毛细管亲和电泳在药物-蛋白质结合研究中的应用

本文对毛细管亲和电泳的几种常用运行模式及数学模型在药物蛋白结合研究中的特点和应用进行了综述，其中包括手性拆分和免疫毛细管电泳，并展望了其应用前景。

亲和毛细管电泳及其在测定药物-蛋白质结合常数中的应用

药物与蛋白质的结合会影响药物在体内的过程及活性。平衡透析法和超滤法是测定药物 蛋白质结合常数的传统方法 ,但各有不足。近年来 ,随着毛细管电泳技术的不断发展 ,亲和毛细管电泳 (ACE)以其独特的优势 ,已被用于测定药物 蛋白质结合常数。本文阐述ACE定义、分类、原理及其在测定药物

FDA批准第一个与蛋白质相结合的微粒药

美国Pharmaceutical Partners(APP)和American Bioscience(ABI)两家公司1月7日宣布，美国FDA批准ABRAXANE(TM)注射剂用于治疗转移性乳癌(Metastatic Breast Cancer)，该注射剂是白蛋白相结合的注射液。此前证明，ABRAXANE(TM)与化疗相结合治疗乳癌没有效果，或者是用化疗辅助治疗6个月后又复发。

重组腺相关病毒-多聚嘧啶序列结合蛋白相关剪接因子对氧诱导视网膜新生血管形成的抑制作用

目的 观察重组腺相关病毒（rAAV）-多聚嘧啶序列结合蛋白相关剪接因子（PSF）对氧诱导视网膜新生血管的抑制作用.方法 7日龄C57BL/6J小鼠18只,随机分为正常组、rAAV-PSF注射组、rAAV注射组,各组均6只.蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组小鼠视网膜组织中PSF的表达.7日龄C57BL/6J小鼠48只随机分为正常组、氧诱导视网膜病变（OIR）模型组、OIR rAAV-PSF治疗组、OIR rAAV治疗组,各组均为12只.除正常组外,其余各组小鼠与哺乳母鼠共同置于氧浓度为（75±2）％的氧箱内饲养5d后转移至正常环境中饲养5d,建立OIR模型.12日龄时,OIR rAAV-PSF治疗组小鼠玻璃体腔注射病毒滴度为5×10^13pfu/ml的rAAV-PSF重组载体2μI; OIR rAAV治疗组小鼠玻璃体腔注射相同病毒滴度的单纯rAAV载体2μl.OIR模型组小鼠出氧箱后不作任何处理.石蜡切片苏木精-伊红染色并计数突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核;Western blot检测视网膜中VEGF蛋白表达含量.结果 正常组小鼠视网膜PSF蛋白表达与rAAV-PSF注射组比较,差异有统计学意义（F=16.05,P=0.001）,与rAAV注射组比较,差异无统计学意义（F=16.05,P=0.890）.正常组、OIR模型组、OIR rAAV-PSF治疗组、OIR rAAV治疗组突破内界膜的视网膜新生血管内皮细胞核数比较,正常组与OIR模型组差异有统计学意义（F=101.00,P=0.007）;rAAV-PSF治疗组与OIR模型组差异有统计学意义（F=101.00,P=0.002）;OIR rAAV治疗组与OIR模型组差异无统计学意义（F=101.00,P=0.550）.各组视网膜VEGF蛋白表达比较,正常组与OIR模型组差异有统计学意义（F=13.20,P=0.005）,OIR模型组与OIR rAAV-PSF治疗组差异有统计学意义（F=13.20,P=0.001）;OIR模型组与OIR rAAV组差异无统计学意义（F=13.20,P=0.071）.结论 rAAV-PSF玻璃体腔注射可以抑制OIR小鼠视网膜VEGF表达,从而抑制其新生血管生成.

Wortmannin对视网膜缺血再灌注后HIF-1α表达的影响

目的:探讨磷酰肌醇-3激酶(phosphatidylinositol-3 kinase,PI3K)途径在大鼠视网膜缺血再灌注后对低氧诱导因子(HIF-1α)表达的影响。方法:将磷酰肌醇-3激酶(PI3K)特异抑制剂Wortmannin(WT)注入大鼠玻璃体内,抑制PI3K活性为A组,玻璃体内注射等量林格液作为B组,空白对照组为C组,采用前房灌注生理盐水升高大鼠眼压到110mm Hg(1 kPa=7.5 mm Hg)持续1 h的方法制作实验性视网膜缺血再灌注损伤模型,于再灌注后0、2、6、8、12、24、48 h取材,行免疫组织化学法染色观察HIF-1α在视网膜细胞的阳性表达;并应用RT-PCR来检测HIF-1αmRNA的表达。结果:视网膜缺血再灌注6、8、12、24、48 h,视网膜神经节细胞层及内核层细胞出现HIF-1α阳性表达且表达逐渐增加,12 h达到高峰,然后逐渐降低,预先玻璃体内注射PI-3K特异抑制剂Wortmannin(WT)的大鼠视网膜HIF-1α表达明显减弱,亦在12 h达到高峰,然后逐渐降低。结论:缺血再灌注后大鼠视网膜HIF-1α的表达是经过PI3K途径来实现,阻断PI3K途径,可以明显减少HIF-1α的表达,但从实验结果来看PI3K途径被阻断后并没有完全阻断HIF-1α的表达,由此猜测HIF-1α的表达可能存在多种途径。

慢病毒介导聚嘧啶束结合蛋白相关剪接因子对氧诱导视网膜病变小鼠视网膜新生血管的抑制作用

目的观察慢病毒介导聚嘧啶束结合蛋白相关剪接因子(PSF)对氧诱导视网膜病变(OIR)小鼠视网膜新生血管的抑制作用。方法5日龄C57BL/6J小鼠112只随机分为正常对照组、单纯OIR模型组、OIR模型+慢病毒空载体处理组(以下简称Vec组)及OIR模型+PSF慢病毒处理组(以下简称PSF组),分别为16、32、32、32只。小鼠7日龄时,正常对照组小鼠常规环境饲养;单纯OIR模型组、Vec组及PSF组小鼠建立OIR模型。小鼠12日龄时,Vec组、PSF组小鼠玻璃体腔分别注射滴度为1×1011 TU/ml的空载体病毒或PSF慢病毒1μl。正常对照组和单纯OIR模型组小鼠不再做任何处理。小鼠17日龄时,采用HE染色计数突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核;作视网膜铺片,测量各组小鼠视网膜无灌注区相对面积;采用实时定量PCR检测各组小鼠视网膜中NF-E2相关因子2(Nrf2)和血红素氧合酶1(HO-1)的mRNA相对表达量;采用Western blot检测各组小鼠视网膜中Nrf2、HO-1及PSF的蛋白相对表达量。组间比较采用单因素方差分析。结果正常对照组、单纯OIR模型组、Vec组、PSF组小鼠突破内界膜的血管内皮细胞核数分别为0.00、14.36±5.50、15.67±4.96、8.13±2.09个;视网膜无灌注区面积分别为0.00%、(35.71±2.81)%、(36.57±4.53)%、(15.33±4.75)%。4组间小鼠突破内界膜的血管内皮细胞核数及视网膜无灌注区面积比较,差异均有统计学意义(F=24.87、165.70,P<0.05)。组间两两比较,单纯OIR模型组、Vec组较正常对照组突破内界膜的血管内皮细胞核数增多,视网膜无灌注区面积增大;PSF组较单纯OIR模型组、Vec组突破内界膜的血管内皮细胞核数减少,视网膜无灌注区面积减小,差异均有统计学意义(P<0.05)。实时定量PCR及Western blot检测结果显示,4组间小鼠视网膜Nrf2、PSF mRNA相对表达量(F=53.66、83.54)以及Nrf2、HO-1、PSF蛋白相对表达量(F=58.38、52.69、24.79)比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。组间两两比较,单纯OIR模型组、Vec组小鼠视网膜Nrf2、PSF mRNA相对表达量及Nrf2、HO-1、PSF蛋白相对表达量较正常对照组明显降低,PSF组小鼠视网膜Nrf2、PSF mRNA相对表达量及Nrf2、HO-1、PSF蛋白相对表达量较单纯OIR模型组、Vec组明显增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论慢病毒介导的PSF可通过上调Nrf2及HO-1的表达抑制OIR小鼠视网膜新生血管形成。