一款荷叶碱果冻的研制

优化荷叶碱果冻的制作配方及工艺,确定最优工艺配方。以果冻的感官评价为指标,通过单因素试验依次考查魔芋胶-卡拉胶的配比、魔芋胶-卡拉胶添加量、荷叶碱添加量、甘露醇添加量对果冻品质的影响,得出荷叶碱果冻的最优工艺配方,并对其微生物指标进行检测。结果表明,荷叶碱果冻的最优工艺配方为魔芋胶-卡拉胶复配比1∶1,魔芋胶-卡拉胶复配凝胶剂添加量4.5%,荷叶碱添加量1.0%,甘露醇添加量5.0%,该工艺配方生产的荷叶碱果冻未检出大肠杆菌。采用最优配方制备的荷叶碱果冻为浅褐色,有淡淡的茶香,表面透亮有光滑,硬度适宜,荷叶碱的苦涩味被掩盖,滋味协调口感爽滑。

DSPE-mPEG2000修饰荷叶碱脂质体制备及其体内药动学研究

目的制备二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000(DSPE-mPEG2000)修饰荷叶碱脂质体,并考察其体内药动学。方法薄膜超声法制备脂质体。以磷脂酰胆碱与胆固醇比例、脂药比、DSPE-mPEG2000用量、水化温度、超声时间为影响因素,单因素试验优化处方,测定包封率、载药量、粒径、PDI、Zeta电位、体外释药。18只大鼠随机分为3组,分别灌胃给予荷叶碱原料药、不含DSPE-mPEG2000荷叶碱脂质体、DSPE-mPEG2000修饰荷叶碱脂质体的0.5%CMC-Na混悬液(20 mg/kg),于0、0.25、0.5、1、1.5、2、3、4、6、8、12 h采血,HPLC-MS/MS法测定荷叶碱血药浓度,计算主要药动学参数。结果最佳处方为荷叶碱用量20 mg,磷脂酰胆碱与胆固醇比例5∶1,脂药比12∶1,DSPE-mPEG2000用量30 mg,水化温度40℃,超声时间15 min,平均包封率为71.69%,载药量为4.59%,粒径为161.84 nm,PDI为0.163,Zeta电位为-7.17 mV。DSPE-mPEG2000修饰后,荷叶碱在人工胃液、人工肠液中48 h内累积释放度分别为66.17%、53.90%。与原料药比较,脂质体t_(max)、t_(1/2)延长(P<0.01),C_(max)、AUC_(0~t)、AUC_(0~∞)升高(P<0.01),相对生物利用度增加至6.14倍。结论DSPE-mPEG2000修饰脂质体可促进荷叶碱口服吸收。

荷叶碱改善高脂饮食诱导比格犬肥胖的试验研究

本研究旨在评估荷叶碱(NUC)对高脂饮食比格犬的抗肥胖效果和安全性。试验选取36只成年比格犬,适应性饲喂2周后随机等分为6组:正常饲粮组、含0.1%NUC正常饲粮组、高脂饲粮组、含0.05%NUC高脂饲粮组、含0.1%NUC高脂饲粮组和含0.15%NUC高脂饲粮组。饲喂8周后,进行血常规、血液生化和血液电解质检测,并对腹股沟皮下脂肪组织进行HE染色观察脂肪细胞大小。结果显示:高脂饲粮组的终末体重、体重增量、皮下脂肪厚度、脂肪细胞面积,血中甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)等均高于正常饲粮组,添加0.1%NUC和0.15%NUC均可逆转这些变化。此外,添加0.1%NUC降低了高脂饮食犬总胆红素(TBIL)和丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平,添加不同剂量NUC对血常规参数和血清电解质无影响。综上,NUC可改善高脂饮食诱导比格犬的肥胖和肝酶变化,0.1%的添加剂量效果最佳。

荷叶碱抑制Akt/mTOR/4EBP1-糖酵解通路抗胆管癌细胞增殖作用研究

本研究基于网络药理学探究荷叶碱抑制人肝内胆管癌细胞HuCCT1增殖的分子机制。采用MTT比色法、克隆形成实验检测荷叶碱对HuCCT1细胞增殖的影响;采用比色法、分光光度法检测荷叶碱对糖酵解生化指标的影响;通过网络构建和富集分析预测荷叶碱作用于肝内胆管癌的潜在靶点及通路,以此为基础探究荷叶碱影响HuCCT1细胞增殖的可能机制。结果表明荷叶碱能抑制HuCCT1增殖,显著降低细胞葡萄糖消耗及乳酸生成,并呈时间和剂量依赖性;网络药理学分析显示荷叶碱主要通过PI3K/Akt、MAPK、HIF-1信号通路影响肝内胆管癌生长、运动;聚合酶链式反应(PCR)和蛋白免疫印迹(Western blot)结果显示(30、60、120μmol/L)荷叶碱能降低低氧诱导因子-1α(HIF-1α)、己糖激酶2(HK2)和丙酮酸激酶2(PKM2)的mRNA水平和蛋白表达,同时下调p-Akt^(Thr308)、p-mTOR、p-4EBP1蛋白表达。综上,荷叶碱可能通过影响Akt/mTOR/4EBP1信号级联调控的糖酵解活性抑制HuCCT1细胞增殖。

壳聚糖包覆荷叶碱脂质体的理化表征及其体内降脂作用

目的:制备壳聚糖包覆荷叶碱脂质体(chitosan-coated nuciferine liposomes,CS-LP)并研究其体内降脂作用。方法:用薄膜分散法和pH梯度法制备壳聚糖包覆荷叶碱脂质体,对其粒径、电位分布、包封率、微观形态和体外释放曲线进行测定,并探究其对肥胖小鼠的降脂作用。结果:制得的CS-LP为均匀球体结构,粒径大小为253.54±4.25 nm,Zeta电位为32.50±3.44 mV,包封率达83.46%。相比荷叶碱脂质体(nuciferine liposomes,LP),外加壳聚糖涂层可以提高其在模拟消化液中的稳定性。与高脂饮食组相比,CS-LP灌胃11周后,小鼠体重和脂肪组织重量分别显著降低了12.91%和41.03%(P<0.05),血清甘油三酯和低密度脂蛋白胆固醇质量浓度分别显著降低了32.40%和14.49%(P<0.05),血脂水平趋向正常,脂肪细胞体积减小。高通量测序显示,CS-LP显著提高了小鼠肠道菌群的多样性(P<0.05)。在门水平上,小鼠肠道菌群厚壁菌门相对丰度下降,杆菌门相对丰度显著上升,弯曲杆菌门和厚壁菌门的比值与拟杆菌门相对丰度显著降低(P<0.05)。结论:壳聚糖包覆荷叶碱脂质体包封率高,缓释性好,可以有效改善高脂饮食导致的小鼠肥胖和肠道菌群紊乱,在降脂配方食品开发中具有广阔的应用前景。

纤维素酶酶解法提取荷叶碱的工艺优化

为优化纤维素酶酶解法提取荷叶碱的工艺条件,采用单因素试验和正交试验相结合的方法,考察纤维素酶添加量、酶解温度、酶解时间和液料比等因素对荷叶碱提取率的影响,得到纤维素酶提取荷叶碱的最佳工艺条件为:纤维素酶添加量2.3 mg·g^(-1),酶解温度50℃,酶解时间55 min,液料比(mL/g)30∶1;在此条件下,荷叶碱的提取率可高达0.67%。研究结果可为后续荷叶碱的开发利用提供了积极参考价值。

正交试验法优化超声提取荷叶中荷叶碱工艺研究

以荷叶为原料,使用超声波提取荷叶碱,高效液相法测定荷叶碱的含量,单因素实验考察了乙醇浓度、提取时间、提取温度、料液比对荷叶碱得率的影响,采用正交试验法优化了荷叶碱的提取工艺,优化的荷叶碱的最佳提取条件为乙醇浓度70%,提取时间60 min,提取温度70℃,料液比20 g/mL,在此提取条件下,荷叶碱的得率为0.0597%。测定湖北地区四个产地10批次荷叶中荷叶碱的含量,发现荷叶中的荷叶碱含量在0.15~3.87 mg/g之间,其中产地为武汉的荷叶中荷叶碱含量最高,平均含量为2.95 mg/g。旨在为荷叶药材质量控制及其在保健食品中的开发提供参考。

荷叶碱对小鼠肝AML-12细胞内脂质代谢的影响

该研究通过高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography,HPLC)测定荷叶中荷叶碱含量,对比分析25种荷叶中荷叶碱含量差异,并利用油酸诱导建立AML-12细胞脂质蓄积模型,研究荷叶碱对脂质代谢的影响。通过测定甘油三酯(Triglyceride,TG)含量和油红O染色情况,评估细胞脂滴蓄积情况;检测细胞内AMP依赖的蛋白激酶(Adenosine 5‘-Monophosphate-Activated Protein Kinase,AMPK)通路相关蛋白表达水平,探究荷叶碱影响脂质代谢的作用机制。经HPLC检测,发现荷叶品种间荷叶碱含量差异显著,其中佛座莲的荷叶碱质量分数最高,达0.68 mg/g,而金凤的荷叶碱质量分数最低,仅为0.22 mg/g。在脂质代谢研究中,与对照组相比,模型组在建模后脂滴数量显著增加,TG含量提升(P<0.01),P-AMPK和脂肪甘油三酯脂肪酶(Adipose Triglyceride Lipase,ATGL)在蛋白水平上表达显著降低(P<0.05);在荷叶碱的干预下,AML-12细胞的脂滴蓄积程度明显降低,TG含量显著减少(P<0.05),P-AMPK和ATGL的蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。由此表明:不同荷叶品种间荷叶碱含量存在明显差异,荷叶碱可能是通过调控AMPK/ATGL途径调节AML-12细胞内脂质代谢。该结果可为荷叶的开发利用提供理论支持。

星点设计-效应面法优选荷叶中荷叶碱与荷叶黄酮的提取工艺

目的：优化荷叶中2类有效成分的醇提工艺。方法：采用星点设计，以荷叶碱，荷叶总黄酮的提取率为指标，对2种指标进行归一化处理，采用效应面法优化荷叶的提取工艺条件。结果：确定最优提取工艺为75％～80％乙醇，提取时间120～180min，加醇量20～25倍，提取2次，荷叶碱和荷叶总黄酮提取率的实际值与预测值的偏差分别为5.53％，-6．02％。结论：采用星点设计．效应面法优选荷叶的醇提工艺，实际值与预测值吻合度高，预测性良好，是可行的。

采用酶法提取荷叶中的荷叶碱

以晒干粉碎的荷叶为原料,采用纤维素酶预处理,稀盐酸浸提,超声波辅助提取,氯仿萃取方法提取荷叶碱。考察纤维素酶用量、酶解温度、酶解时间、酶解酸度、液料比、稀盐酸浸提时间、浸提液中盐酸浓度对荷叶碱提取率的影响,经紫外分光光度计检测所得荷叶碱浓度,确定最佳实验条件。研究结果表明,最佳提取工艺条件是:酶的用量为2.667×10-6mol/(s.g),酶解温度为50℃,酶解时间为2h,酶解酸度pH=5.0,液料比为30:1,浸提时间为16h,盐酸浓度为0.5%,荷叶碱的提取率达到1.105%。

RP-HPLC法测定Beagle犬血浆中荷叶碱的浓度及药动学研究

目的:建立 Beagle 犬血浆中荷叶碱的 RP-HPLC 含量测定方法,研究 Beagle 犬灌胃给予荷叶生物碱提取物后荷叶碱血浆药代动力学特征。方法:采用高效液相色谱法,Hypersil-C_(18)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);0.1%三乙胺水溶液-乙腈(53:47)为流动相;检测波长270 nm,柱温:35℃,流速:1.0 mL·min^(-1)。Beagle 犬灌胃给予荷叶生物碱提取物后定时取血,测定血浆荷叶碱药物浓度,采用 DAS 软件计算药动学参数。结果:荷叶碱浓度在0.0515～2.06μg·mL^(-1)浓度范围内线性关系良好(r=0.9933);Beagle 犬灌胃给子荷叶生物碱提取物0.10,0.15,0.20 g·kg^(-1)后符合二室开放式模型,t_(1/2α)分别为0.22,0.23,0.26 h;t_(1/2β)分别为0.56,0.85,0.77 h;荷叶碱在体内符合一级药动学过程。结论:该法专属性强、灵敏、准确,能够满足药代动力学研究需要。

制备高效液相色谱分离纯化荷叶碱

目的研究制备型高效液相色谱Pep-HPLC分离纯化荷叶碱的方法。方法荷叶提取物经1%盐酸水溶液提取后,用氯仿萃取。萃取液蒸干,以流动相溶解。用P rep-HPLC分离制备。收集液浓缩到一定体积析出针状晶体,即得荷叶碱。结果该方法所得产品经M S、IR、UV1、H-NM R和HPLC图谱鉴定,与文献、对照品比较,确定为荷叶碱,质量分数大于98%,制备收得率大于49%。结论本法生产周期短,产品质量高,方法简便,生产费用低,荷叶碱产品可以用作分析方法的对照品。

鄂产药材荷叶中荷叶碱及槲皮素的含量分析

目的：建立荷叶中槲皮素和荷叶碱的含量分析方法，考察不同品种、产地以及采收时间对于荷叶中槲皮素及荷叶碱的含量的影响。方法：采用高效液相色谱（HPLC）法测定湖北境内3个品种和5个不同产地和不同采收时间的荷叶中荷叶碱、槲皮素两类有效成分的含量。结果：荷叶碱和槲皮素含量分别在1．78～28．56，5．35～53.52mg·L^-1范围内呈良好的线性关系。由于品种、产地、采收时间不同，荷叶中荷叶碱和槲皮素的含量相差较大。其中汉川、潜江、武汉汉阳近郊荷叶的指标成分含量较高，九月为荷叶采收的最佳时期。结论：本方法可筛选荷叶优良药用品种并指导其合理采收。

前荷叶碱对血管紧张素Ⅱ诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的影响

目的 观察前荷叶碱对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导人脐静脉内皮细胞（HUVECs）凋亡的影响，探讨其对HUVECs的保护作用机制。方法 体外培养HUVECs细胞系ECV304，以10μmol／L卡托普利或10、1、0．1、0．01μmol／L前荷叶碱作用于HUVECs，30min后再加入AngⅡ1μmol／L，光镜下观察细胞形态，MTT法观察前荷叶碱对HUVECs活性的影响，比色法测定NO、总一氧化氮合酶（tNOS）、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）水平，流式细胞仪测定细胞凋亡率。结果 与对照组比较，AngⅡ能明显诱导HUVECs的凋亡（P〈0．01），10μmol／L卡托普利及0．01～10μmol／L前荷叶碱可明显改善内皮细胞形态，组织活性明显升高（P〈0．05），能增加HUVECs释放NO及生成tNOS（P〈0．05），但对iNOS影响不大，使AngⅡ诱导的HUVECs凋亡细胞数明显减少（P〈0．05）。结论 前荷叶碱通过增加NO生成而抑制AngⅡ诱导的HUVECs凋亡，从而发挥可能的内皮保护功能。

高效液相色谱法测定荷叶中荷叶碱的含量

目的:建立 HPLC 测定荷叶中荷叶碱含量的方法。方法:采用 Symmetry-C_(18)柱(3.9mm×150mm,5μm),流动相为乙腈-水-三乙胺-冰醋酸(56∶44∶1∶0.15);流速:0.5mL·min^(-1);检测波长:270nm;柱温:25℃。结果:荷叶碱在3.00～15.00μg·mL^(-1)范围内具有良好的线性关系,r=0.9999,平均回收率为98.3%,RSD=2.1%(n=5)。结论:本法简便、准确,灵敏度高,重复性好,可用于荷叶成分的含量测定。

HPLC法同时测定荷叶中的荷叶碱、芦丁、槲皮素

目的建立HPLC法同时测定荷叶中荷叶碱、芦丁、槲皮素的含有量。方法荷叶甲醇提取液采用依利特hypersil ODS2色谱柱（4.6 mm×250 mm,5μm）分析;流动相为乙腈（A）-水（B,含0.3%磷酸和0.4%三乙胺）,梯度洗脱（0~10 min,14%A;10~17 min,14%~5%A;17~25 min,5%~14%A;25~50 min,14%A;50~75 min,14%~34%A）;体积流量1.0 m L/min;检测波长256 nm;柱温25℃。结果荷叶碱、芦丁、槲皮素分别在0.015~0.300μg（r=0.999 9）、0.012~0.240μg（r=0.999 9）、0.010 4~0.208μg（r=0.999 9）范围内线性关系良好,平均回收率（n=6）分别为99.7%（RSD=1.3%）、100.0%（RSD=1.4%）、100.1%（RSD=1.6%）。结论该方法可用于荷叶的质量控制。

荷叶碱防治小鼠高脂血症作用及其机制

目的研究荷叶碱对饮食诱导的高脂血症小鼠的影响并了解其降脂机制。方法将小鼠根据饲料分为3组:正常对照组(n=10)、模型对照组(n=10)、干预组(n=10)。正常对照组采取普通饮食(ANI-76A饲料:12.4%脂肪,68.8%碳水化合物,18.8%蛋白质);模型对照组采用高脂饮食诱导(高脂饲料:37.1%脂肪,42.4%碳水化合物,20.5%蛋白质);干预组在高脂饲料基础上添加了0.5%荷叶碱。小鼠自由食用,共10周。比较3组小鼠体质量、血脂、脂代谢关键酶、肝脏氧化应激的变化并研究脂质代谢通路。结果高脂饮食成功诱导出高脂血症模型小鼠:肥胖、血脂增高(P<0.05)。干预组与模型对照组比较:小鼠体质量降低[(33.97±3.46)g比(27.62±2.87)g],血脂降低[(2.73±0.26)g比(1.91±0.21)g],均P<0.05,但不能改善其高甘油三酯血症(P>0.05);肝脂酶活性[(4.15±1.26)U·m L-1比(9.01±1.34)U·m L-1]及脂蛋白脂酶活性提高[(8.12±3.07)U·m L-1比(13.48±3.75)U·m L-1],且降低了肝脏氧化应激(P<0.05)。高脂饮食诱导脂质合成基因SREBP-1c、FAS、SCD-1及PPARγmRNA显著上调(P<0.05),而使脂质氧化代谢基因PPARα、CPT-1a mRNA下调(P<0.05),干预组则逆转了这些变化(P<0.05)。结论荷叶碱能改善小鼠高脂血症,且可能与增加脂酶活性、减少氧化应激及调控脂质合成与氧化代谢相关。

荷叶中荷叶碱及原花青素提取工艺优化

目的:优选荷叶中荷叶碱、原花青素提取工艺。方法:采用正交实验设计,以原花青素、荷叶碱的提取率为指标,考察磷酸浓度、提取时间、料液比等因素对提取率的影响,优选最佳工艺参数。结果:以0.3%(V/V)磷酸为提取溶剂,料液比为1∶25(g/L),提取时间1.5h,提取2次,原花青素的提取率为89.2%,荷叶碱的提取率为69.9%。结论:采用酸水法提取荷叶中荷叶碱、原花青素,具有提取效率高、工艺简便、成本低等特点,适合于工业化大生产应用。

荷叶碱对野生型和突变型囊性纤维化跨膜电导调节因子氯离子通道的激活作用

目的:从天然单体化合物中筛选能够激活囊性纤维化跨膜电导调节因子(CFTR)Cl-通道转运活性的激活剂。方法:利用稳定表达人CFTR和对卤族元素碘离子高度敏感的荧光绿蛋白突变体EYFP-H148Q的Fischer大鼠甲状腺上皮细胞为筛选模型,测定386种中药单体化合物对CFTR介导的I-内流速度的影响。结果:发现生物碱类化合物荷叶碱对野生型和△F508突变型CFTRCl-通道具有激活作用,而对G551D突变型CFTRCl-通道无激活作用。荷叶碱对野生型和△F508突变型CFTRCl-通道的激活作用具有作用迅速、可逆的特点,并且依赖于细胞内cAMP水平。荷叶碱不提高细胞内cAMP水平,当CFTR磷酸化程度达到最大时仍能进一步激活CFTRCl-通道激活作用,表明它可能是通过与CFTR直接结合而发挥作用的。结论:首次发现荷叶碱对野生型和△F508突变型CFTRCl-通道的激活作用,该天然化合物将在阐明CFR活性机制及作为先导化合物开发与CFTR有关的疾病治疗药物等方面具有重要用途。