莪术二酮对凝血酶诱导的人血小板整合素αⅡbβ3活化的抑制作用

目的研究莪术二酮对凝血酶诱导的人血小板整合素αⅡbβ3活化的抑制作用。方法健康志愿者全血制备成洗涤血小板,分别以终浓度100、150、200μmol/L莪术二酮与洗涤血小板共孵育,凝血酶作为诱导剂,以不加莪术二酮的血小板同步处理为对照组,采用血小板聚集实验检测凝血酶的最佳浓度和血小板的聚集功能,流式细胞术检测血小板的活化(P-选择素)和整合素αⅡbβ3活化(PAC-1)情况,Western blot法检测Integrinβ3相关蛋白表达。结果与对照组比较,莪术二酮可抑制凝血酶诱导的血小板聚集、P-选择素的表达、PAC-1的结合能力以及Talin 1、p-Src、p-Integrinβ3蛋白表达(P<0.05),但莪术二酮的作用弱于阳性药替罗非班(P<0.05)。结论莪术二酮可以通过降低Talin 1和p-Src蛋白表达,从而抑制整合素αⅡbβ3活化,进而抑制凝血酶诱导的血小板活化发挥抗血小板的作用。

UV-Vis法测定莪术酮胶束中莪术酮的含量

目的:建立以紫外-可见分光光度法测定莪术酮胶束中莪术酮含量的方法。方法:以香草醛硫酸溶液显色,在500nm波长处测定吸收度。结果:莪术酮检测浓度在0.050～0.400mg.mL-1范围内与吸收度呈良好线性关系(r=0.9993);平均回收率为99.14%,RSD=1.23%(n=9)。结论:本方法简便、准确,可用于本品的质量控制。

莪术中莪术二酮抗凝血和抗血栓作用的实验研究

目的研究莪术二酮(Curdione)抗凝血和抗血栓作用,并探讨其可能的作用机制。方法应用角叉菜胶致小鼠尾血栓形成观察莪术二酮对血栓形成的影响;通过毛细管法观察莪术二酮对小鼠凝血时间(CT)的影响,并应用全自动血凝仪测定大鼠凝血酶原时间(PT)、部分活化凝血活酶时间(APTT)和凝血酶时间(TT);观察其对ADP诱导大鼠血小板聚集的影响;采用酶联免疫吸附测试法(ELISA)检测血清一氧化氮(NO)含量和血浆P-选择素(P-selectin)水平,放免法检测血浆血栓素B2(TXB2)和6-酮-前列腺素F1α(6-keto-PGF1α)含量。结果莪术二酮能抑制体内血栓形成;延长CT、APTT和TT;并能抑制体内ADP诱导血小板聚集;提高NO含量,降低P-selectin水平和TXB2/6-keto-PGF1α比例。结论莪术二酮具有显著抗凝血和抗血栓形成作用,其作用机制可能与抑制血小板聚集及升高NO含量有关。

HPLC法测定莪术饮片中莪术二酮、莪术醇、吉马酮

目的建立一种同时测定莪术饮片中3种成分含量的高效液相色谱法。方法固定相为依利特Hypersil ODS柱(4.6mm×250mm,5μm);乙腈-水为流动相,梯度洗脱;流速:1mL/min;柱温25℃;检测波长:216nm;进样量为10μL。结果在上述色谱分离条件下,莪术二酮、莪术醇、吉马酮的浓度在0.008 1～0.257 4、0.006 7～0.213 6、0.001 6～0.050 0mg/mL时,各成分浓度与色谱峰面积之间线性关系良好,平均回收率分别为:99.1%、98.6%、98.2%,回收率RSD分别为:2.3%、1.4%、2.0%。结论本实验研究所建立的方法可靠、灵敏、简便、专属性强,能比较全面反映不同产地莪术饮片的内在质量,为供临床使用的莪术饮片的安全使用及其质量控制提供了科学依据。

莪术挥发油中莪术二酮、吉马酮在大鼠体内的药动学研究

目的研究莪术挥发油中莪术二酮、吉马酮在大鼠体内的药动学特征。方法采用水蒸汽蒸馏法提取莪术中挥发油灌胃大鼠并采集血样。选用EliteHypersilODS2色谱柱（4．6mm×250mm，5μm），乙腈一水为流动相进行梯度洗脱，体积流量1．0mL／min，检测波长214nm。结果血浆样品中莪术二酮、吉马酮无干扰，分别在1．073—68．64μg／mL、0．1972—12．62μg／mL范围内呈现良好的线性关系，精密度、稳定性、回收率均符合生物样品测定要求。结论所建测定方法操作，适用于莪术二酮、吉马酮在大鼠体内血药浓度的测定及药动学两者均符合二室模型。

莪术二酮对大鼠血瘀模型血液流变学指标的影响

目的观察莪术二酮(curdione)对大鼠血瘀模型血液流变学与纤溶指标的影响,同时研究其体外溶栓作用,从而探讨其活血化瘀功效的作用机制。方法以肾上腺素与冰水刺激为致瘀因素复制大鼠血瘀证动物模型,观察莪术二酮对血瘀证模型全血黏度及血浆黏度变化,检测纤维蛋白降解产物(FDP)和D-二聚体(DD);体外测定对不同时间大鼠血栓的溶解百分率,观察莪术二酮溶栓作用。结果莪术二酮可减低血瘀模型大鼠全血黏度和血浆黏度,改善血液循环(P<0.05);能降低DD水平;但对FDP水平无影响(P>0.05),且对体外血栓的溶栓作用不显著。结论莪术药材的"行气破血"作用与莪术二酮改善血液流变学指标有关,但实验剂量下莪术二酮溶栓作用不显著。

HPLC测定郁金类药材中的吉马酮和莪术二酮

目的测定郁金类药材中的吉马酮、莪术二酮。方法采用HPLC法，色谱柱为C18柱，提取溶剂为甲醇，流动相为乙腈-水（75-25），流速0．8ml·min^-1，检测波长244nm。结果加样回收率95％～105％，RSD分别为1．34％、1．87％（n=5）。结论所建方法简便、准确，为郁金类中药材吉马酮、莪术二酮的测定提供了参考依据。

GC-MS法分析有氧和充氮加热条件下吉马酮和莪术二酮的化学变化

目的分析吉马酮和莪术二酮在有氧和充氮保护条件下加热过程中的化学成分变化以寻找温莪术炮制理论依据。方法采用GC-MS技术并结合NIST软件分析莪术二酮和吉马酮在这一过程中的变化。结果吉马酮性质不稳定,在有氧条件下吉马酮会完全分解,在充氮保护下吉马酮会部分分解。莪术二酮在充氮保护或有氧条件下都表现出较好的化学稳定性,只有部分被转化为其他成分。结论本实验推测温莪术的传统加工方法可以部分避免吉马酮降解。

CGC法同时测定两种莪术油在大鼠血浆中莪术醇和莪术二酮的含量

目的:研究比较莪术油、莪术残油(莪术油提取出β-榄香烯的残余物)在大鼠血浆中莪术醇和莪术二酮的含量。方法:采取大鼠灌胃给药,以对羟基苯甲酸乙酯为内标物,采用毛细管气相色谱法同时测定,内标法计算莪术油、莪术残油中标志性成分莪术醇和莪术二酮的血浆药物浓度,运用DAS2.0分析计算药代动力学参数。结果:莪术醇和莪术二酮分别在0.001028～0.6580mg/mL和0.04064～1.300mg/mL范围内呈现良好的线性关系,精密度、稳定性及融冻次数考察均符合有关要求,测定方法的绝对回收率莪术醇为72.3%～85.3%,莪术二酮为70.1%～87.0%;内标物对羟基苯甲酸乙酯的绝对回收率为74.9%～96.5%;方法回收率莪术醇为55.8%～69.0%,莪术二酮为61.6%～68.3%,均符合有关要求。通过药时曲线和药代动力学参数分析,莪术油、莪术残油中莪术醇、莪术二酮在大鼠的体内代谢过程基本符合二房室模型。结论:在莪术油和莪术残油中莪术醇的血药浓度变化相似,而莪术二酮血药浓度存在较大差异。

莪术二酮对肝部分切除老年小鼠术后认知功能和海马区炎性因子表达的影响

目的观察莪术二酮对肝部分切除的老年小鼠术后认知功能和海马区炎性因子表达的作用。方法按文献报道方法建立肝部分切除老年小鼠模型,分为假手术组、手术组(模型组)及莪术二酮高、中、低剂量组(造模并药物干预),另设空白对照组。采用Morris水迷宫评价小鼠的认知功能,采用酶联免疫吸附法检测海马组织中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的水平,Western blot检测海马中NF-κB、白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)及肿瘤坏死因子(TNF-α)蛋白的表达。结果手术组动物水迷宫逃逸潜伏期时间明显延长(P<0.01),穿台次数显著减少(P<0.05);与手术组相比,莪术二酮显著性缩短术后逃逸潜伏期(P<0.05),并增加穿台次数(P<0.05)。肝切除术后海马组织中SOD、CAT和GSH-Px的含量均明显降低(P<0.05),MDA含量则明显升高(P<0.01)。莪术二酮组SOD、CAT和GSH-Px的含量明显升高(P<0.05),MDA释放减少(P<0.05)。莪术二酮组的术后NF-κB、IL-1β、IL-6及TNF-α蛋白的高表达显著抑制(P<0.05)。结论莪术二酮可显著改善老年小鼠部分肝切除术后认知功能障碍,其机制可能与其通过抑制海马组织中氧化应激,抑制NF-κB激活,减少炎症细胞因子IL-1β、IL-6及TNF-α的释放有关。

温莪术油中新莪术二酮的分离分析及稳定性研究

对温莪术油中新莪术二酮的分离分析及稳定性进行研究.采用柱色谱、制备薄层、溶剂重结晶法等分离提取,经1H NMR、13C NMR、MS等波谱技术鉴定结构,并初步考察了新莪术二酮的稳定性.结果表明新莪术二酮在加热条件下不稳定,在Lewis acid催化下可异构化为莪术醇.新莪术二酮为含氧倍半烯萜类化合物,属于热敏性物质.本研究为温莪术油质量控制提供了有效数据.

莪术油中莪术二酮的分离和鉴定

目的:分离鉴定莪术油中莪术二酮成分。方法:采用硅胶柱色谱的方法对莪术油的化学成分进行分离;并采用红外、气相色谱/质谱和核磁共振波谱法进行结构鉴定。结果:从莪术油中分离得到3个化合物C1,C2和C3,其中C1为莪术二酮,其在莪术油中的相对含量为11.31%。结论:该分离方法简单易行,为大量分离莪术二酮进行药理学研究提供了依据。

GC测定莪术残油中莪术醇、吉马酮和莪术二酮的含量

目的:建立以毛细管气相色谱法测定莪术残油中莪术醇、吉马酮和莪术二酮含量的方法。方法:采用气相色谱法:HP-5(0.32mm×30m)石英弹性毛细管柱,进样口温度250℃,氢火焰检测器(FID)280℃,进样量4μL,不分流进样,柱流量1mL/min;程序升温:柱初始温度为100℃,以4℃/min升至140℃,以13℃/min升至170℃,保持8min,以5℃/min升至200℃;以水杨酸甲酯为内标物。结果:莪术醇进样量在0.5490～2.745μg内与峰面积比值(莪术醇/水杨酸甲酯)呈良好的线性关系Y=0.4212X-0.0766,r=0.9997,平均回收率99.0%(RSD为1.0%);吉马酮进样量在0.1145～0.5725μg内与峰面积比值(吉马酮/水杨酸甲酯)呈良好的线性关系Y=0.2095X-0.0141,r=0.9993,平均回收率100.3%(RSD为1.4%);莪术二酮进样量在0.2715～1.3575μg内与峰面积比值(莪术二酮/水杨酸甲酯)呈良好的线性关系Y=0.2508X-0.0281,r=0.9995,平均回收率99.2%(RSD为2.2%)。结论:不同批号的莪术残油中3种成分的含量差异不显著。

高效液相色谱法测定莪术油中莪术二酮和牦牛儿酮的含量

目的:建立莪术油中莪术二酮和牦牛儿酮的含量测定方法。方法:采用Kromasil-CN柱(150 mm×4.6 mm),乙腈-水(32∶68)为流动相,检测波长为220 nm。结果:莪术二酮的回收率为100.4%,RSD=1.5%(n=5);牦牛儿酮的回收率为97.8%,RSD=1.6%(n=5)。结论:该法简便、快速、重复性好,可作为莪术油及其制剂的定量分析方法。

HPLC波长切换法测定莪术残油中莪术二酮莪术醇和吉马酮的含量

目的:建立用HPLC波长切换法同时测定莪术残油中莪术二酮、莪术醇和吉马酮含量的测定方法。方法:采用Kromasil 5μm C18(4.6mm×150mm);流动相为乙腈-1%磷酸溶液;流速1.0 mL.min-1;检测波长213 nm,236nm;柱温35℃。结果:莪术二酮在0.1215～0.6076μg范围内线性关系良好,平均回收率为100.0%,RSD为2.4%;莪术醇在0.5760～2.880μg范围内线性关系良好,平均回收率为99.9%,RSD为2.1%;吉马酮在2.014～10.07μg范围内线性关系良好,平均回收率为100.3%,RSD为2.3%。结论:不同批号的莪术残油中3种成分的含量差异不显著。

黑曲霉AS 3.739对莪术二酮的羟基化修饰

目的筛选对莪术二酮具有羟基化修饰作用的菌株。方法通过二级发酵法培养菌株,应用TLC和HPLC法检测转化结果 ,通过硅胶柱层析法分离纯化羟基化产物,应用光谱学方法鉴定产物的化学结构。结果从数十株丝状真菌筛选得到黑曲霉AS 3.739对莪术二酮具有羟基化修饰作用,并分离、纯化和鉴定了2种主要产物1、2。结论用黑曲霉(Aspergillus niger)AS3.739对莪术二酮实现了羟基化修饰,2种产物分别鉴定为2β-羟基莪术二酮(1)和3α-羟基莪术二酮(2),其中主产物2为首次用曲霉(Aspergillus)菌属转化获得。

气相色谱法测定不同配伍比例三棱、莪术药对莪术醇、莪术二酮的含量

目的：建立测定不同配伍比例三棱、莪术药对中莪术醇、莪术二酮含量的方法,探讨不同比例配伍的药对的合理性。方法：色谱柱Agilent HP-5柱（30 m×250μm,0.25μm）;进样口温度220℃;检测器（FID）温度270℃,载气∶高纯氮气,流量30 m L·min-1,空气300 m L·min-1,氢气m L·min-1。程序升温条件：初始温度50℃,以5℃/min升温速率升至125℃,恒温1 min后,以1℃/min速率升至134℃,再以5℃/min升温速率升至250℃,恒温10 min,进样量为1μL。结果：莪术醇、莪术二酮分别在2.584~33.408μg（r=0.9991）,1.216~14.592μg（r=0.9991）范围有良好的线性关系。莪术醇、莪术二酮加样回收率（n=6）分别为99.2%,98.9%,RSD均3%。三棱、莪术药对4个配伍比例（1∶1、1∶2、2∶1、0∶1）中三棱、莪术2∶1时莪术醇、莪术二酮溶出量最高。结论：该方法简便、准确,可测定三棱、莪术药对莪术醇、莪术二酮的含量,为其质量控制提供参考。

HPLC法测定莪术油葡萄糖注射液中莪术二酮的含量

目的建立莪术油葡萄糖注射液中莪术二酮的含量测定方法。方法采用Kromasil-CN柱(250×4.6mm),乙腈—水(32:68)为流动相,检测波长为220nm。结果莪术二酮的回收率为98.86%,RSD=2.58%(n=5)。结论本法简便、快速、重现性好,可作为莪术油葡萄糖注射液的定量分析方法。