橙色莫桑比克罗非鱼和荷那龙罗非鱼的AFLP分析

运用AFLP分子标记技术检测了橙色莫桑比克罗非鱼(Oreochromis mossambicus)和荷那龙罗非鱼(Oreochromishornorum)的种群遗传多样性。提取2种鱼的基因组DNA,经EcoRⅠ和MseⅠ限制性内切酶酶切并加接头,从16对选扩引物组合中选出3对扩增结果较好的引物进行PCR扩增。扩增产物经PAGE胶电泳、银染,检测其多态性。3对引物在2种罗非鱼的40个个体中共扩增出94条带,其中多态性条带76条,占总扩增条带的80.9%,2个群体的多态性条带比例分别为71.6%和52.4%。根据Nei氏(1978)统计分析得出橙色莫桑比克罗非鱼种群内遗传相似系数为0.765,荷那龙罗非鱼的为0.821,表明2个罗非鱼种群均具有较高的遗传多样性,橙色莫桑比克罗非鱼种群内遗传多样性相对更高些。2种罗非鱼的种间遗传距离为0.279,推测该杂交组合可能具有杂种优势。

橙色莫桑比克罗非鱼(Oreochromis mossambicus)和荷那龙罗非鱼(O·hornorum)的选育效果评价

以橙色莫桑比克罗非鱼(Oreochromis mossambicus)和荷那龙罗非鱼(O.hornorum)为基础群体,分别对其进行选育,并对产生的选育系F4代的选育效果进行了评价。经过4代的选育,橙色莫桑比克罗非鱼和荷那龙罗非鱼的日增重率分别比对照系提高了27.96%和36.73%,差异显著(P<0.05),平均每代选育效应分别为6.99%和9.18%。F4代的体重变异系数分别为23.74%和22.17%,比对照组分别降低了24.83%和36.33%。而且第一次性成熟时这2种罗非鱼的平均体重都比对照系增加2倍以上,其杂交子代的雄性率达到了99.4%。试验结果表明,橙色莫桑比克罗非鱼和荷那龙罗非鱼的选育效果明显,F4代的生长性能有了显著提高,个体之间的生长速度趋于一致;也说明这2种罗非鱼F代仍具有一定的选育潜力,对其继续进行选育是切实可行的。

橙色莫桑比克罗非鱼和荷那龙罗非鱼的染色体核型分析

采用体腔注射PHA-空气干燥法对橙色莫桑比克罗非鱼(Oreochromis mossambicus)和荷那龙罗非鱼(O.hornorum)染色体数量、形态和核型进行了分析和比较。结果显示:两种罗非鱼的二倍体染色体数目均为2n=44,都具有1对特大的染色体,未发现中部着丝粒染色体对和异型染色体。两种罗非鱼的染色体组型形态基本相似,它们的核型公式为2n=44,6sm+24st+14t,NF=50,用常规染色体染色的方法难以区分。研究结果表明,这两种罗非鱼的常规核型差异不显著,在分类地位上非常接近。

荷那龙罗非鱼ghrelin cDNA的克隆及表达特征

以荷那龙罗非鱼胃组织中提取的总RNA为模板,采用RT-PCR方法克隆出荷那龙罗非鱼ghrelin前体基因的cDNA全序列。所获得的ghrelin cDNA总长为833 bp,包括97 bp的5′非编码区,412 bp的3′非编码区和324 bp的开放阅读框,编码107个氨基酸残基。核苷酸序列同源性分析显示,荷那龙罗非鱼ghrelin与莫桑比克罗非鱼和尼罗罗非鱼ghrelin序列的相似性达99.0%以上。采用半定量RT-PCR方法检测雌、雄荷那龙罗非鱼胃、肌肉和垂体等多个组织中ghrelin基因的表达,结果显示,荷那龙罗非鱼ghrelin基因有广泛的组织分布,ghrelin基因在雌、雄鱼胃中的表达量均最高,在其他组织的表达量存在雌雄个体差异。雌鱼肌肉中ghrelin基因的表达量明显高于雄鱼,是雄鱼的132倍。试验鱼饥饿4周后,采用荧光定量RT-PCR方法检测胃中ghrelin基因表达量变化,结果表明:饥饿组较对照组ghrelin mRNA表达量有增加,饥饿组个体中ghrelin基因表达量最高的个体的表达量比对照组中表达量最低的个体增加了47.3倍。

荷那龙罗非鱼两种GHSR基因的克隆与序列分析

用RT-PCR和RACE方法,从荷那龙罗非鱼(Oreochromis hornorum)垂体中克隆到生长激素促分泌素受体(GHSR)cDNA全序列。荷那龙罗非鱼GHSR基因具有GHSR-1a与GHSR-1b两个高度保守cDNA序列。GHSR-1a序列全长1 646 bp,包括225 bp的5′非编码区,266 bp的3′非编码区和1 155 bp的开放阅读框,编码384个氨基酸残基,具有7个跨膜结构域结构(transmembrane domains,TM);GHSR-1b序列全长1 877 bp,包括225 bp的5′非编码区,755 bp的3′非编码区和897 bp的开放阅读框,编码298个氨基酸残基,只具有前5个TM,在第6个TM的第4个氨基酸处开始缺失。将GHSR cDNA序列与基因组序列比较发现,这两种cDNA转录本来自同一个基因的不同变体。

荷那龙罗非鱼和莫桑比克罗非鱼3种同工酶的分析

采用聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳法分析了酯酶(EST)、超氧化物歧化酶(SOD)和乳酸脱氢酶(LDH)3种同工酶在荷那龙罗非鱼O reochrom is hornorum和莫桑比克罗非鱼O.m ossam bicus肝脏、心脏、肌肉、脑和肾脏5种器官组织中的表达情况。结果表明,两种罗非鱼的这3种同工酶均具有明显的组织特异性。EST在两种罗非鱼的肝脏中表达最强,带型最复杂;EST还有种的特异性,如EST-7和EST-8仅分别存在于莫桑比克罗非鱼的心脏和脑器官中,可作为鉴别两种罗非鱼的标记;两种鱼的EST同工酶还具有多态现象。SOD和LDH在两种罗非鱼的酶谱表型、活性等方面非常相似。SOD在肌肉组织中的酶带条数最多,且多数酶带的表达量较高,而LDH在脑、肾脏中表达丰富。同工酶分析结果反映了两种罗非鱼具有较近的亲缘关系,是种间杂交的基础;同时说明两种罗非鱼含有供选择的等位基因,可用于良种选育。

荷那龙罗非鱼、橙色莫桑比克罗非鱼及其杂交F1呼吸耗氧率的初步研究

用呼吸室法对荷那龙罗非鱼、橙色莫桑比克罗非鱼及其杂交F1的呼吸耗氧率、窒息点进行了试验。试验结果表明：①水温为16～32℃时，平均体重为10，40～116．28g的荷那龙罗非鱼的耗氧率在0．07～0．6mg/g·h，平均体重为18．98～102．53g的橙色莫桑比克罗非鱼的耗氧率范围是0．06～0．43mg/g·h，平均体重2．24～133．82g的杂交F1莫荷鱼的耗氧率范围是0．06～0．65mg/g·h；3种试验鱼的耗氧率随着温度的升高而增加；耗氧率与鱼体规格呈负相关。②3种实验鱼的耗氧率均为白天高于夜间。③水温24℃时，3种试验鱼的溶氧临界窒息点分别是：荷那龙罗非鱼0．33～0．55mg＊L，橙色莫桑比克罗非鱼0．24～0．31mg／L，莫荷鱼为0．38～0．43mg／L。

低温胁迫对荷那龙罗非鱼内脏组织脂肪酸变化的影响

实验以荷那龙罗非鱼(Oreochromis hornorum)为研究对象,在室内控温循环水族箱内,按照1℃/d的速度,将温度分别从暂养的25℃,降到25℃、20℃、18℃、16℃、14℃、13℃、12℃几个实验温度组进行低温胁迫实验,每隔10 d定期取样,取样5次,取背侧肌、肝胰脏、肠和内脏脂肪组织四个组织的样,来分析低温胁迫对实验对象所造成的影响。结果发现:在实验过程中,肠和肝胰脏组织没有明显的变化规律;背侧肌和内脏脂肪组织在实验期间两者SFA和MUFA都随着取样时间的延长,所占脂质的百分含量下降,各组间的差异显著(P<0.05),PUFA百分含量上升(P<0.05),内脏脂肪组织SFA和MUFA下降,PUFA上升,差异极显著水平(P<0.01)。

不同强度的低温胁迫对荷那龙罗非鱼肌肉脂肪酸变化的影响

实验以荷那龙罗非鱼(Oreochromis hornorum)为研究对象,在室内控温循环水族箱内,缓慢降温试验将荷那龙罗非鱼从暂养的25℃,按照1℃/天速度,分别降到25℃、20℃、18℃、16℃、14℃、13℃、12℃几个实验温度组,开始定期取样,取背侧肌来分析低温胁迫对实验对象造成的影响。急速降温试验在25℃暂养后,直接放入到25℃、16℃、13℃三个温度组进行快速降温的低温胁迫实验,同样取背侧肌样来观察对荷那龙罗非鱼造成的影响。结果发现:在不同强度的低温胁迫下,实验对象的肌肉脂肪酸变化规律不一致。在缓慢降温的实验条件下,高肥满度的实验对象,存活率高;在快速降温的实验条件下,低肥满度的实验对象表现出更高的适应能力。

荷那龙罗非鱼体内不同组织脂肪酸组成的差异分析

实验以荷那龙罗非鱼(Oreochromis hornorum)为研究对象,在自然正常的养殖条件下,随机的抽取15尾荷那龙罗非鱼,取背侧肌、肝胰脏、肠和内脏脂肪组织四个组织的样,来分析不同组织的脂肪酸组成差异。结果发现:四个组织中所含脂肪酸种类最多的为内脏脂肪组织,其次是肝胰脏和肠,最后是肌肉;几种组织中含量最高的均为16和18碳的脂肪酸。在荷那龙罗非鱼的内脏脂肪组织中,含量最高的为油酸(C18:1)、亚油酸(C18:2)、亚麻酸(C18:3);EPA和DHA在肌肉中含量最高;肠组织中含有最高的饱和脂肪酸(SFA),其次是肌肉;单不饱和脂肪酸(MUFA)在内脏脂肪组织中含量最高;多不饱和脂肪酸(PUFA)在肌肉中含量最高。

莫桑比克罗非鱼和荷那龙罗非鱼耐盐性的初步研究

用人工配制的6个盐度咸水(0、15、25、30、35、40),对莫桑比克罗非鱼和荷那龙罗非鱼耐盐性进行了初步研究。结果表明:在几种耐盐指标中,莫桑比克罗非鱼和荷那龙罗非鱼的96小时半致死盐度分别为22．29和21．56;在除盐度为40外的其它各盐度梯度中,莫桑比克罗非鱼的50％成活时间和平均成活时间均高于荷那龙罗非鱼,但差异不显著 (p>0．01)。在对2种罗非鱼的盐度驯化过程中,各个驯化盐度梯度下,莫桑比克罗非鱼的死亡率均小于荷那龙罗非鱼的死亡率。

珠江所“橙色莫桑比克罗非鱼和荷那龙罗非鱼选育及杂交优势利用研究”等四个项目通过专家验收

5月28日，珠江所卢迈新研究员主持的广东省海洋渔业科技推广专项“橙色莫桑比克罗非鱼和荷那龙罗非鱼选育及杂交优势利用研究”（编号：A200601B03）、“罗非鱼良种选育及重要功能基因克隆与功能分析”（编号：A200501B03）、“罗非鱼优良品种选育及养殖推广”（编号：B200701A06）和“罗非鱼（繁育、养殖及加工等）产业发展关键技术研究”（编号：A200899B02）通过了广东省海洋与渔业局组织的专家验收。

两种罗非鱼主要生物学性状及杂交F1代生长性能的研究

测量了荷那龙罗非鱼（O．hornorum）和橙色莫桑比克罗非鱼（O．mossambicus）的主要生物学性状。结果得出：①2种罗非鱼通过外形能够清楚区分，荷那龙罗非鱼体色暗黑，有纵纹，体型呈纺锤型；莫桑比克罗非鱼体色橙色，无纵纹，体型呈长梭型。②2种罗非鱼最小性成熟年龄均为6个月，最小体长荷那龙罗非鱼为8．64cm，莫桑比克罗非鱼为6．60cm，绝对繁殖力前者为810粒，后者为702。③水温16～32℃时，荷那龙罗非鱼（体重10．40～116．28g）耗氧率在0．07～0．61mg／（g·h）之间，橙色莫桑比克罗非鱼（体重18．98～102．53g）耗氧率范围是0．06～0．43mg／（g·h）。水温24℃时，前者溶氧临界窒息点是0．33～0．55mg/L，后者是0．24～0．31mg/L。④两罗非鱼均属于耐盐性较强的鱼类，荷那龙罗非鱼的MLS-96（96h半致死盐度）为21．56，莫桑比克罗非鱼为22．29。⑤荷那龙罗非鱼的低温致死范围是9．5～15．1℃，莫桑比克罗非鱼的低温致死范围为8．0-9．9℃。前者对低温的耐受较差。⑥两罗非鱼的杂交F1代，雄性率高，养殖性能较好，具有推广价值。

两种罗非鱼半咸水养殖试验

罗非鱼是世界水产业的重点科研培养的淡水养殖鱼类之一。罗非鱼属广盐性鱼类,通常生活于淡水中,也能生活于不同盐份含量的咸水中,但不同种类的耐盐能力不同。尼罗罗非鱼可在盐度〈13‰水环境生存,奥尼罗非鱼可在盐度〈17‰水环境正常生长,红罗非适宜盐度可达21‰,奥利亚适宜盐度范围〈25‰;而新吉富幼鱼能在28‰以下的海水盐度下生存、生长;杨淞等人试验结果表明,在盐度为（0、15、25、30、35、40‰）的条件下,莫桑比克罗非鱼和荷那龙罗非鱼的96h半致死盐度为22.29和21.56。已有相关研究表明,

4种罗非鱼不同组织中HSP70基因对盐胁迫的响应

为了从分子水平评估莫桑比克罗非鱼、荷那龙罗非鱼及其正交子代（莫桑比克罗非鱼♀×荷那龙罗非鱼）和反交♂子代（荷那龙罗非鱼♀×莫桑比克罗非鱼）的耐盐性能,利♂用RT-PCR方法研究了盐胁迫下这4种罗非鱼不同组织中（鳃、肾、垂体和肌肉）热休克蛋白70（HSP70）基因的表达规律。结果表明：在盐度为22条件胁迫下4种罗非鱼各组织中HSP70表达水平总体呈现先增加后降低的规律,24 h时达最大值,48 h时下降至初始水平;盐度提高至35后HSP70的表达无显著变化。但不同种罗非鱼及不同组织之间也存在差异,反交子代鳃中HSP70在整个盐胁迫过程中都未上调表达;在盐度为22条件胁迫下,正反交子代肾中HSP70基因表达量比父母本肾中HSP70更早达到峰值;反交子代垂体中HSP70表达量在0~48 h内持续缓慢增加,48 h时达最大值;莫桑比克罗非鱼肌肉中HSP70基因在盐度22条件胁迫下表达量迅速升高,且维持较高水平直至盐度35条件胁迫之后。结果表明：HSP70表达水平的高低与罗非鱼的耐盐能力和应激程度密切相关,其中盐胁迫下肾中HSP70的表达规律与以上4种罗非鱼的耐盐能力之间相关性较强,可以作为评价这4种罗非鱼耐盐能力的潜在分子指标。