酵母菌生长与产人参皂苷β-葡萄糖苷酶的动力学模型

为理清酵母菌转化人参皂苷的生物过程特性和实现酵母菌连续转化人参皂苷,研究了酵母菌生长和产人参皂苷β-葡萄糖苷酶之间的关系,并建立了酵母菌生长与产酶动力学模型.结果表明,酵母菌培养6～24 h左右处于对数生长期,24～70 h为稳定期;且酵母菌从培养第14 h后开始产酶,至第70 h产酶活最高,值为4.59 U/mL.酵母菌生长与产酶之间的关系表现为中期合成型,即酶的合成在细胞生长一段时间以后才开始,而在细胞生长进入稳定期后,酶的合成也随之停止;酵母菌生长与产酶动力学模型能够较好地反映酵母菌转化人参皂苷的生物过程.

无花果曲霉发酵生产β-葡萄糖苷酶的动力学分析

在7L生物反应器的分批发酵中,通过对无花果曲霉UV-29液态发酵茵丝体的生长、基质消耗(以总糖计)及β-葡萄糖苷酶产生的特性研究,发现总糖是无花果曲霉生长的限制性基质;β-葡萄糖苷酶的增长趋势明显滞后于细胞生长的增长趋势,其发酵过程属于部分相关模型,即Ga-den提出的Ⅱ型发酵;基于Logistic方程,建立了发酵动力学模型,同时对实验数据与模型进行了验证比较,模型计算值与实验数据拟合良好。在7L生物反应器的最大茵体生物量(干重)达到1.17g/100mL,β-葡萄糖苷酶最高酶活达到22.25IU/mL。

药桑叶具α-葡萄糖苷酶抑制作用的活性部位筛选及酶动力学研究

本研究以新疆药桑叶为试验材料,采用不同极性试剂提取得到活性部位,以阿卡波糖为阳性对照,对硝基苯-α-D-葡萄糖苷(pNPG)为底物,筛选出对α-葡萄糖苷酶有较强抑制活性的部位,然后采用莱恩威弗-伯克模型进行酶促动力学研究。结果表明:从药桑叶中获取的药桑叶粗浸膏、石油醚萃取部位、乙酸乙酯萃取部位、正丁醇萃取部位及经萃取后的剩余水相部位对α-葡萄糖苷酶均具有抑制作用,其中剩余水相部位抑制作用最强,半抑制浓度(IC_(50))为0.39 mg/mL;酶促动力学试验中剩余水相部位与α-葡萄糖苷酶-底物复合物的解离常数K_(II)为0.29 mg/mL,与α-葡萄糖苷酶的解离常数K_(SI)为0.04 mg/mL,K_(II)>K_(SI),可判断出剩余水相部位的抑制类型为线性混合型可逆抑制,其竞争作用大于非竞争作用。

α-葡萄糖苷酶抑制剂微量筛选模型的正交法构建和筛选

目的为新药发现阶段α-葡萄糖苷酶抑制剂的筛选提供实用的微量筛选方法。方法以α-葡萄糖苷酶为酶源,96孔板为载体,在生理pH值和温度的条件下,用正交试验法研究酶浓度、底物浓度、反应时间对酶活力的影响,确定酶反应最佳条件。在确定筛选模型运行条件后,对阳性药物和492种贵州民族药植物提取物进行筛选研究。结果采用正交试验法成功构建了实用灵敏的α-葡萄糖苷酶抑制剂微量筛选模型。492种植物提取物筛选结果表明,有145种提取物的抑制率达到了50%以上。结论本研究构建的α-葡萄糖苷酶抑制剂微量筛选模型具备了简便、快速、灵敏、高效、经济的优点,适用于大规模筛选α-葡萄糖苷酶抑制剂。

α-葡萄糖苷酶抑制剂与常见药物联用的不良反应

α-葡萄糖苷酶抑制剂通过抑制小肠上段的α-葡萄糖苷酶延缓碳水化合物的吸收,从而改善餐后血糖。α-葡萄糖苷酶抑制剂在临床上常与其他降糖药物或心血管药物联合使用。本文通过系统地回顾国内外近年有关α-葡萄糖苷酶抑制剂与其他降糖药物或心血管药物联用的临床研究及病例报道,对药物联用安全性进行分析,以期为临床合理用药、保证临床用药安全提供科学依据。

α-葡萄糖苷酶抑制剂体外筛选方法的研究

以对-硝基苯-α-D-吡喃葡萄糖苷为底物,通过高效液相色谱定量分析水解产物对-硝基苯酚,确定α-葡萄糖苷酶的活性,建立新的α-葡萄糖苷酶抑制剂的体外筛选方法,为了提高筛选方法的灵敏度,对酶促反应条件进行了优化,并用阿卡波糖验证筛选方法的可靠性,结果测得阿卡波糖的IC50为2.07 mg/mL,与文献报道相近,说明该法可替代传统的Trembly法,并可用于α-葡萄糖苷酶抑制剂的高通量筛选。

生理药代动力学模型在创新药物评价中应用及其若干问题的思考

生理药代动力学模型(PBPK)是建立在机体生理学、解剖学、药物代谢和药物转运特性及其药物理化性质和药物与机体相互作用等基础上的。PBPK可以定量预测血浆和组织中药物和代谢产物浓度;病理状态下药代动力学;研究特殊人群中药代动力学;基于动物数据预测人体药代动力学;基于体外代谢和转运参数预测在体药代动力学;指导药物制剂评价;基于体外药物转运、代谢和药效学/毒性数据和PBPK-PD预测在体药效和毒性;预测药物相互作用;评估代谢酶和转运体对药物处置贡献等。本文旨在结合案例评述PBPK在创新药物评价中的应用及值得注意的若干问题。

茶多酚与α-葡萄糖苷酶结合动力学特征研究

通过组合抑制效应系数(combination index,CI)方法分别评估绿茶中代表性成分表儿茶素没食子酸酯(ECG)与其他茶多酚成分[表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)和没食子儿茶素没食子酸酯(GCG)]对α-葡萄糖苷酶的组合抑制效应机制;以ECG为研究对象,采用表面等离子共振技术(surface plasmon resonance,SPR)测定3种茶多酚成分与α-葡萄糖苷酶的结合动力学参数;采用课题组前期建立的药物在不搅动水层(α-葡萄糖苷酶邻近区域)的浓度-时间曲线数学模型评估茶多酚成分在α-葡萄糖苷酶附近的浓度变化曲线。利用课题组前期建立的药物-α-葡萄糖苷酶结合动力学预测模型,评估ECG不同给药过程与α-葡萄糖苷酶的药靶结合动力学动态过程。为了验证模型预测的准确性,以已上市化学药物阿卡波糖作为参照物,基于药靶结合动力学模型的预测结果与实际临床表现的差异来判断模型预测的准确性。通过药物-α-葡萄糖苷酶占有率数学模型评估得到不同给药过程ECG的药靶结合动力学特征曲线,间接证明了中药多成分组合协同作用和临床上连续服药发挥疗效用药特征的科学性和合理性。

沙棘粗多糖对α-葡萄糖苷酶活性影响及酶动力学的研究

目的:探讨中国沙棘粗多糖中α-葡萄糖苷酶抑制剂的体外酶动力学的特性。方法:利用酶-抑制剂筛选模型,选择沙棘粗多糖,通过改变其浓度、反应时间、pH条件、温度等进行体外酶学动力学研究。结果:沙棘粗多糖浓度在0.0098～0.625 g.L-1之间时,酶的抑制率随着浓度的增大而升高,IC50为0.031 g.L-1;浓度为0.625 g.L-1时抑制率达92.52%,且与酶结合迅速,酸碱范围广,热稳定性好。结论:沙棘粗多糖是一种高活性的竞争可逆性α-葡萄糖苷酶抑制剂,抑制常数Ki=5.26g.L-1。

UGT基因多态性对常见抗癫痫药物药代动力学影响的研究进展

目前癫痫的治疗仍以药物治疗为主,用药方法取决于药物的代谢特点及作用原理等。拉莫三嗪、奥卡西平、丙戊酸钠及卡马西平是常见的抗癫痫药物,其共同代谢途径是肝脏的葡萄糖醛酸化,该过程由尿苷-5'-二磷酸葡萄糖醛酸转移酶(UGT)催化,编码UGT同工酶的基因UGT1A6、UGT1A4、UGT1A9、UGT2B7等,其基因多态性可能直接影响这些药物的血药浓度和不良反应。研究UGT基因多态性对抗癫痫药物药代动力学的影响,能够为抗癫痫药物的个体化治疗提供参考。

兔血中5β-H-17-OH雄甾烷的气相色谱-质谱测定

建立了一种气相色谱 -质谱 (GC/MS)技术测定兔血中甲睾 (MT)的主要代谢物 5 β-H-1 7-OH雄甾烷(5β-MT)质量浓度的方法 ,为药物动力学等研究提供技术方法和数据。 6只兔口服 2 0 mg MT后按设定时间点取血 ,用甲醇提取血浆 1 m L,提取液用 β-葡萄糖醛酸苷酶于 5 5℃水解 3 h。去氢甲睾 (DHMT)为内标物进行定量计算。结果显示 :给药后每个血样中均含有 5 β-MT,计算每个时间点 6只兔的 5 β-MT平均质量浓度 ρ,发现在 3 h时达到峰值 2 .2mg/L 。

微量α﹣葡萄糖苷酶抑制剂筛选模型及抑制类型的判断方法

α-葡萄糖苷酶抑制剂能抑制碳水化合物水解,是高血糖人群降低餐后血糖的常用物质。本文基于α-葡萄糖苷酶-PNPG体外反应体系,建立了微量、快速的α-葡萄糖苷酶抑制剂筛选模型,该模型的主要参数如下:酶浓度为0.05 U/mL;底物浓度范围为0.05~1mM;反应温度为37℃;反应时间为6 min。以该模型检测了阿卡波糖对α-葡萄糖苷酶的抑制作用,并采用Lineweaver-Burk Plots、Eadie-Hofstee Plots、Hanes-Wolff Plots、Eisenthal-Cornish-Bowden Direct Plots、Non-linear Regression Analysis五种方法对该酶促反应的动力学数据进行了详细的分析。通过对数据处理的过程和结果的比较发现,该五种方法各有特点,各法所获得的V_(max)、K_m和K_i存在一定的差异,Non-linear-Regression Analysis法更加简便、合理及可靠,是酶动力学数据处理的首选方法。采用Non-linear-Regression Analysis法计算,该模型中酶促反应的V_(max)为3.91×10^(-6) mmol/min,K_m为0.12 mM,阿卡波糖的K_i为90μM。