为获得更多成本廉价且易得的酪氨酸酶来源,为云南莴笋尖酪氨酸酶抑制剂的研究提供参考,选取云南莴笋尖为实验材料,通过匀浆、缓冲液抽提、硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose离子交换层析和Superdex-200凝胶过滤层析等方法纯化,获得电泳纯...为获得更多成本廉价且易得的酪氨酸酶来源,为云南莴笋尖酪氨酸酶抑制剂的研究提供参考,选取云南莴笋尖为实验材料,通过匀浆、缓冲液抽提、硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose离子交换层析和Superdex-200凝胶过滤层析等方法纯化,获得电泳纯的酪氨酸酶,并对纯化后的酪氨酸酶进行部分酶学性质研究。结果表明,云南莴笋尖中酪氨酸酶的比活力为20.62 U/mg,分子质量约为995.40 k D,亚基分子质量约为65.23 k D。最适反应温度和最适反应p H值分别为60℃和8.0,在p H 6.0~8.0及20~40℃范围内较稳定。最适条件下,以左旋多巴为底物的K_m值为1.567 mmol/L,vmax为0.037 6 μmol/(min·L)。乙醇、异丙醇、正丁醇对该酶活性有不同程度的抑制作用;甲醇、Co^(2+)、Mn^(2+)、Pb^(2+)、Ag^+、Cd^(2+)、Ba^(2+)、Ca^(2+)对该酶活性有不同程度的激活作用,Co^(2+)、Mn^(2+)对该酶具有显著的激活作用,低浓度的Zn^(2+)、Cu^(2+)、草酸、抗坏血酸对该酶有激活作用,高浓度时有抑制作用。尿素、EDTA、Li^+、K^+、Mg^(2+)对该酶活性影响较小。展开更多
文摘为获得更多成本廉价且易得的酪氨酸酶来源,为云南莴笋尖酪氨酸酶抑制剂的研究提供参考,选取云南莴笋尖为实验材料,通过匀浆、缓冲液抽提、硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose离子交换层析和Superdex-200凝胶过滤层析等方法纯化,获得电泳纯的酪氨酸酶,并对纯化后的酪氨酸酶进行部分酶学性质研究。结果表明,云南莴笋尖中酪氨酸酶的比活力为20.62 U/mg,分子质量约为995.40 k D,亚基分子质量约为65.23 k D。最适反应温度和最适反应p H值分别为60℃和8.0,在p H 6.0~8.0及20~40℃范围内较稳定。最适条件下,以左旋多巴为底物的K_m值为1.567 mmol/L,vmax为0.037 6 μmol/(min·L)。乙醇、异丙醇、正丁醇对该酶活性有不同程度的抑制作用;甲醇、Co^(2+)、Mn^(2+)、Pb^(2+)、Ag^+、Cd^(2+)、Ba^(2+)、Ca^(2+)对该酶活性有不同程度的激活作用,Co^(2+)、Mn^(2+)对该酶具有显著的激活作用,低浓度的Zn^(2+)、Cu^(2+)、草酸、抗坏血酸对该酶有激活作用,高浓度时有抑制作用。尿素、EDTA、Li^+、K^+、Mg^(2+)对该酶活性影响较小。
