补中益气汤加减治疗重症肌无力的验案及药理依据

重症肌无力是神经肌肉间传递功能障碍的疾病,是乙酰胆碱受体抗体(AchR-Ab)介导的、细胞免疫依赖的及补体参与的一种神经—肌肉接头(NMJ)处传递障碍的自身免疫性疾病,病变主要累及NMJ突触后膜上乙酰胆碱受体(AchR)。其主要特征是部分或全身骨骼肌易于疲劳,呈波动性肌无力,常具有活动后加重,休息后减轻和晨轻暮重等临床特点。其主要原因是乙酰胆碱生成不足,释放减少,运动终板对乙酰胆碱的反应减弱。

三七治疗骨关节炎机制:基于UHPLC-QE-MS、网络药理学及分子动力学模拟

背景:课题组前期研究发现三七能够修复骨细胞的形态结构,对于治疗骨关节炎具有良好的应用前景,但目前对于三七的具体作用机制尚不清楚。目的:采用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱串联质谱(ultra-high performance liquid chromatography-Q exactive-mass spectrometry,UHPLC-QE-MS)技术鉴定三七的主要成分,并结合网络药理学、分子对接和分子动力学模拟探究三七治疗骨关节炎的作用机制。方法:利用UHPLC-QE-MS技术鉴定三七的主要成分后,运用TCMSP数据库筛选活性成分,通过TCMSP和Uniprot数据库查找活性成分靶点,通过疾病数据库筛选骨关节炎靶点。在药物靶点与疾病靶点取交集后,导入STRING数据库和Cytoscape软件构建蛋白互作网络筛选关键靶点,通过“活性成分-作用靶点”网络筛选关键活性成分。再对关键靶点进行富集分析,并对关键活性成分和关键靶点进行分子对接验证,最后选取结合能最低的结果进行分子动力学模拟。结果与结论:①在三七溶液中共鉴定出57种活性成分,成分靶点与疾病靶点交集50个,关键活性成分5个(槲皮素、熊脱氧胆酸、山奈酚、柚皮素和红藻氨酸),关键靶点5个(白细胞介素6、基质金属蛋白酶9、白细胞介素1β、白蛋白和趋化因子配体2);②基因本体功能富集642个条目,其中620个条目代表生物过程,21个条目代表分子功能,1个条目代表细胞成分;京都基因与基因组百科全书通路分析63条通路,主要涉及雌激素信号通路、白细胞介素17信号通路和高糖基化终末产物-高糖基化终末产物受体信号通路;③分子对接显示关键活性成分和关键靶点结合活性良好,分子动力学模拟提示槲皮素和基质金属蛋白酶9间的相互作用稳定;④对三七成分进行了较全面研究,初步阐明了其药效物质基础,预测三七可通过多组分、多靶点、多途径和多通路发挥抗炎、软骨保护和免疫调节作用来治疗骨关节炎。

“四载体-四映射”模式的药理学课程线上教学育人资源建设与实施

线上线下混合式教学模式为课程思政育人提供了双渠道,除了在课堂开展思政教学外,推动专业课程线上教学育人资源建设和有效实施意义重大。齐齐哈尔医学院药理学课程线上教学育人资源基本建成,但缺乏思政元素的融入,线上育人渠道未充分利用。本研究利用“四载体-四映射”模式,以教学视频、临床案例、科研论文、测试习题为载体,通过开展线上线下混合式教学,映射家国情怀、社会责任、科研精神、辩证思维,以实现线上线下协同育人。

思政元素融入动物药理课程教学的探索与实践

从挖掘思政教育资源、优化教学设计、开展第二课堂三个方面探讨思政元素融入课程教学的具体实施策略,并以抗原虫药物教学为例,阐述思政元素融入课程的整体设计和流程。教学实践及调查反馈结果表明,将价值观塑造与知识传授、能力培养紧密结合,不仅有助于学生内化社会主义核心价值观,还可以培养具有独立思考能力的高素质技术技能型人才。探讨教师在实施过程中遇到的问题,可以为后续的教学改革提供参考。

拳参化学成分、药理作用研究进展及质量标志物预测分析

拳参是常用的中药材,具有广泛的药理活性。近年来,国内外学者对于拳参的研究逐渐深入。本文在对拳参化学成分及药理作用综述的同时进行了质量标志物预测分析,结果拳参主要含有挥发油、有机酸类、黄酮类、酚类、糖苷类、甾体皂苷、萜类化合物、苯丙素类、生物碱类以及其他类型的化合物,具有抗氧化、抗肿瘤、抗病原微生物、抗炎及保护心脑血管等作用。并从拳参特有化学成分、可测成分、传统药性药效、用药配伍、现代药理作用等方面对拳参质量标志物进行了预测分析,发现拳参潜在质量标志物有没食子酸、绿原酸、儿茶素、5-戊二烯-3-酮、无羁萜醇、鞣质等,其中没食子酸、绿原酸和儿茶素是拳参最关键的有效活性成分。

基于网络药理学的中药复方醒脑治瘫胶囊治疗气虚血瘀型中风的作用机制研究与实验验证

[目的]中药复方醒脑治瘫胶囊在临床上被广泛用于治疗各种气虚血瘀型中风,但其整体药理学的作用机制研究相对较少。本文通过网络药理学、分子对接以及实验验证手段探索醒脑治瘫胶囊的整体药理作用机制。[方法]检索中药系统药理学(TCMSP)数据库和中医药信息数据库(TCM-ID)中醒脑治瘫胶囊各味中药口服生物利用度大于30%,类药性大于0.18的有效化学成分及其对应的作用靶点;在DrugBank、GeneCards、OMIM、TTD等数据库中检索气虚血瘀型中风对应的靶点;使用Cytoscape软件构建醒脑治瘫胶囊中药-活性成分-气虚血瘀型中风潜在靶点网络;使用STRING软件构建蛋白-蛋白相互作用网络;使用DAVID软件进行靶点基因本体(GO)功能富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析;使用AutoDock Vina和Discovery Studio Visualizer软件进行分子对接和作用模式分析;评价醒脑治瘫胶囊提取物对氧糖剥夺/复糖复氧(OGD/R)诱导人源性神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)生存率、乳酸脱氢酶(LDH)释放率和网络药理学分析出的部分相关基因的影响。[结果]网络药理学分析显示PTGS2、PTGS1、HSP90AA1、NCOA2、ADRB2、CHRM1等靶点是醒脑治瘫胶囊发挥药效的潜在主要靶点;槲皮素、山柰酚、木犀草素等化合物是醒脑治瘫胶囊发挥药理作用的潜在有效成分。分子对接显示木犀草素与β2-肾上腺素能受体(ADRB2)、槲皮素与环氧合酶-2(PTGS2)、黄芩素与M1受体(CHRM1)、隐丹参酮与环氧合酶-1(PTGS1)具有潜在的结合可能。醒脑治瘫胶囊提取物可剂量依赖性地修复OGD/R对SH-SY5Y细胞的损伤,提高细胞生存率,降低LDH释放率,并能下调OGD/R引起的细胞PTGS2/PTGS1/HSP90AA1基因的mRNA和蛋白的高表达。[结论]网络药理学研究结果、分子对接技术结合实验验证为阐明醒脑治瘫胶囊药效物质基础和整体药理机制提供了新的研究方向。

基于系统评价和网络药理学分析桂枝茯苓丸治疗冠心病的疗效及其抗动脉粥样硬化的作用机制

目的运用系统评价对桂枝茯苓丸治疗胸痹心痛患者的疗效进一步确认,同时基于网络药理学考察桂枝茯苓丸对动脉粥样硬化可能作用机制。方法通过计算机检索2005—2023年中国知网(CNKI)、万方、维普及PubMed数据库中收录的关于桂枝茯苓丸治疗胸痹心痛的随机对照试验(RCT)文献。经过纳入、排除及筛选标准,最终纳入9篇RCT文献,采用Cochrane协作网及Review Manager 5.1软件分析,同时运用网络药理学分析桂枝茯苓丸对动脉粥样硬化可能作用机制。结果心电图疗效Meta分析结果提示:Z=2.66(P<0.05),OR及95%CI为0.17(0.05,0.30),说明观察组的心电图有效率高于对照组。心绞痛Meta分析结果提示:Z=5.71(P<0.00001),OR及95%CI为4.70(2.76,7.99),说明观察组的心绞痛有效率高于对照组。临床总疗效Meta分析结果提示:Z=4.39(P=0.0001),OR及95%CI为5.31(2.52,11.19),说明观察组的临床总有效率高于对照组。网络药理学分析提示:桂枝茯苓丸治疗动脉粥样硬化的靶点和作用机制发现,FOS、IKBKB、MAPK8和RELA是核心靶点,作用通路包括流体剪切应力、TNF、凋亡或脂质通路。结论Meta分析证实桂枝茯苓丸可以提高胸痹心痛患者的心电图疗效、心绞痛疗效及临床总有效率,但由于纳入文献的质量偏低、未提及具体分组方式、是否盲法及不良反应,确切结论仍需要高质量文献支持;桂枝茯苓丸治疗动脉粥样硬化的靶点和作用机制发现,FOS、IKBKB、MAPK8和RELA是核心靶点,作用通路包括流体剪切应力、TNF、凋亡或脂质通路。

案例教学法结合通关模式在“中药药理与应用”课程的实践

为了提升“中药药理与应用”的教学质量,围绕以学生为中心和以学习为中心的OBE教育理念,结合案例教学法和通关模式,开展中药药理的案例教学。通关模式的案例教学法可以全方位地促进学生学习的积极性、主动性和目标性。教学实验研究结果表明,案例教学法结合通关模式能明显提升学生的学习状态、学习成绩和学习效果,实验班与对照班比较,p<0.05,有显著差异性,能提升“中药药理与应用”课程的整体教学效果。

药物发现史短视频在药理学教学中的应用

文章首先阐述了药物发现史短视频在药理学教学中应用的意义,然后提出了药物发现史短视频在药理学教学中应用的策略,包括制作药物发现史短视频、药物发现史短视频在教学中的应用,最后分析了药物发现史短视频在药理学教学中应用的效果。

邓氏温胆汤抗动脉粥样硬化作用靶点及机制的网络药理学研究

目的:基于网络药理学、分子对接探讨邓氏温胆汤治疗动脉粥样硬化(AS)的潜在分子机制及靶点,并进行实验验证。方法:从中药系统药理学数据库和分析平台(TCMSP)中获取邓氏温胆汤的活性成分及相应靶点。下载GSE28829和GSE4329,鉴定早期和晚期AS斑块之间的差异表达基因,并对差异表达基因进行富集分析。通过多种生物信息学算法确定AS的最佳候选基因,并与邓氏温胆汤相关靶点相交,从而确定关键治疗靶点。最后,通过分子对接和体内实验对关键基因进行验证。结果:共收集邓氏温胆汤中190个化合物和261个对应的治疗靶点,数据集中鉴定出81个差异表达基因,基质金属蛋白酶9(MMP9)被筛选为邓氏温胆汤治疗AS的关键靶点。此外,MMP9在动脉粥样硬化模型中表达水平显著升高,具有良好的诊断价值,且5种关键活性化合物与MMP9稳定结合。在体内,邓氏温胆汤可通过抑制斑块形成,减少载脂蛋白E基因敲除(ApoE^(-/-))小鼠泡沫细胞沉积和胶原纤维含量,减轻高脂饮食诱导的组织病理学损伤。免疫组化显示邓氏温胆汤能显著抑制MMP9的表达。结论:邓氏温胆汤能通过多种有效成分、治疗靶点及信号通路协同互作从而治疗AS,MMP9可能是一个关键的生物标志物和治疗靶点。

基于网络药理学探讨速效救心丸联合复方丹参注射液治疗不稳定型心绞痛的机制

目的采用网络药理学和分子对接技术探索速效救心丸联合复方丹参注射液治疗不稳定型心绞痛的分子调控机制。方法中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)、中医药百科全书平台(ETCM)、中药分子机制研究的生物信息学分析工具(BATMA-TCM)、本草组鉴平台(HERB)数据库结合成分检测文献筛选速效救心丸联合复方丹参注射液的成分和靶点,同时GeneCards、DisGeNET和OMIM数据库获取不稳定型心绞痛的靶点。用于进行基因本体和京都基因与基因组百科全书富集分析。结果本研究筛选出川芎嗪、丹参酮ⅡA、丹酚酸B等33种主要活性成分,得到前列腺素内过氧化物合成酶2、白细胞介素6(IL-6)等32个速效救心丸联合复方丹参注射液治疗不稳定型心绞痛的靶点。分子对接结果证明,本研究获得的活性成分与其对应的不稳定型心绞痛靶点间均有较高的亲和力。结论速效救心丸联合复方丹参注射液通过川芎嗪、丹参酮ⅡA、丹酚酸B等活性成分靶向IL-6、白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子(TNF)等关键靶点发挥治疗不稳定型心绞痛的功效。

地黄化学成分及药理作用研究进展

《神农本草经》将地黄列为上品,临床常用生地黄和熟地黄,其入药形式不同,化学成分及药理作用亦有差别。笔者对相关研究进行综述,发现地黄主要含有糖类和环烯醚萜苷类成分,如梓醇、水苏糖、毛蕊花糖苷、甘露三糖、地黄苷D等,具有降血糖、抗炎、调节免疫、止血、抗氧化、细胞保护和调节菌群等药理作用,主要作用在TGF-β1/Smads、ROS/NLRP3/Caspase-1、PI3K/Akt/mTOR、氧化应激、MKK4/JNK和JAK2/STAT3信号通路。临床主要用于治疗糖尿病及并发症、帕金森病、阿尔茨海默病、溃疡性结肠炎等,涉及内分泌、神经、心脑血管等系统。

基于网络药理学与分子对接探讨桃核承气汤对血小板活化的作用机制

目的:运用网络药理学和分子对接技术,探讨桃核承气汤对血小板活化的调控机制。方法:通过中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)、UniProt数据库、化源网、PharmMapper数据库筛选桃核承气汤中桃仁、大黄、甘草、桂枝、芒硝5味药物活性化合物和相关作用靶点,通过GeneCards等数据库搜索与血小板活化相对应的疾病靶点,采用韦恩图对药物靶点与疾病靶点进行交集获得两者交集靶点,再通过Cytoscape 3.10.1软件构建“药物-成分-靶点-疾病”网络图,将交集靶点导入STRING数据库进行剖析,并绘制蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络图,通过Metascape数据库对“化合物-疾病”交集靶点进行基因本体(GO)功能富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析,并使用分子对接技术验证桃核承气汤中的主要成分和血小板活化的相关性。结果:桃核承气汤活性成分对应253个靶点,与血小板活化相关对应2043个靶点,二者取交集获得164个靶点,GO涉及细胞增殖、细胞凋亡等生物过程,KEGG富集为癌症通路、PI3K/AKT等信号通路,分子对接结果显示槲皮素、山柰酚等有效成分亲和力良好。结论:桃核承气汤通过山柰酚等活性成分作用于多靶点、多通路,可以有效调节血小板活化状态。

基于OBE的水产药物与药理学课程思政教学设计与实践

水产药物事关水生态健康和人民福祉,从业者的道德水准和法律意识至关重要。根据安徽农业大学水产养殖专业的人才培养目标,作者在OBE理念指导下,重新确立水产药物与药理学的课程目标,包括专业知识与技能培养、核心素养与能力提升、责任培养与价值引领(思政目标)。通过深入挖掘,把生态文明、法治、职业道德和科学精神等思政元素融入课程教学,适当拓展教学内容,精心设计课堂教学,采用案例式、讨论式和翻转课堂等多元化教学方式,引导学生树立并践行社会主义核心价值观,较好地实现课程目标。最后,通过课程考核方式改进课程评价问卷,推动课程教学持续改进。

基于网络药理学和分子对接探讨生脉陷胸汤治疗冠心病的作用机制

目的本研究项目计划采用网络药理学和分子对接模拟作为主要的研究手段,深入探索生脉陷胸汤在治疗冠状动脉心脏病(coronary heart disease,CHD)中的作用机制和潜在疗效。方法通过使用TCMSP数据库检索“丹参”、“人参”、“瓜蒌皮”、“法半夏”、“炙甘草”、“黄连”、“五味子”、“砂仁”,以及文献收集“麦冬”中的有效成分及对应的靶蛋白的筛选;使用GeneCard、OMIM、DisGeNET数据库选出与CHD发生发展密切相关的作用靶点。运用STRING数据库以及Cytoscape软件构建PPI网络图,并运用Cytoscape软件构建“中药—组分—靶点”网络图。利用R软件对中药—疾病交集靶点进行KEGG和GO富集分析。使用AutoDockTools-1.5.6进行分子模拟对接。结果在治疗冠心病(CHD)方面,生脉陷胸汤的核心成分主要包括槲皮素(quercetin)、木犀草素(luteolin)、异鼠李素(isorhamnetin)、山柰酚(kaempferol)、丹参酮IIa(tanshinone IIa)、β-谷甾醇(beta-sitosterol)、柚皮素(naringenin)、刺芒柄花素(formononetin)、二氢丹参内酯(dihydrotanshinlactone)、以及7-甲氧基-2-甲基异黄酮(7-Methoxy-2-methyl isoflavone)等;核心靶点有肿瘤蛋白P53(TP53)、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(AKT1)、信号传导转录激活因子3(STAT3)、JUN转录因子(JUN)、环状素受体1(ESR1)、热休克蛋白90(HSP90AA1)、白细胞介素-6(IL-6)、丝裂原活化蛋白激酶1(MAPK1)、人表皮生长因子受体(EGFR)、MYC原癌基因(MYC)等;在治疗冠心病(CHD)方面,生脉陷胸汤作用于多个关键生物通路,这些内容包括动脉粥样硬化中的脂质代谢(Lipid and atherosclerosis)、乙型肝炎病毒感染(Hepatitis B)、前列腺癌的病理机制(Prostate cancer)、TNF信号通路的调节作用(TNF signaling pathway)、胰腺癌的发展机制(Pancreatic cancer)以及IL-17信号通路的作用(IL-17 signaling pathway)等;分子模拟对接结果显示,生脉陷胸汤中槲皮素与TP53和AKT1均能实现较好的结合。结论生脉陷胸汤可通过槲皮素、木犀草素、山柰酚等活性成分作用于多种信号通路及多个基因靶点治疗CHD。本研究对生脉陷胸汤的临床运用提供理论依据。

课程思政背景下药学专业《药理学》课程与思政教育融合的研究

思政教育是培养高素质人才的重要途径,《药理学》是药学专业核心课程之一,根据药学专业学生的职业特点,在传授药理学专业知识的同时,挖掘《药理学》课程中包含的思政元素,将专业课程和思想政治教育有机融合,扩充了《药理学》课程的教学方法,丰富了《药理学》课程的教学内容,提升了《药理学》课程的思政育人作用。本文通过《药理学》课程思政的探索与实践,探索符合药学专业教学的课程思政教学体系。

基于网络药理学和实验验证探讨参兰颗粒治疗主动脉弓缩窄的心力衰竭机制研究

[目的]通过网络药理学及动物实验探究参兰颗粒(SLG)防治心力衰竭(HF)的作用机制。[方法]借助TCMSP、GeneCards、BATMAN等数据库筛选SLG防治HF的活性成分及相关靶点制作韦恩图,利用STRING数据库及Cytoscape软件构建蛋白-蛋白互作网络(PPI)及“药物-成分-作用靶点”网络,通过R-studio对作用靶点进行GO和KEGG富集分析。采用主动脉弓缩窄法构建C57BL/6小鼠HF模型,分为假手术组、模型组、SLG低剂量组、高剂量组、卡托普利组,连续给药4周后,超声心动图检测各组小鼠的射血分数(EF)、短袖缩窄分数(FS)、左室舒张末期内径(LVIDd)、左室收缩末期内径(LVIDs);酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中前体脑钠肽(NT-proBNP)、白细胞介素(IL)-6、IL-1β、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量;苏木精-伊红(HE)染色观察心肌病理损伤;马松染色(Masson)观察心肌纤维化程度;WGA染色观察心肌细胞的肥大情况;qPCR检测丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(AKT)、核因子-κB(NF-κB)、IL-1β的mRNA表达水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测胞内磷脂酰肌醇激酶(PI3K)、p-PI3K、p-AKT、AKT、p-NF-κB、NF-κB的蛋白表达。[结果]从SLG中筛选出84个有效成分,其治疗HF的核心靶点有IL-6、AKT1、STAT3、IL-1β等,GO分析共得到2841个条目,发现其潜在靶点可以作用于脂多糖反应、活性氧代谢、血管直径的调节等生物过程,KEGG结果显示SLG治疗HF相关通路有PI3K/AKT信号通路、肿瘤坏死信号通路、NF-κB信号通路等。动物实验结果显示,与模型组相比,SLG各剂量组显著降低模型小鼠的EF、FS(P<0.01),减小LVIDd、LVIDs(P<0.05或P<0.01),提高血清中NT-proBNP、IL-6、IL-1β、TNF-α的含量(P<0.05或P<0.01),减少心肌胶原纤维容积百分比(P<0.01)及减小心肌细胞平均横截面面积(P<0.05或P<0.01),降低IL-1β、AKT、NF-κB的mRNA的表达水平(P<0.05或P<0.01),降低p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-NFκB/NF-κB蛋白的比值(P<0.01)。[结论]SLG可能通过介导PI3K/AKT/NF-κB信号通路调控心脏炎症水平进而发挥对压力负荷HF小鼠的心脏保护作用。

基于GEO数据库结合网络药理学和分子对接技术探究玉竹抗抑郁作用机制

目的:基于生物信息学和网络药理学方法筛选玉竹治疗抑郁症的潜在药物靶点和信号通路,并通过PC12细胞实验初步证实其抗抑郁药效。方法:下载GSE98793表达矩阵和GPL570平台信息进行差异表达基因筛选;通过检索TCMSP数据库进行成分筛选,利用Cytoscape3.7.1软件,构建玉竹“药物-成分-靶点”相互作用网络图和PPI网络图;利用DAVID数据库,进行GO和KEGG富集分析;使用SYBYL-X 2.0软件对主要活性成分及靶点进行分子对接验证;采用谷氨酸(Glu)诱导PC12细胞模型后,将玉竹醇提物按低、中、高剂量进行分组给药,考查其对PC12细胞损伤的保护作用。结果:筛选得到玉竹抗抑郁活性成分23个,活性靶点34个;“药物-成分-靶点”网络图显示棕榈酸、月桂酸、(+)-雪松醇等为玉竹抗抑郁的主要活性成分;PPI网络图显示PTGS2、PTGS1、SLC6A2、GABRA1、TNF等为关键靶点;通过GO富集分析得到GO条目共209个,其中包括生物过程(BP)149个,细胞组分(CC)23个,分子功能(MF)37个;主要涉及Chemical carcinogenesis-receptor activation、Small cell lung cancer和Adipocytokine signaling pathway等信号通路;分子对接结果显示,玉竹主要活性成分与抑郁症主要靶点对接结果具有良好稳定性;体外细胞实验结果表明,600μg/mL的玉竹醇提物对Glu诱导的PC12细胞损伤具有明显恢复作用。结论:玉竹可能通过炎症反应、氧化应激和前列腺素合成等途径发挥抗抑郁作用。

基于网络药理学探究双孢菇的肝脏保护作用

为研究双孢菇乙醇提取物(Agaricus bisporus ethanol extract,ABEE)保肝活性的物质基础及其作用机制,采用超高效液相色谱-串联质谱(ultra-high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,UPLC-MS/MS)技术对ABEE的成分进行分析鉴定,通过网络药理学结合CCl4致小鼠急性肝损伤动物模型对其活性物质及作用机制进行分析。UPLC-MS/MS分析鉴定化合物75个,其中网络药理学预测与肝损伤活性相关化合物15个,作用靶点11个。动物实验结果显示,ABEE能够显著改善由CCl4导致的小鼠急性肝损伤,与模型组相比,高剂量组(1000 mg/kg)肝功能指标谷草转氨酶、谷丙转氨酶、碱性磷酸酶得到了显著恢复(P<0.001),同时小鼠体内抗氧化能力得到显著提高,与模型组相比,超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶活力显著提高(P<0.001),丙二醛含量显著下降(P<0.01)。采用实时荧光定量聚合酶链式反应和Western blot技术对相关基因的mRNA和蛋白表达水平进行检测,结果显示,与模型组相比,高剂量组Bcl-2表达显著上升(P<0.001),MYC、NF-κB1、RELA、MMP9表达显著降低(P<0.01),证实了预测结果。因此,ABEE可能是通过水杨酸、棕榈酸、α-亚麻酸、白杨素调节Bcl-2、MYC、NF-κB1、RELA的表达及其所在的化学致癌-受体激活等信号通路,从而发挥肝脏保护作用。本研究结果表明ABEE可能是通过多成分、多靶点、多通路抑制细胞凋亡、癌变,抑制自由基脂质过氧化来发挥肝脏保护作用。

基于网络药理学和实验验证探讨陈皮在异功散治疗慢性病贫血中的作用机制

目的为探讨陈皮在异功散治疗慢性病贫血(ACD)中的作用,通过网络药理学分析异功散中陈皮与四君子汤活性成分治疗ACD的不同作用靶点及信号通路,并进行动物实验明确陈皮活性成分在异功散治疗ACD中的作用机制。方法①网络药理学研究:基于中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)、本草组鉴数据库(HERB)、草药成分目录平台(HIT)获取异功散方的组分,符合口服生物利用度(OB)≥30%、类药性(DL)≥0.18,或经瑞士生物信息研究所药代动力学(SwissADME)数据库筛选,符合吸收、分布、代谢和排泄标准的为最终获取的异功散活性成分。通过TCMSP、化合物靶点预测(Swisstarget prediction)数据库获得活性成分的作用靶点。再通过人类基因综合数据库(Genecards)、在线人类孟德尔遗传数据库(OMIM)、疾病相关基因与突变位点数据库(DisGeNETt)获取ACD的疾病靶点。借助韦恩(Venny)2.1在线平台获得药物靶点和疾病靶点的交集,运用蛋白互作关系数据库平台(STRING)和Cytoscape v3.9.1软件构建蛋白质网络,通过Cytoscape中MCC算法筛选前30位的核心靶点,核心靶点经京都基因与基因组百科全书(KEGG)进行信号通路富集分析。最终通过Cytoscape构建“异功散活性成分-ACD-靶点”网络和“核心靶点-信号通路”网络。②分子对接验证:比较陈皮区别于异功散方中其他活性成分的作用靶点,进行分子对接验证。③动物实验验证:建立ACD小鼠模型,进行药物干预,干预1周后检测比较各组白细胞(WBC)、血红蛋白(Hb)、红细胞(RBC)、血清铁蛋白(SF)、血清铁(SI)水平,苏木精-伊红(HE)染色脾组织观察病理学变化,蛋白免疫印迹(Western blot)法检测脾组织中磷酸化丝裂原活化蛋白激酶/丝裂原活化蛋白激酶(p-MEK/MEK)、磷酸化细胞外信号调节激酶(1/2)/细胞外信号调节激酶(1/2)[p-ERK(1/2)/ERK(1/2)]、磷酸化逆转录病毒癌蛋白网状内皮增生病毒癌基因同源物A/逆转录病毒癌蛋白网状内皮增生病毒癌基因同源物A(p-P65/P65)蛋白表达,验证陈皮活性成分对ACD的治疗作用及机制。结果①网络药理学分析结果显示,异功散活性成分为135种,作用于1006个靶点,ACD疾病靶点1474个,与异功散活性成分共同靶点为235个,计算筛选前30位核心靶点,构建得到“异功散活性成分-ACD-核心靶点”网络和“核心靶点-信号通路”网络,发现陈皮的活性成分柚皮素及其作用靶点丝裂原活化蛋白激酶3(MAPK3)及其作用的丝裂原活化蛋白激酶-细胞外信号调节激酶(1/2)-核因子-κB[MEK-ERK(1/2)-NF-κB]通路可能在异功散治疗ACD中发挥重要作用。②动物实验结果表明,与模型组比较,柚皮素组小鼠的外周血WBC、SF明显降低(P<0.05),Hb、RBC、SI明显升高(P<0.05);Western blot检测显示,柚皮素组脾组织p-MEK/MEK、p-ERK(1/2)/ERK(1/2)、p-P65/P65表达均明显下降(P<0.05);HE染色结果提示,柚皮素组脾组织坏死区域、中性粒细胞浸润明显减少。结论在异功散方中,陈皮的有效成分柚皮素通过减少MAPK3蛋白活化来下调MEK-ERK(1/2)-NF-κB通路,降低ACD小鼠炎症状态,恢复RBC稳态,调节铁代谢,改善贫血。