基于PI3K/Akt信号通路探讨莲甲散结方对肺癌H1975细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响

目的:基于PI3K/Akt信号通路探究莲甲散结方对肺腺癌H1975细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响,并探索其作用机制。方法:采用CCK-8法检测不同浓度的莲甲散结方对H1975细胞活力的影响。在CCK-8结果基础上将H1975细胞分为空白组和莲甲散结方低、中、高剂量组(3、6、9 g/L)。采用克隆形成、5-乙炔基-2′-脱氧尿苷(EDU)细胞增殖实验检测H1975细胞的增殖能力;Transwell迁移和Transwell侵袭实验检测H1975细胞迁移和侵袭能力;Hoechst 33342染色法和流式细胞术Annexin V-FITC/PI双染检测H1975细胞凋亡情况。采用蛋白免疫印迹法(Western blot)测定H1975细胞上皮间质转化(EMT)相关蛋白,凋亡相关蛋白,磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)通路蛋白的表达水平。结果:莲甲散结方对肺腺癌H1975细胞的48 h半数抑制浓度(IC50)为7.51 g/L。与空白组比较,莲甲散结方各剂量组克隆数目减少,EDU阳性数目减少(P<0.05,P<0.01);与空白组相比,莲甲散结方各剂量组迁移能力下降,侵袭能力减弱(P<0.05,P<0.01);与空白组相比,莲甲散结方各剂量组促进H1975细胞的凋亡率显著增加(P<0.01)。Western blot结果显示,与空白组相比,莲甲散结方中、高剂量组E-cadherin表达升高(P<0.05,P<0.01),N-cadherin表达降低(P<0.01)。与空白组相比,莲甲散结方各剂量组Cleaved Caspase-3、Bax表达均升高(P<0.05,P<0.01),Bcl-2表达均下降(P<0.05,P<0.01)。与空白组相比,莲甲散结方中、高剂量组p-PI3K表达下降(P<0.05,P<0.01),莲甲散结方各剂量组p-Akt表达均下降(P<0.05,P<0.01),且呈浓度依赖性。结论:莲甲散结方可以抑制肺腺癌细胞H1975的恶性表型,诱导H1975细胞的凋亡,抑制PI3K/Akt信号通路的活化,下调PI3K/Akt的蛋白磷酸化水平可能是其机制之一。