莲子心总生物碱及总生物碱高氯酸盐对MG63细胞迁移和迁移体生成的影响

目的 研究莲子心总生物碱(TAL)和总生物碱高氯酸盐(TALP)对MG63细胞迁移及迁移体生成的影响,探讨其治疗骨肉瘤的作用机制。方法 将对数生长期的MG63细胞,分为空白组、TAL组和TALP组,空白组不加药物,TAL组和TALP组以10、20、40、60、80、100μg/mL TAL和TALP培养液分别干预24、48 h后采用CCK8法检测各组细胞增殖率;根据CCK8实验结果,取24 h IC_(50)的一半剂量约为50.0μg/mL稀释成不同浓度的含药培养基来干预细胞,即2组实验组分别加入50.0、25.0、12.5、6.25μg/mL TAL和TALP干预24 h后采用划痕实验检测各组细胞迁移率,并计算迁移抑制率为50%的药物浓度;MG63细胞传代培养15~20 h后采用激光共聚焦显微镜、透射电镜观察细胞迁移体的生成和形态结构;将细胞分成空白组、TAL组和TALP组,后2组根据划痕实验结果,取细胞迁移抑制率约为50%时的药物浓度进行干预15~20 h,计算并比较各组迁移体生成的数量变化。结果 与空白组比较,20、40、60、80、100μg/mL TAL和40、60、80、100μg/mL TALP干预后细胞增殖率均显著下降(P<0.05);TAL和TALP的12.5、25.0、50.0μg/mL组细胞迁移率显著下降(P<0.05),迁移抑制率为50%的药物浓度分别为TAL 15.05μg/mL,TALP 20.16μg/mL;激光共聚焦显微镜观察显示MG63细胞迁移过程中尾部可见膨大的囊泡,透射电镜下观察到囊泡为迁移体石榴样结构;与空白组比较,TAL 15μg/mL组和TALP20μg/mL组迁移体生成的数量显著减少(P<0.05)。结论 TAL和TALP对骨肉瘤细胞迁移有抑制作用,其机制可能与影响细胞迁移体的生成有关。

莲子心总碱缓释片的制备及质量控制

目的制备莲子心总碱缓释片,并对其进行质量控制。方法采用直接压片法制备缓释片,用紫外分光光度法测定莲子心总碱的含量。结果莲子心总碱在9.31～65.17μg/mL范围内呈良好的线性关系,平均回收率为101.502%,RSD=0.266%。结论采用直接压片法制备莲子心总碱缓释片工艺简便,质量控制方法可行。

莲子心总碱缓释片体外释放度试验

目的 考察莲子心总碱缓释片体外释放度。方法 模拟人体体内环境,用紫外分光光度法测定莲子心总碱的体外释放度。结果 莲子心总碱释药方程:log(1 0 0 -Rn) =2 . 1 1 2 - 0 . 1 2 8t(F =2 1 9 . 31 0 ,P <0 0 0 1 ) ,r =- 0 . 982 (P <0 . 0 0 1 ) ,T50 =3 . 2 33h ,Td=4 . 2 74h ,Kr=0 . 1 2 8h-1 。结论 莲子心总碱缓释片体外释药符合一级释药模式,具有缓释特点。

莲子心新碱对肠系膜血管平滑肌收缩的抑制作用及分子机制

目的 研究莲子心新碱(Neo)对小鼠肠系膜血管及血管平滑肌细胞(VSMCs)收缩的抑制作用;并通过观察其对肌球蛋白轻链(MLC20)磷酸化和RhoA相关蛋白激酶(ROCK1)表达的影响,初步探讨引起该抑制的作用机制。方法 采用离体微血管张力测定仪观察高钾溶液(KCl)对经Neo预处理后肠系膜血管收缩的影响,并通过Urea/glycerolPAGE法检测其MLC20磷酸化水平的变化。同时,利用成像分析技术考察高钾溶液对经Neo预处理后VSMCs收缩的影响,并通过细胞免疫荧光法测定VSMCs中ROCK1蛋白的表达水平。结果 经Neo预处理后的肠系膜血管能明显抑制高钾溶液引起的收缩,其IC50值为6.019μmol/L;且可阻断高钾溶液产生MLC20磷酸化。另外,与模型组(KCl)VSMCs的长度(40.94±1.94)μm相比,药物组(Neo+KCl)VSMCs的长度(44.95±5.15)μm显著延长(P<0.01),其ROCK1蛋白的表达也明显下降。结论 Neo对肠系膜血管平滑肌收缩具有明显的抑制作用,其作用机制可能与阻断平滑肌MLC20磷酸化和下调其ROCK1蛋白表达有关。

莲子心新碱对转化生长因子β1诱导的H1299细胞侵袭和迁移的抑制作用及其机制

目的构建转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的人非小细胞肺癌(Non-small cell lung cancer,NSCLC)H1299细胞上皮-间充质转化(EMT)模型,并探讨莲子心新碱(Neoliensine,NeoL)对其侵袭和迁移能力的抑制作用及潜在机制。方法用5、10、15 ng·mL^(-1)的TGF-β1诱导H1299细胞构建EMT模型;以15 ng·mL^(-1)的TGF-β1诱导H1299细胞作为EMT模型组,以法舒地尔(Fas)为阳性药,设置1、2、3μmol·L^(-1)的莲子心新碱实验组。采用倒置荧光显微镜观察诱导后的细胞形态;用CCK-8法检测莲子心新碱对H1299细胞的抑制率;Western Blot法检测细胞黏附因子E-钙黏蛋白(E-cadherin)以及间充质标记物N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)以及ROCK 1与P-Smad 2/3蛋白的表达;Transwell法检测莲子心新碱对TGF-β1诱导的H1299细胞侵袭、迁移的抑制作用;免疫荧光法检测H1299细胞内ROCK 1蛋白的表达及分布。结果TGF-β1诱导后H1299细胞形态呈现间充质特性。与对照组比较,随着TGF-β1浓度的升高,E-cadherin表达明显降低(P<0.05,P<0.01),N-cadherin与Vimentin表达明显升高(P<0.01,P<0.001),并且ROCK 1蛋白的表达也在这一过程中升高(P<0.05)。莲子心新碱可以抑制H1299细胞的活力,IC50为5.04μmol·L^(-1);同时与模型组比较,莲子心新碱抑制了TGF-β1促进的H1299细胞EMT过程及侵袭迁移作用(P<0.001),中、高剂量组明显增加E-cadherin蛋白的表达(P<0.05),明显减少N-cadherin和Vimentin蛋白的表达(P<0.001),还明显降低了H1299细胞内因TGF-β1诱导而升高的ROCK 1(P<0.001)和P-Smad2/3(P<0.001)蛋白的水平。免疫荧光结果显示莲子心新碱可以抑制TGF-β1诱导的H1299细胞胞质中ROCK 1蛋白的表达及分布。结论TGF-β1可以诱导H1299细胞发生EMT,莲子心新碱可以有效抑制这一过程,其机制可能是抑制了TGF-β1/Smad/RhoA/ROCK通路。

小鼠肠系膜动脉平滑肌细胞的制备及莲子心新碱对其收缩的抑制作用

目的建立小鼠肠系膜动脉平滑肌细胞(MASMCs)分离、培养和鉴定的方法,并探讨莲子心新碱(NeoL)对其收缩的抑制作用及机制。方法采用胶原酶消化法分离制备小鼠原代MASMCs;免疫荧光法检测细胞的纯度和分化状态;细胞计数法检测传代细胞的生长特性;CCK-8法检测MASMCs细胞活力;成像技术法观察NeoL对KCl诱导MASMCs收缩的影响;蛋白免疫印迹法及免疫荧光法检测MASMCs中ROCK1蛋白的表达情况。结果MASMCs生长曲线近似“S”形,第4~7天处于对数生长期,可用于传代,细胞的成活率达95%。经鉴定,MASMCs为典型的平滑肌细胞且纯度高。NeoL对MASMCs增殖能力有显著抑制作用,IC50值为1.327μmol·L^(-1)。与124 mmol·L^(-1)KCl诱导的模型组比较,0.3、0.6μmol·L^(-1)NeoL干预后MASMCs的细胞长度均显著延长(P<0.01),ROCK1蛋白表达明显下调(P<0.05,P<0.001)。结论成功构建了小鼠MASMCs模型,细胞纯度高,多次传代后细胞特征稳定;NeoL对KCl诱导的MASMCs收缩具有抑制作用,可能与其下调ROCK1蛋白表达有关。

正交试验优选改善睡眠软胶囊中五味子、莲子的提取工艺

以乙醇提取物重量、处方量样品中五味子醇甲及莲心碱的量作为考察指标,优化改善睡眠软胶囊中五味子、莲子的提取工艺,并进行相关的分析。改善睡眠软胶囊中五味子、莲子的提取工艺为乙醇70%、提取3次、加醇量为药材的4倍、提取3h。该实验结果可以为以五味子、莲子为主方的中药制剂的工业化生产提供提取方法。

莲异喹啉生物碱及其松弛平滑肌作用的研究进展

莲Nelumbo nucifera是一种传统的药用植物,现在它被认为是药食两用作物。它广泛分布于我国,自然资源十分丰富。其叶(荷叶)、花(荷花)、叶茎或花茎(荷梗)、叶基部(荷叶蒂)、雄蕊(莲须)、花托(莲房)、老熟果实(石莲子)、种子(莲子)、种皮(莲衣)、绿色胚芽(莲子心)、根茎(藕)和根茎的节部(藕节)等多个生物体部位均可作为药用或食用,是一种极具利用价值的经济作物。生物碱为莲的主要化学成分,其结构类型均为异喹啉类化合物。平滑肌通常存在于消化道、呼吸道以及血管和泌尿、生殖等人体系统中,其异常收缩与高血压、哮喘和胃肠失调等多种疾病相关,而大部分治疗策略依赖于平滑肌松弛药物。以往的研究表明,莲生物碱对平滑肌具有较强的松弛活性。该文通过检索近年来CNKI,PubMed等学术数据库,选取国内外近年来与莲生物碱及其对平滑肌作用相关的文献进行归纳、整理和分析,以期为未来从莲生物碱中发现高效、低毒的平滑肌松弛剂提供科学依据。