹诺酮类药物的药敏试验,并对其进行了质粒介导喹诺酮类药物耐药基因的PCR检测。结果表明,山东省潍坊市肉鸭源大肠杆菌对4种喹诺酮类抗生素均产生了较高耐药性(54.31%~82.760%),质粒介导喹诺酮类耐药(PMQR)基因携带率达到58.19%(135/232),26.29%(61/232)的菌株携带两种产PMQR基因,1.72%(4/232)的菌株携带三种PMQR基因。未检测到qnr A、qnr B、qnr C、qnr D与Qep A基因,qnr S、oqx A和oqx B基因在山东省禽源致病性大肠杆菌中分布较为广泛,其检出率依次为19.83%(46/232)、41.81%(97/232)和26.29%(61/232)。

乳腺癌抗雌激素药物耐药蛋白基因在子宫内膜样腺癌中的表达及意义

目的探讨乳腺癌抗雌激素药物耐药蛋白基因（BCAR1）在子宫内膜样腺癌中的表达及其意义。方法应用免疫组织化学方法检测50例子宫内膜样腺癌和30例子宫内膜单纯性增生组织中BCAR1的表达，并检测雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）在子宫内膜样腺癌的表达。分析BCAR1的表达与子宫内膜样腺癌临床病理特征以及ER、PR的相关性。结果BCAR1在子宫内膜样腺癌组织中的表达[64．0％（32／50）]高于子宫内膜单纯性增生组织中的表达[40．0％（12／30）]，差异有统计学意义（x2=4．364，P=0．037）；在子宫内膜样腺癌中，BCAR1的高表达与患者高龄、肿瘤细胞低分化和ER的阳性表达相关（X2值分别为6．272、5．640、4．217，r值分别为0．354、0．366、0．290；P均〈0．05）。结论BCAR1促进子宫内膜样腺癌的发生，并与肿瘤细胞低分化和ER表达状态呈正相关。

阴沟肠杆菌多重耐药基因及亲缘性分析

近年来阴沟肠杆菌已成为医院感染的重要病原菌，多重耐药日益严重，特别是对碳青霉烯类抗生素耐药株的出现令抗菌感染治疗相当困难。为了解本院临床分离的阴沟肠杆菌中抗菌药物耐药基因存在状况及菌株亲缘性，我们采用分子生物学等技术进行了研究。

mNGS检测革兰阳性菌耐药基因的临床应用

目的探讨宏基因组高通量测序(mNGS)检测革兰阳性菌耐药基因的临床应用。方法收集2021年4月1日-2022年4月1日南京医科大学第一附属医院呼吸与危重症医学科收治的249例呼吸道感染患者肺泡灌洗液标本微生物培养和mNGS检测结果,并进行革兰阳性菌耐药表型和抗菌药物耐药基因(ARGs)分析。结果249份肺泡灌洗液标本通过mNGS检测到10种革兰阳性菌,以肺炎链球菌、假肺炎链球菌和金黄色葡萄球菌为主;检出携带ARGs的革兰阳性菌4种,金黄色葡萄球菌ARGs有blaZ、mecA、mecR1、aac(6')-Ie-aph(2'')-Ia、ant(9)-Ia、tet(K)、tet(L);粪肠球菌ARGs有tet(M)、dfr(E);屎肠球菌ARGs有tet(M);肺炎链球菌ARGs有tet(M)。在3株携带ARGs的金黄色葡萄球菌中,青霉素耐药基因blaZ、甲氧西林耐药基因mecA、氨基糖苷类抗生素耐药基因aac(6')-Ie-aph(2'')-Ia可较好地预测耐药表型,四环素耐药基因tet(L)预测的耐药表型与传统药敏培养结果一致性较差。结论mNGS可检测出革兰阳性菌中ARGs,主要检出ARGs的革兰阳性菌有金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、屎肠球菌和粪肠球菌;金黄色葡萄球菌中检测到的耐药基因blaZ、mecA、aac(6')-Ie-aph(2'')-Ia可较好地预测耐药表型。mNGS检测ARGs预测耐药表型有一定临床应用价值。

深圳医生发现两个新型耐药基因

病人严重感染时使用碳青霉烯类抗生素后出现耐药细菌，这类药物就对治疗不起作用了，解决细菌耐药性问题已经是各国医务界的当务之急，深圳市第二人民医院日前宣布；该院检验科医生在全球率先发现了两个新的碳青霉烯类药物耐药基因，将有助减少耐药菌产生，世界基因库已将两个新基因入库并命名。