亲和毛细管电泳及其在测定药物-蛋白质结合常数中的应用

药物与蛋白质的结合会影响药物在体内的过程及活性。平衡透析法和超滤法是测定药物 蛋白质结合常数的传统方法 ,但各有不足。近年来 ,随着毛细管电泳技术的不断发展 ,亲和毛细管电泳 (ACE)以其独特的优势 ,已被用于测定药物 蛋白质结合常数。本文阐述ACE定义、分类、原理及其在测定药物

高磁场响应性蛋白偶联磁性微球的制备及其在药物-蛋白结合常数测定中的应用

以蛋白偶联磁性微球(MB)为固相基质,通过磁场下快速分离蛋白和上清,高效液相色谱法测定上清中的药物浓度,建立了测定药物与蛋白结合常数(Ka)的新方法。选择对药物非特异性吸附较少和磁响应性较高的四氧化三铁磁性微球为载体,分别以1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐/N-羟基琥珀酰亚胺(EDC/NHS)及戊二醛作为偶联剂,制备牛血清白蛋白(BSA)包覆的磁性微球(MB-BSA),两种偶联方法所得磁性微球的蛋白最大键合量均为50μg/mg。以布洛芬为模型药物,研究药物在蛋白偶联磁性微球上的吸附行为及药物-蛋白的相互作用模式,优化药物吸附和解吸过程。利用高效液相色谱法测定经磁性分离的上清液中的游离药物浓度,通过罗森塔尔方程计算药物与BSA结合常数。最后将所建立的方法应用到色氨酸、安立生坦、瑞替加滨、罗氟司特等4种不同药物与蛋白的结合常数的测定,获得满意结果。

荧光光谱法研究克仑特罗与蛋白质的结合作用

应用荧光光谱法研究了水溶液中盐酸克仑特罗与牛血清白蛋白分子间的结合反应 ,测定了结合常数 (K =2 .84× 1 0 3 L mol)和结合位点数 (n =5 .65)。依据F ster非辐射能量转移理论 ,确定了授体 受体间的结合距离 (r=1 .69nm)和能量转移效率 ,采用同步荧光技术考察了盐酸克仑特罗对牛血清白蛋白构象的影响。利用盐酸克仑特罗对蛋白质荧光猝灭 。

微渗析-多壁碳纳米管修饰电极液相色谱电化学检测应用于药物与蛋白结合的研究

本文研制了一种新型的羧基化多壁碳纳米管修饰电极作为色谱电化学检测器。实验结果表明,6 巯基嘌呤浓度在4.0×10-7～1.0×10-4mol/L范围内与其峰电流呈良好的线性关系,检出限为2.0×10-7mol/L(S/N=3)。此外,将该方法与微渗析取样技术相结合,实现了对6 巯基嘌呤(6 MP)与牛血清白蛋白(BSA)相互作用的研究,测得6 MP与BSA的结合常数和结合位点数分别为3.97×103(mol/L)-1和1.51。

毛细管电泳-前沿分析法在药物-蛋白结合研究中的应用

介绍了毛细管电泳-前沿分析法(CE-FA)的原理、特点以及求解药物-蛋白结合常数的方法,综述了它在药物-蛋白结合研究中的应用及研究概况.阐明了CE-FA方法的优缺点及其广阔的应用前景.

用于输送肽类及蛋白质类药物的新的药物传输系统展示出前景

澳大利亚的科学家发现了一种简单的、花费不多但行之有效的方法,用这种方法可以解决抗原或肽激素一类的蛋白质药物对人与动物的口服问题。这种方法就是使用维生素B12。Biotechnology Australia P/L的Greg Russell-Jones及其同事将维生素B12

毛细管电泳法测定胺类手性药物结合常数

采用毛细管区带电泳法,在20℃温度下,选择含不同浓度高磺化-β-环糊精(HS--βCD)磷酸盐缓冲溶液(磷酸盐浓度50 mmol/L,pH2.50),分别试验了HS--βCD与伯胺、仲胺和叔胺三种胺类手性药物萘乙胺、盐酸异丙肾上腺素和扑尔敏的分离情况.采用双倒数法求解结合常数,结果表明HS--βCD与叔胺类药物扑尔敏的结合常数最大,并对实验结果进行了讨论.

酸性铬蓝K在蛋白质大分子上Langmuir吸附聚集及应用

用微相吸附 -光谱修正 (MPASC)技术研究蛋白质 (BSA)与酸性铬蓝K(ACBK)探针分子间的相互作用。通过pH3.5的介质中蛋白质与酸性铬蓝K反应的光谱研究 ,测定了结合产物的物理化学参数 :结合比为n(ACBK)∶n(BSA)=62∶1,平衡常数KBSA -ACBK=2.2×105。BSA -ACBK摩尔吸收系数ε584=3.9×105L·mol -1·cm -1。该吸附反应用于蛋白质样品测定 ,结果良好。

人工智能在蛋白质-配体结合亲和力预测中的研究进展

蛋白质与配体的结合在生命过程中发挥重要作用,计算蛋白质-配体结合亲和力(protein-ligand binding affinity, PLBA)有助于解析蛋白质功能、筛选与蛋白靶点结合的药物以及进行酶的改造等。近年来,人工智能(artificial intelligence,AI)发展迅速,因其特征提取能力强、算法准确度高、计算速度快等优势,已广泛应用于PLBA预测。本文介绍了AI预测的建立过程、相关资源、应用场景以及面临的挑战和潜在解决办法,为相关研究提供借鉴。

β-环糊精与青蒿素类药物非共价复合物的电喷雾质谱研究

采用电喷雾飞行时间质谱(ESI-TOF-MS)技术,对β-环糊精与3种青蒿素类药物所形成的复合物进行研究,在正离子检测方式下,将β-环糊精与青蒿素类药物等体积比混合后直接进样,然后利用源内碰撞诱导解离(CID)技术对其复合物进行分析。实验表明,在气相中,该非共价复合物可以稳定存在,其化学计量比分别为1:1和2:1。运用该法测定了1:1包络物的结合常数,考察了质谱条件及溶液条件对形成包络物的影响,通过比较结合常数的大小,探讨了β-环糊精与青蒿素类药物在气相状态下的作用方式。

应用机器学习方法构建药物分子解离速率常数的预测模型

越来越多的研究表明:药物分子与靶标分子的结合动力学性质与其在体内的药效有很强的相关性。因此,以改善结合动力学性质为导向的分子设计为药物研发提供了新的思路。本工作的研究目标在于得出预测药物分子解离速率常数(koff)的通用型定量结构-动力学关系(QSKR)模型。我们从文献中收集了406个配体分子的解离速率常数实验值,采用分子模拟方法构建了所有配体与靶蛋白复合物的三维结构模型。然后基于蛋白-配体原子对描述符,采用随机森林算法来构建预测配体分子解离速率常数的QSKR模型。通过探索不同条件(如距离区间,划分区间宽度和特征选择标准)下产生的描述符集合对模型预测精度的影响,确定当采用距离阈值为15?、划分区间宽度为3?、特征选择方差水平为2时得到的QSKR模型为最优,在两个独立测试集上获得良好的预测精度(相关系数为0.62)。本工作对预测药物分子解离速率常数这一关键科学问题进行了有益的探索,可为后续研究提供思路。

药物分子SK&F96067与β-环糊精之间形成包合物的研究

3 丁酰基 8 甲氧基 4 (2 甲基苯基氨基 )喹啉 (SK&F 960 67)是新合成的H+ K+ ATP酶抑制剂 ,它难溶于水。通过紫外吸收光谱、分子荧光光谱和1H NMR的方法研究该药物分子与 β 环糊精 (β CD)之间包合物的形成。研究发现在水环境中该药物分子的紫外吸收光谱有明显的等吸光度点 ;而且其荧光强度随着 β CD浓度的增大而增强 ,两者的拟合结果表明在水溶液中该药物分子能够与 β CD形成 1∶1(客体∶主体 )的包合物 ;1H NMR的谱图显示该药物分子喹啉环上的质子信号向低场迁移 ,这是由于其喹啉环部分地进入了 β CD疏水腔的结果。

^(153)Sm,^(113,117)Sn^m烷基膦酸配合物的表观脂水分配系数及与BSA的结合率

测定了NTMP(次氮三亚甲基膦酸),HEDTMP(N (羟乙基)乙二胺基三亚甲基膦酸),DCTMP(1,2 环己二胺四亚甲基膦酸),EDTMP(乙基二胺基四亚甲基膦酸),DTPMP(二乙基三胺基五亚甲基膦酸)的153Sm配合物以及HEDTMP,EDTMP,DTPMP的113,117Snm配合物在正辛醇 水中的表观脂水分配系数和在0 5%牛血清白蛋白(BSA)水溶液中与BSA的结合率。结果表明,这些配合物在正辛醇 水中的相对表观脂水分配系数和在BSA水溶液中与BSA的相对结合率呈线性正相关。两者之间的线性关系为这类配合物脂水分配系数的预测提供了一种新方法,同时也表明,在金属配合物与BSA的结合过程中,疏水作用力起着重要作用。

Wortmannin对视网膜缺血再灌注后HIF-1α表达的影响

目的:探讨磷酰肌醇-3激酶(phosphatidylinositol-3 kinase,PI3K)途径在大鼠视网膜缺血再灌注后对低氧诱导因子(HIF-1α)表达的影响。方法:将磷酰肌醇-3激酶(PI3K)特异抑制剂Wortmannin(WT)注入大鼠玻璃体内,抑制PI3K活性为A组,玻璃体内注射等量林格液作为B组,空白对照组为C组,采用前房灌注生理盐水升高大鼠眼压到110mm Hg(1 kPa=7.5 mm Hg)持续1 h的方法制作实验性视网膜缺血再灌注损伤模型,于再灌注后0、2、6、8、12、24、48 h取材,行免疫组织化学法染色观察HIF-1α在视网膜细胞的阳性表达;并应用RT-PCR来检测HIF-1αmRNA的表达。结果:视网膜缺血再灌注6、8、12、24、48 h,视网膜神经节细胞层及内核层细胞出现HIF-1α阳性表达且表达逐渐增加,12 h达到高峰,然后逐渐降低,预先玻璃体内注射PI-3K特异抑制剂Wortmannin(WT)的大鼠视网膜HIF-1α表达明显减弱,亦在12 h达到高峰,然后逐渐降低。结论:缺血再灌注后大鼠视网膜HIF-1α的表达是经过PI3K途径来实现,阻断PI3K途径,可以明显减少HIF-1α的表达,但从实验结果来看PI3K途径被阻断后并没有完全阻断HIF-1α的表达,由此猜测HIF-1α的表达可能存在多种途径。

氯苯那敏与β~3/环糊精相互作用的电化学表征

以氯苯那敏和 β$C环糊精为研究对象 ,利用电化学方法测定了它们相互作用形成超分子化合物的结合常数。实验考察了氯苯那敏在不同pH的Na2 HPO4 介质中的伏安行为 ,发现吸附还原峰电流和峰电位随pH的不同而发生变化 ,证明H+ 离子参加了氯苯那敏的电极反应 ,并且pH为 4 .4 7时 ,氯苯那敏在 - 1 .337V有较敏锐的吸附还原波。利用β$C环糊精结合氯苯那敏后 ,其表观扩散系数的变化引起还原峰电流改变的原理 ,采用线性扫描伏安法研究了氯苯那敏与β$C环糊精的相互作用 ,测得它们的结合常数为 2 .83× 1 0 2 mol- 1·L。

牛磺酸的生物学功能及在饲料中的应用

牛磺酸分子结构为H2N—CH2—CH2—SO3H,是β-丙氨酸的磺酸类似物,分子量约125,常温常压下为无色四面针状结晶。在生理pH条件下,电离常数PK1是1.5、PK2是8.82,等电点是5.16,绝大多数以两性离子形式存在。牛磺酸作为非必需氨基酸,没有遗传密码子,不能参与组成蛋白质和酶类。一、牛磺酸的生物学功能动物体内牛磺酸广泛分布,虽然牛磺酸不参与蛋白质合成,但对维持机体生理功能发挥着重要作用。1.结合胆汁酸肝脏的胆固醇通过乳化作用生成胆酸和鹅去氧胆酸,