miR-485-5p靶向调节婆罗双树样基因4/莫洛尼白血病毒插入点1对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖、迁移及凋亡影响

目的miR-485-5p靶向调节婆罗双树样基因4(SALL4)/莫洛尼白血病毒插入点1(BMI-1)对瘢痕疙瘩成纤维(KFBs)细胞增殖、迁移及凋亡的影响。方法选取自2021年5月至2022年5月惠州市中心人民医院收治的21例瘢痕疙瘩患者为研究对象。无菌条件下切取人瘢痕疙瘩组织,分离培养成KFBs细胞。将KFBs细胞分为miR-NC组(空白载体)、KFBs细胞组、miR-485-5p inhibitor组(miR-485-5p低表达)、miR-485-5p mimics组(miR-485-5p过表达)。4组KFBs细胞均以37℃、5%CO_(2)湿润环境中培养72 h。应用噻唑蓝比色法测定细胞增殖水平;采用流式细胞仪测定细胞凋亡水平;Transwell法评估细胞侵袭能力;实时聚合酶链反应及蛋白印迹法测定细胞miR-485-5p、SALL4、BMI-1 mRNA及蛋白水平。结果与KFBs细胞组比较,miR-485-5p inhibitor组吸光度(OD)值、存活率、穿膜数、SALL4、BMI-1 mRNA和蛋白水平升高,miR-485-5p mimics组OD值、存活率、穿膜数、SALL4、BMI-1 mRNA和蛋白水平降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与miR-485-5p inhibitor组比较,miR-485-5p mimics组OD值、存活率、穿膜数、SALL4、BMI-1 mRNA和蛋白水平降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与KFBs细胞组比较,miR-485-5p inhibitor组细胞凋亡率降低,miR-485-5p mimics组细胞凋亡率升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与miR-485-5p inhibitor组比较,miR-485-5p mimics组细胞凋亡率升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论miR-485-5p过表达能显著抑制KFBs增殖、迁移,促进细胞凋亡,其机制可能与miR-152-5p靶向调节SALL4,同时抑制BMI-1表达,进而抑制SALL4/BMI-1通路的激活有关。

B细胞特异性莫洛尼鼠白血病病毒插入位点1在头颈部鳞状细胞癌中的研究进展

在中国,头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)占全部恶性肿瘤的3%,严重影响患者的生命健康。多数研究显示,B细胞特异性莫洛尼鼠白血病病毒插入位点1(BMI1)基因在HNSCC中异常表达,其通过调节肿瘤细胞的干性促进肿瘤的发生发展,是一个具有巨大潜力的新型治疗靶点。本文回顾近年来的相关文献,从BMI1对肿瘤发生、增殖、迁移、免疫调节的作用及其抑制剂的应用进展等方面做一综述,为深入研究其作为治疗HNSCC的潜在靶点提供参考。

睫状神经营养因子及神经突起素上调莫洛尼小鼠白血病病毒前病毒插入位点1表达促进受损神经元样细胞突起再生

目的探讨莫洛尼小鼠白血病病毒前病毒插入位点1(Pim-1)基因在体外受损神经元中的表达变化,以及神经营养因子调节Pim-1表达进而促进受损神经元突起再生的相关分子基础。方法用反式视黄酸将Neuro-2a(N-2a)细胞诱导成为神经元样N-2a(N-2a-N)细胞,用去铁胺亚磺酸盐(DFO)抑制N-2a细胞增殖,用丙烯酰胺(ACR)损伤N-2a-N细胞突起。N-2a-N细胞分为正常对照组、损伤组、睫状神经营养因子(CNTF)及神经突起素(Nrn1)组,每组4个样本。免疫荧光细胞化学法检测N-2a-N细胞表型及Pim-1蛋白表达;用Real-time PCR和Western blotting检测Pim-1在各组的表达变化。用Western blotting检测调节Pim-1活性的相关分子,细胞存活、凋亡相关分子及轴突再生相关分子的表达变化。结果细胞免疫荧光显示,N-2a-N细胞表达神经元标志分子βⅢ-微管蛋白(β-Ⅲtubulin)和neurofilament-200,并表达Pim-1。50μmol DFO有效抑制N-2a细胞的增殖。应用1 mmol/L的ACR成功建立N-2a-N细胞突起损伤模型。N-2a-N细胞损伤后,Pim-1基因表达呈现先降低后升高,再降低的趋势。与损伤组相比,CNTF组和Nrn1组最长神经突起所占比例明显增加,细胞内信号转导分子细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)、磷酸化细胞外调节蛋白激酶1/2(p-ERK1/2)、信号转导及转录激活因子3(STAT3)、磷酸化信号转导及转录激活因子3(p-STAT3)及Pim-1表达上调,凋亡相关分子cleaved Caspase-3及Bax表达下调,抗凋亡相关分子Bcl-2表达上调,神经突起生长相关分子生长相关蛋白43(GAP-43)表达上调。结论修复受损N-2a-N细胞需要过表达Pim-1基因。神经营养因子CNTF、Nrn1可激活受损N-2a-N细胞ERK1/2及STAT3信号通路,进而上调Pim-1及GAP-43表达,并促进细胞突起再生。

B细胞特异性莫洛尼鼠白血病病毒插入位点1促进炎症微环境中人结直肠癌细胞HT-29细胞上皮-间质转化及侵袭

目的 探讨原癌基因B细胞特异性莫洛尼鼠白血病病毒插入位点1(Bmi-1)对炎症微环境中人结直肠癌细胞HT-29细胞肿瘤迁移及上皮-间充质转化(EMT)的作用及机制。方法 实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)及Western blot法,检测Bmi-1、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)的基因水平及Bmi-1蛋白水平,酶联免疫吸附剂测定法检测上清TNF-α和IL-6水平。噻唑蓝比色法和Transwell侵袭试验分别检测细胞增殖和侵袭能力,Western blot法检测EMT相关标记及核因子-κB (NF-κB)通路关键蛋白。结果 HT-29细胞经人急性单核细胞白血病细胞条件培养基(THP-1-CM)刺激后,Bmi-1、TNF-α和IL-6的基因表达均增高(1.86±0.08比1.00±0.05,2.38±0.13比1.00±0.14,3.00±0.15比1.00±0.05,P<0.01),Bmi-1蛋白含量增高(1.68±0.08比1.00±0.05,P<0.01),上清TNF-α和IL-6水平也有不同程度增加[(73±4) pg/ml比(32±4) pg/ml、(140±9) pg/ml比(42±9) pg/ml,P<0.01]。沉默Bmi-1基因后,HT-29细胞分泌TNF-α和IL-6的水平下降[(31±3)、(56±8) pg/ml]。THP-1-CM刺激后,细胞侵袭性增加,但对细胞增殖无影响。进一步检测发现,EMT相关标记E-钙黏素表达下调,波形蛋白和N-钙黏附素水平及NF-κB通路关键蛋白NF-κB p65的磷酸化上调。沉默Bmi-1基因后,减弱细胞侵袭,上皮细胞-间充质转化受抑制,NF-κB通路活化受抑制。结论 Bmi-1可能参与调控THP-1-CM诱导的HT-29细胞炎性因子的产生,并通过上皮细胞-间充质转化影响侵袭,与NF-κB通路活性有关。

晚期结直肠癌西妥昔单抗治疗前后循环肿瘤DNA、循环B细胞特异性莫洛尼白血病病毒插入位点1 mRNA和微小RNA-21水平变化

目的探讨晚期结直肠癌表皮生长因子受体(EGFR)单克隆抗体治疗前后循环肿瘤DNA(ctDNA)、循环B细胞特异性莫洛尼白血病病毒插入位点1 mRNA(Bmi-1mRNA)、微小RNA-21(miR-21)变化及与治疗反应性的关联性。方法回顾性分析2019年3月至2021年3月烟台毓璜顶医院98例晚期结直肠癌患者的临床资料。西妥昔单抗治疗后完全缓解4例,部分缓解26例,疾病稳定39例,疾病进展29例。将完全缓解和部分缓解作为缓解组(30例),疾病稳定和疾病进展作为未缓解组(68例)。治疗前和治疗2个周期后采用高通量测序方法检测血浆ctDNA水平,采用实时荧光定量聚合酶链反应法检测Bmi-1mRNA和miR-21水平。采用Spearman相关性分析治疗2个周期后ctDNA、Bmi-1mRNA和miR-21与治疗反应性的关系;采用多因素Logistic回归分析影响治疗反应性的独立危险因素;绘制受试者工作特征(ROC)曲线,评估治疗2个周期后ctDNA、Bmi-1mRNA和miR-21预测缓解的价值。结果两组治疗前ctDNA、Bmi-1mRNA和miR-21比较差异无统计学意义(P>0.05);缓解组治疗2个周期后ctDNA、Bmi-1mRNA和miR-21明显低于未缓解组[(10.03±3.32)μg/L比(15.33±5.14)μg/L、0.13±0.04比0.19±0.05和0.81±0.26比1.08±0.24],差异有统计学意义(P<0.01)。Spearman相关性分析结果显示,ctDNA、Bmi-1mRNA和miR-21与治疗反应性呈负相关(r=-0.500、-0.506和-0.531,P<0.01)。多因素Logistic回归分析结果显示,控制远处转移器官数量和临床分期后,ctDNA、Bmi-1mRNA和miR-21仍是影响晚期结直肠癌患者治疗反应性的独立危险因素(OR=3.342、2.725和1.838,95%CI 3.116~3.584、2.647~2.805和1.768~1.911,P<0.01)。ROC曲线分析结果显示,治疗2个周期后ctDNA、Bmi-1mRNA联合miR-21预测治疗反应性的曲线下面积最大为0.922。结论晚期结直肠癌患者EGFR单克隆抗体治疗前后ctDNA、Bmi-1mRNA和miR-21变化与治疗反应性有关,联合检测有利于筛查EGFR靶向治疗的敏感患者,并能为寻找晚期结直肠癌分子干预新靶点提供参考。

RNA干扰沉默B细胞特异的莫洛尼白血病病毒插入位点1基因对前列腺癌PC-3细胞增殖和凋亡的影响

目的观察RNA干扰沉默B细胞特异性莫洛尼白血病病毒插入位点1（Bmi—1）基因对前列腺癌PC-3细胞增殖和凋亡的影响。方法PC-3细胞随机分为3组，分别转染Bmi-1靶序列干扰RNA（Bmi．1-siRNA）、无义对照siRNA、空白脂质体。48h后收集细胞，逆转录-聚合酶链反应（RT．PCR）、Westernblot检测Bmi-1mRNA和蛋白表达水平。96孔板噻唑蓝（MTT）法检测细胞增殖活力，流式细胞仪检测凋亡率。结果PC．3细胞经Bmi—l—siRNA干扰后Bmi-1mRNA和蛋白质表达水平下调（P〈0．05）。与对照组比较，实验组细胞增殖明显受到抑制（P〈0．05）。实验组细胞凋亡率为（23．77±2．23）％，与空白对照组[（7．05±0．88）％]和阴性对照组[（6．89±I．02）％]比较明显增高（P〈0．05）。结论Bmi．1．siRNA能通过沉默靶基因Bmi—l表达抑制前列腺癌PC-3细胞增殖并促进细胞凋亡。

癌基因B细胞特异的莫洛尼白血病病毒插入位点1基因和埃兹蛋白在大肠癌组织的表达及意义

目的观察癌基因B细胞特异的莫洛尼白血病病毒插入位点1基因（Bmi-1）和埃兹蛋白（Ezrin）在大肠癌组织中的表达，探讨Bmi-1和Ezrin与大肠癌的相关性。方法采用免疫组织化学法检测75例大肠癌患者手术切除的肿瘤组织和癌旁组织中Bmi-1和Ezrin表达水平。结果Bmi-1在癌旁组织中阳性表达率为22．67％（17／75），在大肠癌组织中阳性表达率为85．33％（64／75），两者差异有统计学意义（P〈0．01），Bmi-1表达水平与大肠癌浸润深度、TNM分期、淋巴结转移有关（P〈0．05）；Ezrin在癌旁组织中阳性表达率为13．33％（10／75），在大肠癌组织中阳性表达率为72．00％（54／75），两者差异有统计学意义（P〈0．01），Ezrin表达水平与大肠癌组织学分化程度、TNM分期、淋巴结转移有关（P〈0．05）。结论检测Bmi-1和Ezrin有助于评估大肠癌患者的不良预后。

急性早幼粒细胞白血病预后的影响因素及miR-218与Bmi-1表达的相关性分析

目的分析急性早幼粒细胞白血病(APL)预后的影响因素及微RNA(miRNA/miR)-218与B细胞特异性莫洛尼白血病毒插入位点1(Bmi-1)表达的相关性。方法选取2014年9月至2018年9月于内蒙古医科大学第三附属医院确诊并系统治疗的110例APL患者作为APL组,选取同期在本院因疾病筛查需进行骨髓活检、最终明确造血系统功能正常的60例患者的骨髓活检标本作为对照组,比较两组miR-218与Bmi-1信使RNA(mRNA)的表达水平。对所有APL患者进行长期随访并记录生存结局,对比不同生存结局APL患者的骨髓活检标本组织中miR-218与Bmi-1 mRNA表达水平差异,分析miR-218与Bmi-1表达水平对APL患者生存情况的预测价值。采用Cox回归模型分析APL患者生存预后的影响因素。结果APL组患者骨髓活检标本组织中miR-218 mRNA表达水平低于对照组(0.55±0.09比0.62±0.10),Bmi-1 mRNA的表达水平高于对照组(1.28±0.27比1.09±0.21)(P<0.01)。Pearson检验发现,APL患者骨髓活检标本组织中miR-218 mRNA的表达水平与Bmi-1 mRNA的表达水平呈负相关(P<0.05)。死亡组患者骨髓活检标本组织中miR-218 mRNA的表达水平低于存活组(0.52±0.09比0.59±0.08),Bmi-1 mRNA的表达水平高于存活组(1.34±0.25比1.19±0.20)(P<0.01)。骨髓活检标本组织中,miR-218表达水平预测APL患者随访期死亡的最佳截断值为0.565,受试者工作特征曲线下面积为0.848(95%CI 0.771~0.925),灵敏度、特异度分别为72.41%、74.44%;Bmi-1表达水平预测APL患者随访期死亡的最佳截断值为1.185,受试者工作特征曲线下面积为0.823(95%CI 0.735~0.912),灵敏度、特异度分别为73.53%、75.58%。死亡组的危险度分级高危、染色体核型非典型核型、白细胞计数≥20×10^(9)/L、miR-218<0.565、Bmi-1>1.185患者比例均高于存活组,诱导治疗方案中的全反式视黄酸(ATRA)+DA(柔红霉素和阿糖胞苷)患者比例低于存活组(P<0.05或P<0.01)。Cox回归分析显示,危险度分级高危、染色体核型非典型核型、白细胞计数≥20×10^(9)/L、miR-218<0.565、Bmi-1>1.185是APL患者随访期死亡的独立危险因素,诱导治疗方案ATRA+DA是APL患者随访期死亡的保护性因素(P<0.05)。结论APL患者骨髓标本组织中miR-218 mRNA低表达、Bmi-1 mRNA高表达参与病情进展,且是影响其生存预后的重要因素。

宫颈上皮内瘤变及宫颈癌组织中DLC-1、BMI-1、C-myc、FHIT的表达及意义

目的检测宫颈上皮内瘤变(CIN)及宫颈癌组织中肝癌缺失基因1(DLC-1)、B细胞特异性莫洛尼白血病毒插入位点1(BMI-1)、原癌基因C-myc、氨酸三联体基因(FHIT)的表达,探讨其在宫颈癌发生发展中的作用。方法选取宫颈CIN组织32例、宫颈癌组织47例、正常宫颈组织20例。采用免疫组化法检测各宫颈组织中DLC-1、BMI-1、C-myc、FHIT蛋白的表达情况。分析DLC-1、BMI-1、C-myc、FHIT蛋白表达与CIN及宫颈癌组织病理特点的关系。结果宫颈癌组织及CIN组织中DLC-1、FHIT阳性表达率均低于正常宫颈组织,BMI-1、C-myc阳性表达率均高于正常宫颈组织(P均<0.05)。宫颈癌组织中DLC-1、FHIT阳性表达率均低于CIN组织,BMI-1、C-myc阳性表达率均高于CIN组织(P均<0.05)。CINⅠ级组织BMI-1、C-myc阳性表达率均高于CINⅡ、Ⅲ级(P均<0.05)。宫颈癌组织中,DLC-1表达与FIGO分期、病理分级、淋巴结转移相关,BMI-1表达与FIGO分期、淋巴结转移相关,C-myc表达与FIGO分期、病理分级相关,FHIT表达与FIGO分期相关(P均<0.05)。结论与宫颈CIN组织相比,宫颈癌组织中DLC-1、FHIT表达较低,BMI-1、C-myc表达率较高;DLC-1、BMI-1、C-myc、FHIT与宫颈癌的发生发展密切相关。

siRNA干扰BMI-1基因对膀胱癌EJ细胞增殖的调控作用及其机制

目的:对比观察膀胱癌EJ细胞及人膀胱移行上皮细胞中BMI-1基因及下游p16INK4a、p14ARF基因的mRNA及蛋白表达水平,探讨siRNA干扰BMI-1基因后对EJ细胞增殖的影响及其调控机制。方法:细胞免疫荧光观察BMI-1、p16INK4a和p14ARF蛋白在EJ细胞中表达情况及定位。Real-time RT-PCR检测EJ细胞及膀胱正常移行上皮细胞中3种基因的表达水平,Western blotting检测蛋白水平。构建干扰BMI-1基因siRNA,通过脂质体转染导入EJ细胞中,设立空白对照和阴性干扰对照组,检测BMI-1及下游p16、p14基因表达水平及蛋白表达水平的变化;以CCK-8检测细胞生长观察siRNA干扰BMI-1表达对EJ细胞增殖的抑制作用;用流式细胞术分析细胞凋亡的改变。结果:BMI-1mRNA及蛋白水平在EJ细胞表达高于膀胱移行上皮细胞,而p16INK4a和p14ARFmRNA及蛋白在EJ细胞表达水平稍低于膀胱移行上皮细胞。siRNA干扰BMI-1后可以上调EJ细胞中其下游p16和p14 mRNA及蛋白水平,使EJ细胞增殖能力下降,细胞凋亡增多。结论:siRNA干扰BMI-1基因表达对EJ细胞的体外生长具有明显的抑制作用,其作用机制与上调其下游p16INK4a、p14ARF基因的表达有关。

Bmi-1基因过表达对人正常胃黏膜上皮细胞株GES-1增殖的影响

目的:探讨原癌基因B淋巴瘤莫洛尼鼠白血病病毒插入区1(Bmi-1)过表达对人正常胃黏膜上皮细胞株GES-1增殖的影响。方法:采用逆转录病毒介导转染方法将携带原癌基因Bmi-1的质粒或空质粒稳定转染GES-1细胞,通过real-time PCR及Western blotting在mRNA及蛋白水平鉴定转染效果。流式细胞术检测过表达Bmi-1对GES-1细胞周期的影响。应用CCK-8(Cell Counting Kit-8)试剂盒检测稳定转染Bmi-1对GES-1细胞增殖的影响。结果:Real-time PCR及Western blotting结果均表明成功建立稳定转染Bmi-1基因的GES-1细胞株。流式细胞术结果表明,过表达Bmi-1基因使GES-1细胞G0/G1期减少,G2/M期和S期细胞增多。生长曲线显示,过表达Bmi-1基因使GES-1细胞增殖速度明显提高。结论:过表达Bmi-1基因能调控GES-1细胞的细胞周期,促进GES-1细胞的增殖。

Bmi-1基因的过表达对人结肠癌细胞株SW480/CD133^+细胞增殖的影响

目的探讨Bmi-1基因过表达对人结肠癌细胞株SW480/CD133^+细胞增殖的影响。方法用携带Bmi-1基因的质粒(pMSCV-Bmi-1)感染人结肠癌SW480/CD133^+细胞,作为观察组(pMSCV-Bmi-1/CD133^+组);以空质粒(pMSCV)感染SW480/CD133+细胞,作为空质粒对照组(pMSCV/CD133^+组);空白对照组不作任何处理,常规培养。用实时荧光PCR和免疫印迹法分别检测细胞中Bmi-1 mRNA水平和蛋白表达的水平;平板克隆实验检测细胞增殖能力的变化。结果观察组Bmi-1 mRNA和蛋白表达的水平均较空质粒对照组和空白对照组显著增高(均P<0.01)。观察组、空质粒对照组和空白对照组的细胞克隆形成率分别为(88.45±5.79)%,(52.33±3.62)%和(54.66±4.03)%,观察组分别高于空质粒对照组和空白对照组(均P<0.01)。结论成功地将Bmi-1基因导入SW480/CD133^+细胞,并能使其在mRNA水平和蛋白水平稳定、持续地表达。Bmi-1过表达可以显著增强人结直肠癌SW480/CD133^+细胞的克隆形成能力,促进SW480/CD133^+细胞增殖。

BMI-1基因和蛋白在子宫颈癌中的表达和临床意义

目的探讨B细胞特异的莫洛尼白血病毒插入位点1(BMI-1)基因在子宫颈癌组织中的表达及其与临床病理参数的关系,初步评价BMI-1基因在子宫颈癌发生、发展中的作用及其意义。方法收集30例子宫颈癌患者的癌组织及10例子宫肌瘤患者的子宫颈组织,采用实时定量PCR方法检测患者子宫颈组织的BMI-1 mRNA的表达情况;采用SP免疫组织化学法对以上40例手术标本石蜡切片进行染色,检测BMI-1蛋白的表达。结果子宫颈癌组织中BMI-1 mRNA及蛋白的表达高于正常子宫颈组织,差异具有统计学意义(P<0.05);中低分化子宫颈癌组织中BMI-1蛋白的表达高于高分化子宫颈癌组织中的表达,差异具有统计学意义(P<0.05);伴有淋巴结转移的子宫颈癌组织中BMI-1蛋白的表达高于无淋巴结转移的子宫颈癌组织,差异具有统计学意义(P<0.05);BMI-1蛋白在子宫颈鳞癌与腺癌的相对表达量差异无统计学意义(P>0.05)。结论 BMI-1基因的过表达在子宫颈癌的发生发展中有重要意义,与子宫颈癌组织的分化程度、淋巴结转移密切相关。

Bmi-1基因与大肠癌术后相关性研究进展

大肠癌是临床常见的恶性肿瘤，包括盲肠、结肠和直肠的癌症。近年来在世界范围内大肠癌的发病率呈上升趋势，其中在西欧、北美等经济发达国家和地区，其发病率处于全部恶性肿瘤第2位；大肠癌在我国发病率处于全部恶性肿瘤第3位，

过表达BMI-1对HeLa细胞中HOX基因表达和细胞周期的影响

目的:将构建成功的真核表达载体pEGFP-BMI-1转染宫颈癌细胞系HeLa,检测其对同源盒(HOX)基因表达和细胞周期的影响。方法:采用脂质体转染法,将质粒pEGFP-BMI-1DNA瞬时转染HeLa细胞,确定融合蛋白B细胞特异性莫洛尼氏白血病毒插入位点1-加强型绿色荧光蛋白(BMI-1-EGFP)表达后,实时荧光定量RT-PCR方法检测转染前后HeLa细胞中周期素依赖性激酶抑制剂P16INK4a、人类端粒酶逆转录酶(hTERT)、同源盒A9(HOXA9)、同源盒B4(HOXB4)和同源盒C13(HOXC13)mRNA的表达变化,PI染色流式细胞仪检测细胞周期。结果:(1)在HeLa细胞中过表达BMI-1显著下调P16INK4a、HOXA9和HOXC13 mRNA的表达,分别平均降低为对照组的9.2%、10.9%和69.7%(P<0.01),而hTERT和HOXB4 mRNA的表达变化无显著差异(P>0.05)。(2)pEGFP-BMI-1转染HeLa细胞后,G1期细胞由65.68%减少至50.53%,S期细胞则由27.17%增加至39.59%(P<0.01)。结论:真核表达载体pEGFP-BMI-1转染HeLa细胞过表达外源性BMI-1,显著下调P16INK4a、HOXA9和HOXC13的表达,同时G1期细胞减少、S期细胞增加,这可能是BMI-1参与肿瘤发生发展的机制之一。

敲减BMI-1表达诱导HeLa细胞G_1期阻滞

B细胞特异性莫洛尼氏白血病毒插入位点1(B-cell specific moloney leukemia virus insertionsite1,BMI-1)在多种恶性肿瘤中高表达.为探索BMI-1在宫颈癌发生发展过程中的生物学作用,将构建成功并已鉴定为有效序列的短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)真核表达载体BMI-1shRNA2和BMI-1shRNA4,转染人宫颈癌细胞系HeLa并筛选稳定转染细胞株,Western印迹检测BMI-1蛋白表达,实时荧光定量RT-PCR检测周期素依赖性激酶抑制剂p16INK4a(cyclin-dependentkinase inhibitor p16INK4a)、人类端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)、同源盒A9(homeoboxA9,HOXA9)、同源盒B4(homeoboxB4,HOXB4)和同源盒C13(homeoboxC13,HOXC13)基因mRNA的表达变化,PI染色流式细胞仪检测细胞周期变化.结果表明,在稳定转染BMI-1shRNA2、BMI-1shRNA4的HeLa细胞中,显著抑制BMI-1蛋白表达,上调p16INK4a、HOXA9和HOXC13三者mRNA表达,而hTERT和HOXB4两者mRNA的表达水平无明显改变,同时G1期细胞增加、S期细胞减少,提示敲减BMI-1表达诱导HeLa细胞G1期阻滞,BMI-1可能是宫颈癌基因治疗的靶分子.

siRNA沉默Bmi-1基因表达对宫颈癌细胞增殖的影响

目的探讨siRNA沉默B细胞特异的莫洛尼白血病病毒插入位点1基因(Bmi-1)表达对宫颈癌细胞增殖的影响研究。方法通过脂质体转染siRNA Bmi-1及阴性对照(control)到人宫颈癌Hela细胞,采用Realtime PCR及western blot法检测细胞中Bmi-1的表达。MTT法检测细胞活力,Annexin V-PI流式双染及Hoechst染色检测细胞凋亡情况,流式细胞术检测细胞周期,western blot法检测细胞中p16,p53,Cyclin D1及Rb的表达。结果与Control组比较,siRNA Bmi-1组细胞中Bmi-1蛋白及mRNA表达量皆显著降低(P<0.01),同时细胞活力下降,细胞凋亡率提高(P<0.01),细胞周期阻滞在G1期(P<0.01),细胞中p16表达量上调(P<0.01),p53及Cyclin D1表达量下调(P<0.01),Rb磷酸化水平降低(P<0.01)。结论 Bmi-1具有抑制宫颈癌Hela细胞增殖的作用,可能与调控细胞周期相关蛋白表达有关。

BMI-1、C-myc在宫颈癌组织中的表达及与患者预后的关系研究

目的通过检测B细胞特异的莫罗尼白血病毒插入点1(BMI-1)、原癌基因(C-myc)在宫颈癌组织中的表达,分析其与宫颈癌患者预后之间的关系。方法选取2012年1月至2015年1月在我院收治的63例宫颈癌患者(宫颈癌组),42例宫颈上皮内瘤变患者(CIN组)、20例宫颈肥大患者(宫颈肥大组)为研究对象。免疫组化法及RT-PCR法检测BMI-1及C-myc水平,分析宫颈癌组织中BMI-1及C-myc阳性表达率与临床病理关系;检测宫颈组织中BMI-1及C-mycmiRNA表达,利用受试者工作特征曲线(ROC)分析BMI-1及C-mycmiRNA诊断患者预后的效能,并分析与患者预后的关系。结果BMI-1及C-myc在宫颈癌组织中表达明显高于CIN患者及宫颈肥大患者。CINI级组织BMI-1阳性率低于CINII级、III级(均P<0.05)。CINI级组织C-myc阳性表达率低于CINIII级(P<0.05)。BMI-1及C-myc均与分化程度、病理分级、淋巴转移、FiGO分期有关。宫颈癌组织中BMI-1及C-mycmiRNA表达明显高于CIN组织,两项指标诊断宫颈癌患者生存预后的价值均较高;BMI-1miRNA≥0.36的3年生存率明显低于BMI-1miRNA<0.36的患者3年生存率;C-mycmiRNA≥2.11的患者3年生存率显著低于C-mycmiRNA<2.11的患者3年生存率。结论BMI-1及C-myc参与宫颈癌的发生及发展,并且与宫颈癌患者预后存在联系。

microRNA-218在肝细胞癌中的表达及功能研究

目的探讨microRNA-218在肝细胞癌(HCC)中的表达水平及功能。方法选取该院肝胆外科收治的46例HCC手术患者,并将其分为转染组和未转染组,比较两组HepG2细胞的microRNA-218表达、增殖、凋亡情况,以及B细胞特异性莫洛尼白血病病毒插入位点1(Bmi-1)和周期蛋白依赖性激酶6(CDK6)的表达水平。结果肝癌组织中microRNA-218表达水平明显低于癌旁组织(P<0.05);microRNA218的表达水平与HCC的肿瘤大小、肿瘤TNM分期等临床病理特征密切相关(P<0.05);转染组HepG2细胞增殖率在转染后24、48、72h均明显低于未转染组(P<0.05);转染组HepG2细胞凋亡率明显高于未转染组(P<0.05);HepG2细胞转染后的Bim-1、CDK6表达水平均明显低于未转染组(P<0.05)。结论 microRNA-218可通过下调潜在靶点的Bim-1、CDK6表达水平来抑制肝癌细胞增殖并促进其凋亡。

siRNA沉默Bmi-1表达对胰腺癌PANC-1细胞增殖的抑制作用

目的:探讨运用RNAi技术沉默Bmi-1基因对人胰腺癌细胞恶性行为的影响,为胰腺癌基因治疗提供新的靶点和思路.方法:构建反义Bmi-1真核表达载体转染人胰腺癌PANC-1细胞,运用荧光显微镜下观察、MTT、Western blot、流式细胞术检测转染效果及细胞周期、凋亡变化.结果:成功构建反义Bmi-1真核表达载体并且转染后细胞Bmi-1表达明显下降(175.39±1.76vs318.54±3.53,P<0.05),实验组细胞与对照组相比,增殖受到抑制,周期出现阻滞(G0/G1:60.480%±1.545%vs40.520%±2.865%;S:12.68%±2.654%vs35.740%±2.074%,均P<0.05),凋亡明显增加(21.670%±2.948%vs7.870%±0.900%,P<0.05).结论:Bmi-1的siRNA能明显抑制Bmi-1的表达,抑制细胞增殖,促进细胞凋亡.Bmi-1可作为胰腺癌基因治疗的靶点.