菊酯类农药降解酶Est825的降解效果及安全性评价初报

通过试验表明高密度发酵制备的菊酯类农药降解酶Est825对菊酯类农药的降解率达70%以上,其降解农药的最适活力浓度为120 U/mL,最适反应温度范围为32~37℃;测定了菊酯类农药降解酶对SD大鼠急性经口毒性,LD50>6 g/kg体重,属实际无毒;皮肤变态试验结果表明该酶制剂不引起皮肤变态反应。

重组大肠杆菌发酵表达菊酯类农药降解酶培养基优化

通过单因素及正交试验,研究了碳源、有机氮源、无机氮源对重组大肠杆菌Eschericha.coli BL21(DE3)/pET-28a-est825菌体生长及产酶的影响,进而优化了产酶培养基,确定最佳培养基组成为:甘油20 g/L,酵母粉20g/L,硫酸铵5 g/L,NaCl 5 g/L,Na2HPO4·12H2O 10.7 g/L,KH2PO42.7 g/L,硫酸卡那霉素50μg/L,pH 7.0。采用此培养基发酵所得发酵液酶活力较优化前提高了86%。

菊酯类农药降解酶基因原核表达条件的优化

绘制了菊酯类农药降解酶基因工程菌E.coliBL21(DE3)/pET-28a-est825的生长曲线,优化了诱导起始菌液浓度、诱导剂浓度、诱导温度及诱导时间等条件,得到该基因工程菌诱导表达的最适条件:发酵培养至菌液OD600值为4时,添加终浓度为6g/L的乳糖,37℃诱导8h,酶的表达量最高,酶活为95U/mL,纯化后的重组酶分子量为30.1ku。