高效液相色谱-蒸发光散射测定甜菊糖中甜菊糖苷和莱鲍迪苷A的含量

建立了高效液相色谱-蒸发光散射分离与检测甜菊糖中甜菊糖苷和莱鲍迪苷A的实验方法。色谱分离使用Kromasil NH2 柱(250mm×4.6mm,i.d.,5μm),流动相为85%乙腈水溶液,柱流出物采用蒸发光散射检测器检测,漂移管温度为85℃,空气做载气,流速为2.4L/min。甜菊糖苷和莱鲍迪苷A的线性范围分别为0.05～3.0、0.05～3.7mg/mL,平均加标回收率分别为97.63%、99.25%,相对标准偏差分别为1.04%、1.27%。该方法简单、快速、准确、重现性好,适用于甜菊糖中甜菊糖苷和莱鲍迪苷A的定量分析。

反相高效液相法测定甜叶菊中莱鲍迪苷A和甜菊糖苷的含量

目的建立反相高效液相色谱法（RP．HPLC）测定甜叶菊中莱鲍迪苷A（RA）和甜菊糖苷（ST）的含量。方法采用welchMaterials XB—C18柱（250mm×4．6mm，5μm），以乙腈．10mmol·L^-1磷酸酸钠缓冲液（pH=2．67，35：65，v～）为流动相，流速0．7mL·min^-1，检测波长210nm，柱温30℃，进样量5此。结果以外标法定量，RA和sT均在O．25～2．50mg·mL^-1与峰面积线性关系良好，r〉0．9995。RA回收率为100．3％，RSD为2．3％（n=6），ST回收率为101．0％，RSD为2．5％（n=6）。结论本方法快捷、准确、可靠，易操作，可用于甜叶菊及相关产品中RA和ST含量测定。

新型天然高倍甜味剂—莱鲍迪苷A

综述了莱鲍迪苷A的物化性质、制备、检测方法和应用等方面的研究进展,并对莱鲍迪苷A在食品工业中的应用和前景进行了分析及阐述。

莱鲍迪苷A的甜味特性和改良及其在食品中应用进展

莱鲍迪A苷是甜菊糖苷混合物中的一种糖苷成分,与甜叶菊中其他糖苷相比,莱鲍迪A苷的甜度最高,也较稳定,并且口感也是最接近蔗糖的天然甜味剂,而且保持了原有甜菊糖的其他优点,可作为一种理想的天然甜味剂产品。莱鲍迪苷A具有甜度高,口感好,安全稳定的优点,符合当前食品添加剂和甜味剂安全、健康、高效的发展趋势,将在食品工业中得到广泛的应用。本文综述了莱鲍迪苷A的甜味特性及及其在食品中应用进展,对其甜味特性及其特性的几种改良方法进行了分别阐述。

重组酿酒酵母全细胞催化合成莱鲍迪苷A

用经密码子优化后合成的甜叶菊UDP糖基转移酶UGT76G1编码基因构建了表达该酶的重组酿酒酵母YPH499(pYES2-UGT)。建立了通过柠檬酸钠调节酿酒酵母细胞内由葡萄糖到尿苷二磷酸葡萄糖(UDPG)的代谢通量,用于催化甜菊苷合成莱鲍迪苷A的全细胞催化方法。优化后的催化体系为:甜菊苷1 g/L,葡萄糖20g/L,普郎尼克F68 10 g/L,MgCl2 6 g/L,柠檬酸钠15 g/L,pH 7.2,细胞密度200 g湿细胞/L反应液,在37℃下经72 h后转化生成莱鲍迪苷A 267.89 mg/L。

莱鲍迪苷A复配甜味剂在蛋糕中的应用

通过感官评定的方法研究莱鲍迪苷A在蛋糕中替代蔗糖的应用效果。在此基础上研究莱鲍迪苷A复配甜味剂对蛋糕感官品质和质构的影响,确定复配甜味剂的最优配方。结果表明,莱鲍迪苷A在蛋糕中替代蔗糖的最大替代量为30%。莱鲍迪苷A复配甜味剂的加入对蛋糕的内聚性、粘度影响不大,对蛋糕硬度、弹性、胶着性、咀嚼性的影响显著。添加适当比例的复配甜味剂可以使蛋糕的弹性、胶着性有所增加,同时改善了蛋糕的咀嚼性,使蛋糕的口感更加绵软,甜味更加柔和,保湿性也得到明显改善。蛋糕的最优配方为:面粉100g,鸡蛋150g,色拉油20g,泡打粉2g,蔗糖10g,莱鲍迪苷A 0.1g,木糖醇45g,聚葡萄糖30g。

莱鲍迪苷A甜味剂在功能性酸奶中的应用研究

用莱鲍迪苷A替代蔗糖后,酸奶的色泽较对照组更白,凝乳状态基本没有发生变化,酸奶凝乳好,表面光滑。但酸奶的持水性能明显下降,在酸奶的表面均出现乳清析出。随着莱鲍迪苷A替代量的增加,酸奶的酸味评分先增加后下降,但普遍低于对照组。同时,酸奶的甜味、苦味和柔和感评分与对照组相比都有所下降。相反地,酸奶的乳香味评分有所上升。当莱鲍迪苷A替代蔗糖后酸奶的各项感官品质普遍下降,综合分析可知莱鲍迪苷A的最优替代量为50%。但是,当替代量为50%时,酸奶的乳清析出比较明显,而且酸甜不和谐,口感不够柔和,如果要用莱鲍迪苷A制作无糖酸奶还需要对其进行复配。在单因素试验的基础上以莱鲍迪苷A、赤藓糖醇、低聚异麦芽糖用量为自变量,酸奶感官、pH、硬度、稠度、黏附性、持水力为响应值,对酸奶复合甜味剂配方进行响应面优化。优化后无糖酸奶的最优配方为:复原乳100mL,莱鲍迪苷A 0.02 g,赤藓糖醇1.809 g,低聚异麦芽糖2.908 g,稳定剂0.1 g,CaCl20.02 g,接种量4 mL。用该配方制作的无糖酸奶色泽洁白,结构均匀细腻,酸甜适宜,口感柔和。

莱鲍迪苷A的制备色谱法分离纯化研究

本文从制备色谱填料入手,探讨采用中压制备色谱法一次分离得到高纯度莱鲍迪苷A(RA)的可行性。以羧酸改性15μm单分散PS-DVB基球填料为分离介质,装填入规格为12.6×2.66cm的flash色谱柱中,以RA单体的纯度、产率、回收率为考察指标,研究了不同的流动相比例、上样浓度、上样体积以及流动相流速对分离纯化过程的影响。建立了合适的操作条件:流动相为乙腈/水=80/20(v/v),上样浓度为280mg/mL,上样体积为0.4mL,流速为4mL/min。在最佳的操作条件下,分离得到的RA单体纯度为90.22%,回收率79%。该方法具有分离效率高,产品质量好,生产周期短,操作方便等特点,为从低含量甜菊糖结晶母液中纯化RA单体的工业化生产提供了一种有效的途径。

高效液相色谱法测定新疆地区甜叶菊中甜菊苷和莱鲍迪苷A的含量

目的建立测定新疆地区甜叶菊中甜菊苷和莱鲍迪苷A含量的方法。方法采用高效液相色谱法,色谱柱为Agilent·Zorbax·SB-C_（18）（4.6 mm×250 mm,5μm）,流动相为乙腈-磷酸钠缓冲液（32∶68 v/v.p H=2.60）,流速为1.0 m L/min;检测波长为210 nm。结果甜菊苷和莱鲍迪苷A进样量分别在0.426～2.130μg、1.816～5.448μg范围内与峰面积积分分值呈良好线性关系（r=0.999 9）,二者精密度、稳定性、重复性试验的RSD≤1.50%,平均加样回收率分别为99.98%、100.06%,RSD分别为0.86%、1.16%,测得甜叶菊中甜菊苷的含量为5.74 mg/g,莱鲍迪苷A的含量为10.80 mg/g。结论高效液相色谱法简便、准确、重复性好,可用于新疆地区甜叶菊中甜菊苷和莱鲍迪苷A的含量测定。

莱鲍迪苷A在甲醇-水体系中溶解度与超溶解度的测定

测定了莱鲍迪苷A在甲醇溶液中的溶解度和超溶解度曲线,并用数学模型进行了拟合,同时还测定了温度、降温速率、搅拌速率对甲醇溶液中莱鲍迪苷A介稳区宽度的影响。结果表明,莱鲍迪苷A在甲醇溶液中的溶解度随着温度的升高而增加,而介稳区宽度随着温度的升高而减小,随着降温速率的增加而增大,随着搅拌速率的增加先减小后增大。

莱鲍迪苷A溶解度的测定与关联

采用激光动态监测法测定了273.15～318.15 K莱鲍迪苷A在丙酮、无水乙醇、95%乙醇和90%乙醇4种溶剂中的溶解度,并用Apelblat方程、理想溶液方程和多项式经验方程对实验数据进行了关联。结果表明,莱鲍迪苷A在4种溶剂中的溶解度均随温度的升高而增大,且在不同溶剂中莱鲍迪苷A的溶解度有较大差异,大小顺序为:90%乙醇>95%乙醇>无水乙醇>丙酮;莱鲍迪苷A的溶解度实验数据用Apelblat方程、理想溶液方程和多项式经验方程关联的最大平均相对误差分别为1.75%,3.85%,0.96%。上述结果可以为莱鲍迪苷A的结晶分离过程提供基础热力学数据。

莱鲍迪苷A溶解度与介稳区宽度的测定及其结晶过程研究

莱鲍迪苷A是极为重要的新型甜味剂,由于缺乏合理的溶解度数据且其成核机理不明确,导致现存的结晶工艺得到的结晶产品存在细晶多、粒度分布不均等问题。为此,首先利用激光动态法测定了莱鲍迪苷A在甲醇-水、乙醇-水、正丙醇-水、丙酮-水中的溶解度及在甲醇-水中的介稳区宽度,并利用Wilson方程对溶解度进行模型验证;研究了溶剂组成、饱和温度、搅拌速率与冷却速率对介稳区宽度的影响,研究表明,莱鲍迪苷A的介稳区宽度随溶剂中甲醇含量与冷却速率的增加而变宽,随饱和温度与搅拌速率的增加而变窄;基于经典成核理论与相关模型,计算了莱鲍迪苷A的固液界面能γ与临界Gibbs自由能ΔGcrit等成核参数;根据表观成核级数m分析可知,初始温度高于318.15 K时,连续成核是莱鲍迪苷A主导的成核方式;基于上述研究优化了莱鲍迪苷A冷却结晶过程,得到了粒度分布均一的结晶产品。

毕赤酵母全细胞催化合成新型高倍甜味剂莱鲍迪苷A

本研究构建经密码子优化后的UDP-糖基转移酶UGT76G1和蔗糖合成酶AtSUS基因的重组毕赤酵母菌株GS115/p PIC9KUGT/p PICZA-At SUS,实现双酶在毕赤酵母中的胞内共表达。利用共表达菌株作为全细胞催化剂在体外进行催化反应,可成功将ST转化为RA,并在此基础上对其最适反应温度、反应p H、底物UDP浓度与底物蔗糖浓度条件进行优化。重组菌株经甲醇诱导,对不同发酵时间菌体的催化能力进行探究,确定发酵120 h菌体催化能力最佳,RA产量为0.58 mg/mL。对共表达菌株催化体系中全细胞催化条件进行优化,优化后的催化体系为:反应pH 7.0,UDP浓度1 mM,蔗糖浓度70 mM,MgCl2浓度3 mM,ST浓度10 mg/mL,将OD600为30的细胞与上述体系混合后在最适温度45℃下,200 r/min反应15 h,重组菌可将10 mg/mL ST转化为7.46 mg/mL RA,为RA酶法生物合成及其产业化应用提供技术支持。

体外偶联UDP-糖基转移酶与蔗糖合成酶高效催化合成莱鲍迪苷A

本研究构建了UDP-糖基转移酶UGT76G1基因的重组毕赤酵母菌株GS115/pPIC9K-UGT76G1和绿豆来源的蔗糖合成酶(mbSUS)基因的重组毕赤酵母菌株GS115/pPIC9K/pPICZA-mbSUS。通过甲醇诱导产酶,制备UDP-糖基转移酶UGT76G1和蔗糖合成酶,并构建生物催化级联反应体系,生物催化甜菊糖苷(Stevioside,ST)合成莱鲍迪苷A(rebaudioside A,RA),有效实现了级联反应体系中尿苷二磷酸葡萄糖(UDPG)的循环利用。本研究通过反应条件优化,发现级联反应中的限速酶是糖基转移酶UGT76G1,添加酶活比例为U_((UGT76G1)):U_((mbSUS))=6:1为合成莱鲍迪苷A的最佳酶活比例,在pH7.0,UDP浓度1mM,蔗糖浓度50mM,MgCl_2浓度3 mM的反应条件下,10 mM ST转化合成8.20±0.11 mM RA,RA的产率达到82.91%,与在大肠杆菌表达系统中相比,极大缩短了催化反应时间。利用体外偶联UDP-糖基转移酶与蔗糖合成酶催化合成RA为酶法高效生物合成RA及其产业化应用提供技术支持。

高效液相色谱法测定甜叶菊糖中的甜菊苷和莱鲍迪苷A

建立甜叶菊糖中甜菊苷（简称为XT）和莱鲍迪苷A（简称为RA）的HPLC定量分析方法。色谱分离采用Kromasil NH2柱（250mm×4．6mm i．d．，5μm），以V（乙腈）：V（水）=75：25为流动相，采用质谱检测器鉴定甜叶菊糖中主要的成分。sT和RA质量浓度分别为9．0～287．6mg／L和3．9—126．1mg／L时线性关系良好，两者平均回收率分别为98．61％和97．40％，RSD分别为2．3％和1．3％（n=5）。本实验还利用经典的Eschweiler-clark甲基化反应将氨基柱的伯胺转变为叔胺，发现上述溶质保留减小，同时分离选择性减小，说明氨基与糖苷类化合物的氢键作用和偶极-偶极作用对分离有重要贡献。

基于HPLC法的不同产地甜叶菊叶中莱鲍迪苷A含量测定

采用HPLC法测定15个不同产地甜叶菊叶中莱鲍迪苷A的含量,筛选适合甜叶菊叶水提物中富集总糖的吸附树脂,建立洗脱条件。HPLC条件为：Agilent-C18（4.6x250 mm,5μm）色谱柱;流动相为75%甲醇-水（V/V）等度洗脱,流速1 m L/min;柱温30℃;测定波长210 nm;进样量20μL。结果表明,各地区甜叶菊叶中莱鲍迪苷A的含量范围在0.25%~17.50%之间,差异较大;浙江绍兴、浙江衢州和新疆阿拉尔产甜叶菊叶中莱苞迪苷A含量较高,超过13.0%。不同型号树脂对莱鲍迪苷A的吸附量存在差异,LSA-10,D101,S-8,AB-8,ADS-21和HPD450较适合从水提液中富集总糖,且莱鲍迪苷A的相对含量较高。采用D101树脂吸附总糖的较优洗脱条件为：首先用3%Na OH水溶液洗脱除杂,接着水洗至中性,最后用90%乙醇-水洗脱收集总糖。

α-1,6-单葡糖基莱鲍迪苷A的合成

莱鲍迪苷D(RD)是甜味特性最好的甜菊糖苷,也是单葡萄糖基取代的莱鲍迪苷A(RA);但RD在甜叶菊提取物中含量很低且溶解度只有莱鲍迪苷A的十分之一。本实验使用来自L.citreum CICC23234.的交替糖蔗糖酶定向催化莱鲍迪苷A C19位上的α-1,6的葡萄糖基化,得到了一种莱鲍迪苷D的同分异构体,即单葡萄糖基莱鲍迪苷A(RAG1)。25℃下,RAG1在水中的溶解度分别是RA的13倍,是RD的148倍。感官分析实验表明,0.01%(w/v)的RAG1溶液的甜度是蔗糖的190~210倍,且甜味纯正,无后苦味。

甜菊糖苷与莱鲍迪苷A的药理特性与毒副作用分析

综述了甜菊糖苷与莱鲍迪苷A对动物或人体调节血糖、心血管和肾功能的药理特性与毒副作用(遗传毒性、致癌性和生殖致畸性)研究进展。全面掌握甜菊糖苷与莱鲍迪苷A的药理机理与毒副作用,对于拓宽甜菊糖的临床开发应用渠道、提升产业附加值具有重要的实践指导意义。

甜味剂莱鲍迪苷A的致突变作用试验

为了评价甜菊糖苷中的主要成分之一莱鲍迪苷A的致突变作用,在2 500-4μg/皿范围内,对莱鲍迪苷A（含量≥97%）进行了Ames试验,灭菌水作为阴性对照;以5.0 g/kg体重、2.5 g/kg体重和1.25 g/kg体重剂量进行了小鼠骨髓细胞微核试验和小鼠精子畸形试验,以40 mg/kg环磷酰胺为阳性对照,生理盐水为阴性对照。结果 Ames试验中,莱鲍迪苷A对TA97、TA98、TA100和TA102菌株的回变菌落数均小于阴性对照组的两倍,且未见剂量-反应关系,Ames试验阴性;小鼠骨髓细胞微核试验和小鼠精子畸形试验均为阴性。表明莱鲍迪苷A在试验剂量下无致突变作用。

高效液相色谱法测定蜜饯中的莱鲍迪苷A的含量

甜菊糖苷是一种混合天然甜味剂,其中以莱鲍迪苷A甜度最高,在食品中应用最广。本试验建立了蜜饯中莱鲍迪苷A(RA)含量测定的高效液相色谱(HPLC)方法,分析采用Kromasil NH2色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),以75%的乙腈水为流动相,通过二极管阵列紫外检测器进行检测。该方法在0.025 0.50mg/mL范围内线性关系良好,相关系数r=0.99991,最低检出限为0.011g/kg,相对标准偏差RSD为0.41%(n=8),加标回收率在92.7%110%之间。本方法回收率高、灵敏度高,且更高效快捷,适用于蜜饯中甜菊糖苷类添加剂的检测,可以为食品安全国家标准的有效实施提供技术保障。