液质联用技术应用于药理学实验教学的探索

为培养制药工程本科生的药物评价能力,基于前期成熟的科研成果,将已建立的液质联用分析方法应用于药理学设计性实验,设计了题为“化合物X在小鼠体内药物代谢动力学研究”的实验.小鼠一次性灌胃化合物X溶液,取各时间点小鼠血浆,采用乙腈沉淀蛋白法,运用内标法进行高效液相色谱-质谱联用技术检测血浆中药物浓度,并用DAS2.0软件计算药代动力学参数.经过上述实验过程,学生了解了化学药物药代谢动力学研究的一般思路与方法,掌握了动物给药、取血、生物样本处理方法及药物含量测定等一系列综合实验技能,学会了高效液相色谱-质谱联用分析方法,参与了实验设计与结果分析,提高了学生研究、解决制药工程实际问题的能力.

基于新药研发能力培养的药理学实验教学探索

设计性实验在培养学生创新思维及新药研发能力中发挥着重要作用,以灵芝发酵菌丝体粉急性毒性研究为例,进行了药理学设计性实验教学的实践与探索。采用固定剂量法(50、500、2 000、5 000 mg/kg),一次性给小鼠灌胃相应灵芝发酵菌丝体粉水溶液,观察小鼠一般活动状态,检测小鼠血清中谷草转氨酶(AST)和谷丙转氨酶(ALT)的含量,病理切片观察重要脏器的形态学变化。通过实验,学生可掌握药物急性毒性研究的基本概念、基本原则、主要研究内容和实验方法,巩固了实验动物基本技能操作,又学习了药理、生化及病理等多门学科综合实验技术技能,通过设计性实验的实践,学生的动手实践能力、创新意识及新药研发能力得到了提高。

酒精性肝损伤保护的药理实验教学设计

以酒精性肝病为研究主题,结合现代医药研究热点肠道微生态,融合药理、病理、生物化学、分析化学等多项实验技术,探索并实践生物制药专业药理学教学实验——以肠道微生态药物为主的酒精性肝损伤保护实验。以树立研究思维、掌握研究方法、提高研究能力为目标进行教学设计,借助翻转课堂的教学模式,引导学生完成动物造模、疾病观察、药物治疗以及病症指标检测等一系列实验过程;将基础研究与本科实验教学有机结合,学习新药研发前的药物筛选过程,训练学生高层次的综合分析、逻辑思维能力,有助于培养其应用能力与创新能力,提高综合科研素质。

王不留行黄酮苷对脓毒症小鼠急性肺损伤保护作用及机制研究

目的基于网络药理学和动物实验探究王不留行黄酮苷(VAC)对脓毒症小鼠急性肺损伤的保护作用机制。方法通过Swiss Target Prediction数据库收集VAC的潜在作用靶点;利用GeneCards数据库检索肺脓毒症相关的疾病靶点;运用Draw Venn Diagram软件构建VAC和疾病的共同靶点;利用STRING 11.5数据库和Cytoscape 3.10.0软件构建共同靶点蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络;利用Metascape数据库进行基因本体(GO)富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路分析。采用ip给予脂多糖(LPS)构建脓毒症模型,造模同时给予VAC(1、5 mg·kg^(-1))或地塞米松干预,取各组小鼠肺组织及血清,苏木精-伊红(HE)、Masson及TUNEL染色观察肺组织形态变化、纤维化及细胞凋亡情况,ELISA法和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法分别检测血清和肺组织中炎症因子水平,免疫组织化学法和Western blotting法检测肺组织炎症通路相关蛋白表达。结果VAC和肺脓毒症共同靶点有44个;GO富集分析涉及生物过程(BP)823个条目、细胞组分(CC)52个条目和分子功能(MF)49个条目;KEGG分析筛选出癌症通路、PI3K-Akt、JAK-STAT信号通路等20条信号通路。验证实验结果显示,与对照组相比,模型组小鼠肺组织损伤且纤维化严重,肺脏指数显著增加(P<0.05),血清及肺组织中相关炎症因子表达升高(P<0.01、0.001)。与模型组相比,VAC及地塞米松组肺组织病理形态得到改善,纤维化程度减轻,肺脏指数显著降低(P<0.05),血清中肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)水平、肺组织炎症蛋白表达量及细胞凋亡数量降低,PI3K、Akt蛋白表达升高(P<0.05、0.01、0.001)。动物实验结果与网络药理学结果一致。结论VAC对脓毒症小鼠急性肺损伤具有一定的保护作用,其机制可能与调控PI3K-Akt、NLRP3/TNF-α等通路抑制炎症的发展有关,为VAC抗炎作用机制的深入研究提供了依据。