任务驱动法在天然药物资源开发利用课程中的应用

对天然药物资源开发利用课程的教学方法进行初步改革。教学过程结合学生特点,设计任务驱动法教学,实现"自主合作学习"的教学改革思路,使学生从被动接受转变为主动寻找并解决问题,培养学生的创新能力,提高其综合能力。

HPLC测定不同产地马尾松等松叶中莽草酸的含量

目的：建立松叶中莽草酸的HPLC含量测定方法,为松叶药材质量标准的建立提供参考。同时对不同产地马尾松等松叶中莽草酸的含量进行比较研究。方法：采用HPLC法,使用Ultimate XB-C18（4.6 mm×250 mm,5μm）色谱柱,以甲醇-0.5%磷酸（2∶98）为流动相,流速1.0 m L·min^-1,柱温25℃,检测波长213 nm。通过优化参数（溶剂体积、浸泡时间、提取次数）确定莽草酸含量测定前处理的最佳条件,并测定不同产地马尾松及同一产地不同种属松叶中莽草酸的含量。结果：莽草酸的含量测定前处理方法为加水60 m L超声提取50 min;松叶莽草酸在0.094-1.875μg范围内线性关系良好（r=0.999 8）;平均回收率为98.8%（RSD=0.56%）;方法精密度及重复性良好,RSD均小于2%。不同种属松叶中莽草酸的含量为2.62%-0.07%,其中红松、马尾松较高,落叶松最低;在所测的不同产地马尾松中莽草酸的含量为4.28%-2.00%,其中广西马尾松中莽草酸含量最高,河南产马尾松含量最低。结论：本方法操作简便,定量准确,重现性好,可用于松叶药材中莽草酸的含量测定;不同种属松叶中,马尾松含量较高;不同产地马尾松中莽草酸含量有一定差异,其中广西、四川、浙江、江苏产马尾松中莽草酸含量较高。

猪肺组织糖胺聚糖的分离纯化及其结构鉴定

目的:从猪肺组织(去除气管)中提取分离糖胺聚糖并确定其种类和结构特点。方法:采用胰蛋白酶和木瓜蛋白酶联合酶解提取糖胺聚糖,利用Q-Sepharose Fast Flow强阴离子交换柱层析进行分离纯化。采用醋酸纤维素薄膜电泳分析多糖的种类,高效凝胶渗透色谱与十八角激光散射仪联用法测定其绝对分子质量,采用SAX-HPLC法对酶解二糖进行细微结构分析。结果:从猪肺组织中获得透明质酸(HA)、硫酸乙酰肝素(HS)、硫酸软骨素B(CSB)和硫酸软骨素A(CSA)4种糖胺聚糖,其含量分别为690、490、480和370 mg·kg-1,绝对分子质量分别为40.7、64.3、28.6和26.5 k Da。其中,CSA组分与标准品CSA(牛气管来源)相比,4-硫酸化二糖和6-硫酸化二糖的摩尔比更大,电荷密度更高;而HS中含有结构新颖的△己糖醛酸-氨基葡萄糖(IV-H,△UA-Glc N)二糖,且其绝对分子质量(64.3 k Da)远高于标准品HS(17.3 k Da)。结论:猪肺组织中糖胺聚糖主要含有HA、HS、CSA和CSB,是糖胺聚糖开发的良好资源;其中HS含有高含量的自由氨基葡萄糖(Glc NH2),结构较为新颖,有可能开发成为一种新的药物。

不同品种沙蚕中氨基酸含量的HPLC测定及多元统计分析

目的:测定不同品种沙蚕中15种氨基酸含量并进行多元统计分析。方法:采用酸水解法制备水解氨基酸样品溶液,以异硫氰酸苯酯为衍生化试剂衍生后进行HPLC分析。采用CAPCELL PAK C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以0.1 mol·L^(-1)醋酸钠溶液(p H 6.5)-乙腈(93∶7)为流动相A,乙腈-水(8∶2)为流动相B,梯度洗脱,流速1.0 m L·min^(-1),柱温40℃,检测波长254 nm,进样量2μL。采用主成分分析法对不同品种沙蚕中15种氨基酸相对含量进行分析。结果:15种氨基酸在一定浓度范围内呈良好线性关系,线性相关系数r值均大于0.999 6,加样回收率(n=6)为96.1%~101.5%,氨基酸衍生溶液在12 h内稳定;氨基酸相对含量的主成分分析可以达到降维的目的,各品种沙蚕样品得到较好的区分。结论:所建立的条件方法可靠,精密度和重复性良好,可用于沙蚕中水解氨基酸含量的测定,主成分分析可用于揭示沙蚕的特征氨基酸,为沙蚕品质特征评价提供依据。