莫诺苯宗对肺腺癌细胞自噬和凋亡的分子机制研究

目的:探究莫诺苯宗和自然杀伤细胞激活受体基因(KLRC3)对肺腺癌(LUAD)细胞凋亡和自噬的影响,为LUAD的治疗提供理论基础。方法:分别使用不同浓度莫诺苯宗处理LUAD细胞,并采用CCK-8法检测莫诺苯宗对LUAD细胞活力的影响;随后,使用80μmol/L的莫诺苯宗、50 nmol/L的KLRC3干扰质粒(si-KLRC3)、和100 nmol/L自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)1.5μg/ml KLRC3过表达载体(pcDNA-KLRC3)处理细胞后采用流式细胞术和Western blotting检测细胞凋亡以及凋亡相关蛋白和自噬相关蛋白的表达量。结果:莫诺苯宗浓度大于20μmol/L时可有效减弱LUAD细胞活力,且以剂量依赖性地促进了LUAD细胞的凋亡和自噬(均P<0.05)。KLRC3在LUAD细胞中低表达,干扰KLRC3减弱了莫诺苯宗对LUAD细胞自噬和凋亡的促进作用,比较差异有统计学意义(均P<0.05)。此外,过表达KLRC3也促进了LUAD细胞的凋亡和自噬,而KLRC3和莫诺苯宗对LUAD细胞凋亡和自噬的促进作用均可被3-MA所抵消,比较差异有统计学意义(均P<0.05)。结论:莫诺苯宗可能通过促进KLRC3的表达诱导自噬进而促进LUAD细胞的凋亡。

RP-HPLC法测定莫诺苯宗的含量

目的:建立莫诺苯宗含量测定的HPLC方法。方法:选用Alltima C18(250mm×4.6mm,5μm)色谱柱,乙腈-水(60:40)为流动相,检测波长:292nm,流速为1.0mL/min,进样量20μL。结果:莫诺苯宗在浓度为0.05-0.5mg/mL范围内呈良好的线性关系。回归方程为Y=7 965 580.74X+20 316.39,r=0.999 96,回收率为100.33％,RSD=0.66％,n=9。结论:本法简便、灵敏、准确、重现性好。

莫诺苯宗乳膏的制备与质量控制

目的：研究莫诺苯宗乳膏的制备及质量控制。方法：采用乳化法制备莫诺苯宗乳膏，采用RP-HPLC法测定乳膏中莫诺苯宗的含量，并进行样品稳定性实验。结果：该制剂制备工艺简单易操作，质量控制标准与方法可行，莫诺苯宗质量浓度在（0．05～0．5）mg／ml浓度范围内呈良好的线性关系（r=0．9990）。平均回收率为99．90％，RSD为0．65％。结论：莫诺苯宗乳膏处方合理，配制工艺可行，质量稳定。

微波辐射合成莫诺苯宗的研究

在微波辐射下,以对苯二酚、氢氧化钠和氯化苄为原料,N,N-二甲基甲酰胺(DMF)为溶剂合成了莫诺苯宗。采用单因素实验法,考察了反应物的摩尔比、微波辐射功率和辐射时间等对莫诺苯宗收率的影响。实验结果表明:当n(氯化苄):n(对苯二酚):n(氢氧化钠)=1:1.4:1.4、DMF15mL、微波辐射功率为320W、辐射时间为60s时,莫诺苯宗的收率为63.79%。

莫诺苯宗联合咪喹莫特对C57BL6小鼠白癜风造模的作用研究

目的:探讨莫诺苯宗联合咪喹莫特对C57BL6小鼠白癜风造模的作用,以构建稳定、效果佳的白癜风模型,为治疗白癜风的药理、药效及机制研究奠定基础。方法:将30只4周龄的C57BL6小鼠分为A、B、C共3组,分别予A组40%莫诺苯宗联合5%咪喹莫特、B组40%莫诺苯宗、C组5%咪喹莫特涂搽小鼠下背部,每组每日涂药1次,连续涂搽60天。另取5只C57BL6小鼠为阴性对照组,不予任何处理。结果:A组与B组涂药2周后涂药部位均出现色素脱失,两组开始脱色的时间比较,差异无统计学意义(t=1. 23,P> 0. 05),但2个月后两组涂药部位脱色积分比较,差异有统计学意义(t=2. 43,P <0. 05); A组非涂药部位色素脱失情况较B组相比,差异有统计学意义(t=2. 45,P <0. 05); C组仅可见1只小鼠涂药部位出现少量脱色。阴性对照组见未脱色及脱毛。结论:莫诺苯宗联合咪喹莫特对C57BL6小鼠白癜风造模的效果优于莫诺苯宗或咪喹莫特单独使用组。

强效祛斑剂——莫诺苯宗

莫诺苯宗是一种局部使用的脱色剂，用于治疗色素沉着过度，如各种色斑、老年斑、黑色素瘤等，效果很明显。它能分解皮肤中的黑色素，阻止皮肤中黑色素的生成，使皮肤恢复健康的色泽，而并不破坏黑色素细胞，毒性很轻，通常制成软膏或搽剂，

莫诺苯宗联合维甲酸对C57BL/6小鼠及SCF转基因小鼠模拟白癜风的作用

目的 探讨比较莫诺苯宗联合维甲酸局部应用诱导C57BL/6及SCF转基因小鼠产生白癜风样表型的作用,构建组织病理学相似度高、脱色效果持久稳定的白癜风样小鼠模型,为白癜风基础研究选择动物模型提供依据。方法 分别将C57B L/6小鼠和SCF转基因鼠各15只随机分为三组:对照组(Control)、莫诺苯宗组(MBEH)、莫诺苯宗+维甲酸联合组(MBEH+RA),使用40%莫诺苯宗单独或40%莫诺苯宗联合0.1%维甲酸涂搽30 d,3 d 1次,对照组除备皮外不进行任何处理。应用免疫荧光、免疫组化等方法观察黑素细胞、CD8^(+)T细胞、NK细胞、黑色素颗粒和氧化应激水平等指标的变化。结果 与莫诺苯宗组相比,联合组可快速诱发两种小鼠皮肤脱色。与正常对照组相比,联合组小鼠皮肤脱色部位黑素细胞及黑色素含量均显著减少,可见较多CD8^(+)T细胞及NK细胞浸润,局部氧化应激水平升高。结论 莫诺苯宗联合维甲酸可在两种不同类型的小鼠中快速诱导白癜风样表型,应用表皮含有黑素细胞的SCF转基因小鼠造模更适用于白癜风的相关研究。

局部针刺对莫诺苯宗诱导C57BL／6小鼠白癜风样模型的影响

目的探讨外伤对莫诺苯宗诱导白癜风小鼠脱色的影响。方法将40只C57BI）6小鼠随机分为对照组、模型组、针刺组和针刺配合莫诺苯宗组4个组，每组10只。模型组应用40％莫诺苯宗乳膏诱导C57BL／6小鼠脱色，建立白癜风动物模型；针刺配合莫诺苯宗组通过针刺配合40％莫诺苯宗乳膏的方法，研究针刺对小鼠脱色的影响。实验过程中肉眼观察毛发颜色以及共聚焦激光扫描显微镜（RCM）观察皮肤脱色。实验结束后麻醉小鼠，取非用药部位脱色皮肤行组织学检查，HE染色检测淋巴细胞浸润情况，免疫荧光染色检测CD8＋T细胞表达。结果模型组小鼠在用药部位及非用药部位均有不同程度脱色。针刺配合莫诺苯宗组小鼠同样具有以上特点，且其脱色出现时间早，面积大并稳定。实验第65天，模型组和针刺配合莫诺苯宗组用药部位的脱色面积指数分别为3．45±0．17和3．90±0．25，两组比较差异有统计学意义，t=7．433，19〈0．05；非用药部位分别为1．90±0．12和2．85±0．27，两组比较差异有统计学意义，t=7．529，19〈0．05。免疫荧光显示非用药部位脱色区CD8＋T细胞荧光强度模型组为175．528±10．711，针刺配合莫诺苯宗组为645．928±12．652，两者比较差异有统计学意义，t=8．105，P〈0．05。针刺配合莫诺苯宗组在非用药部位脱色斑局部淋巴细胞和CD8’T细胞浸润更明显。结论局部皮肤屏障破坏可以促进莫诺苯宗诱导的白癜风小鼠脱色。

茶多酚、吡美莫司、他克莫司外用对莫诺苯宗诱导白癜风样模型小鼠的疗效比较

目的 探讨茶多酚、吡美莫司、他克莫司对莫诺苯宗诱导的白癜风样模型小鼠的疗效差异.方法 45％莫诺苯宗诱导C57BL/6三周龄雌小鼠脱色,建立白癜风样动物模型.并研究他克莫司、吡美莫司、茶多酚对白癜风样模型小鼠脱色的治疗效果.通过肉眼观察毛发脱色及脱色面积,实验结束后取非用药部位脱色皮肤行组织学检查,HE染色检测淋巴细胞浸润情况,共聚焦激光扫描显微镜（RCM）观察小鼠皮肤的黑素和黑素细胞,免疫荧光检测CD8＋T细胞.结果 模型组小鼠在用药部位及非用药部位均有脱色现象.他克莫司组、吡美莫司组、茶多酚组小鼠脱色减少,出现时间晚和面积指数均较模型组低;且用药部位脱色斑局部淋巴细胞和CD8＋T细胞浸润减少.其中他克莫司组疗效优于其他组.结论 他克莫司、吡美莫司、茶多酚对白癜风样模型小鼠均有疗效.

氮酮用量对莫诺苯宗乳膏离体透皮吸收的影响

目的研究渗透吸收促进剂氮酮用量对莫诺苯宗乳膏体在外经皮渗透的影响,并拟定氮酮的最佳浓度。方法以30%乙醇-水溶液为接收液,小鼠离体皮肤为屏障,采用改良的Franz扩散池进行体外渗透实验,HPLC法测定接收液中莫诺苯宗的含量。结果24h内,不同浓度的氮酮对莫诺苯宗乳膏透皮吸收均有一定的促进作用,其促渗作用为2%氮酮>5%氮酮>1%氮酮>0氮酮。结论氮酮能促进莫诺苯宗乳膏中莫诺苯宗的透皮吸收,以2%的氮酮促透效果最佳。

小鼠白癜风疾病模型的构建及初步研究

目的比较氢醌乳膏和莫诺苯宗乳膏诱导野生型C57BL/6J小鼠产生白癜风样表型的作用,构建组织病理学相似度高、脱色效果持久稳定且成本低、易操作的白癜风样小鼠模型,为选择白癜风疾病动物模型以研究人类白癜风疾病的发病机制以及药物治疗效果、药物作用机制提供依据。方法将30只C57BL/6J小鼠随机分为3组,每组10只。3组小鼠于背部相同部位去毛后,对照组涂抹乳膏基质,莫诺苯宗组涂抹40%莫诺苯宗乳膏,氢醌组涂抹2.5%氢醌乳膏,均1次/d,建模周期为50 d。肉眼观察造模部位皮肤变化;建模结束后处死各组小鼠,取病变部位皮肤组织,进行酪氨酸酶(TYR)免疫荧光染色观察;摘眼球取血,ELISA法检测血清中TYR、干扰素-γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)水平。结果莫诺苯宗组和氢醌组小鼠均出现明显皮肤脱色,TYR表达平均光密度值明显降低。莫诺苯宗组和氢醌组小鼠血清TYR水平均明显低于对照组(P均<0.05),莫诺苯宗组和氢醌组比较差异无统计学意义(P>0.05);氢醌组小鼠血清IFN-γ、MMP-9水平均明显高于对照组和莫诺苯宗组(P均<0.05),血清TNF-α水平与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);莫诺苯宗组小鼠血清TNF-α水平明显高于对照组(P均<0.05),血清IFN-γ、MMP-9水平与对照组比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论2.5%氢醌乳膏和40%莫诺苯宗乳膏涂抹法均可成功建立野生型C57BL/6J小鼠白癜风模型,其中2.5%氢醌乳膏更易诱导建立白癜风表观模型。

丹参对体内外CD8^+ T细胞抑制作用及白癜风小鼠的治疗作用

目的:探讨丹参的体内外抑制CD8+T细胞增殖及其对脱色小鼠的治疗作用。方法:通过MTS法检测丹参对体外培养的CD8+T细胞增殖的抑制,体内通过丹参对莫诺苯宗诱导的C57BL/6小鼠脱色影响的研究,应用40%莫诺苯宗乳膏诱导C57BL/6小鼠脱色,建立白癜风动物模型;并通过丹参对白癜风小鼠的治疗,研究丹参对小鼠脱色的影响;用肉眼观察毛发脱色,通过共聚焦激光扫描显微镜(RCM)观察皮肤脱色,并予以免疫荧光检测CD8+T细胞浸润。结果体外研究300μg/m L和500μg/m L丹参对CD8+T细胞增殖的抑制情况,随着浓度增加其抑制更为明显,高浓度组抑制率可达82.05%。体内研究高浓度组丹参对模型小鼠治疗效果显著,脱色斑面积指数较模型组低(P<0.05),复色部位皮肤CLSM表现可见树突状,折光明亮的黑素细胞,且在非用药部位脱色斑皮肤CD8+T细胞浸润显著减少。低浓度组无效果,中浓度组效果不明显。结论丹参对莫诺苯宗诱导的白癜风小鼠具有治疗作用,为临床应用提供实验依据,并说明该动物模型可以用于中药筛选研究。

黄芩苷对白癜风小鼠模型的作用机制研究

目的:探讨黄芩苷对莫诺苯宗诱导的白癜风小鼠模型发生发展的影响及其机制。方法:C57BL/6小鼠共40只分为4组,即阴性对照组、模型组、卤米松组及5%黄芩苷组,每组10只。应用40%莫诺苯宗乳膏诱导C57BL/6小鼠脱色,建立白癜风小鼠模型;进行5%黄芩苷对白癜风小鼠的疗效观察及其机制研究等;连续给药50 d,通过肉眼观察小鼠的毛发脱色,反射共聚焦显微镜(RCM)观察皮肤的黑色素和黑素细胞,免疫荧光检测CD_8^+T细胞。选取与白癜风相关的5个基因(CXCL9,CXCL10,CXCR3,RAB27A,PI3K)进行荧光实时定量PCR检测。结果:模型组小鼠在用药部位及非用药部位有毛发脱色现象。卤米松组和5%黄芩苷组小鼠脱色减少,较模型组发生率明显降低、脱色出现时间明显延迟,脱色面积减小,且局部淋巴细胞和CD_8^+T细胞浸润较模型组明显减少。荧光实时定量PCR检测提示卤米松组和5%黄芩苷组CXCL9、CXCL10、CXCR3和RAB27A表达较模型组明显降低,而PI3K则升高明显。卤米松组和5%黄芩苷组之间无明显差异,但卤米松组用药30 d后,用药部位出现皮肤萎缩等不良反应。结论:卤米松组和5%黄芩苷组均具有治疗效果,黄芩苷组更安全有效,可为临床白癜风的治疗提供参考。

氢醌双苄醚的选择性还原反应

莫诺苯宗为一局部使用的脱色剂，临床用于治疗色素沉着过度。但合成莫诺苯宗的同时，往往生成大量的副产物氢醌双苄醚。将氢醌双苄醚用几种方法选择性氢化，还原成氢醌单苄醚，结果以５％Ｐｄ－Ｃ、环己烯法的选择性较好，收率和质量均感满意。