大肠杆菌新菌毛抗原的研究Ⅱ．菌毛抗原蛋白质特性测定

用保温法和裂解法可以有效提取Ｆ_(１９８７)新菌毛抗原蛋白质；该菌毛蛋白经区带电泳显示主、次两个组分，在０．０６ｍｏｌ／ＬｐＨ８．６巴比妥缓冲液电泳条件下，均向阳极泳动；免疫电泳显示两条沉淀线；其分子量为１９１００Ｄａ；等电点为３．０；由天门冬氨酸、苏氨酸、丝氨酸、谷氨酸、甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸、组氨酸、精氨酸、脯氨酸、胱氨酸等１６种氨基酸组成。

大肠杆菌新菌毛抗原的研究Ⅰ．菌毛抗原及其血凝活性测定

Ｎｏ．１和Ｎｏ．２两株大肠杆菌产生一种新菌毛抗原（暂定名Ｆ１９８７），并有性菌毛形成；菌毛直径３．６３６ｎｍ，性菌毛直径４．２ｎｍ。抗Ｄ－甘露糖血凝试验（ＭＲＨＡ）表明：本菌毛抗原具有独特的血凝谱，能稳定地凝集人（Ａ、Ｂ、ＡＢ、Ｏ）及貂的红血球，不凝集豚鼠、绵羊、山羊、马、牛、家兔、犬、貉子、小白鼠、鸡、鸽、鹌鹑等动物的红血球，对猪红血球凝集不稳定；血凝作用仅能被相应菌毛因子血清所抑制，不被Ｋ＿８８、Ｋ＿９９、Ｆ＿４１，及ＣＦＡ／Ⅰ、ＣＦＡ／Ⅱ等菌毛因子血清所抑制。血凝作用存在４℃－３７℃－４℃的凝集－解脱－复凝集现象。用Ｍｉｎｃａ培养基做３７℃培养１８～２４ｈ，可使菌毛抗原良好表达。在玻片凝集反应、反向间接血凝及反向间接血凝抑制试验中，本菌毛抗原与动物中常见的Ｋ＿８８、Ｋ＿９９、９８７Ｐ、Ｆ＿４１，及人源ＣＦＡ／Ⅰ、ＣＦＡ／Ⅱ等菌毛抗原不存在类属反应。

大肠杆菌的一种新型菌毛抗原(F1987)

从腹泻死亡貉病例中分离到２株（Ｎｏ１，Ｎｏ２）能产生一种新型菌毛抗原（暂定名：Ｆ１９８７）的大肠杆菌。该新型菌毛在菌体上生长致密、长短不一，直径为３．６３６ｎｍ，同时有性菌毛形成（直径４．２ｎｍ）。该菌毛在Ｍｉｎｃａ培养基上３７℃培养能良好表达，具有能稳定地凝集人及貂红细胞的特定血凝谱，血凝作用可被相应抗血清所抑制。菌毛蛋白质的分子量为１９１００，等电点为３．０，含有天门冬氨酸等１６种氨基酸。用凝集反应、沉淀反应、标记抗体技术等血清学反应能有效地检验该新型菌毛抗原。产生该新型菌毛抗原相应菌株的菌体抗原为Ｏ２３群，能产生肠毒素，人工感染能引起本动物貉发病。

大肠杆菌菌毛抗原K_(99)基因的亚克隆及核苷酸序列测定

利用PCR技术 ,从含有大肠杆菌菌毛抗原K99基因的质粒pX5K中扩增出 0 .4kb的K99菌毛抗原基因 ,然后将其亚克隆到pGEM T easy载体上 ,并转化至受体菌JM10 9中 ,采用碱性裂解法提取质粒DNA后 ,经NcoI和EcoRⅠ双酶切分析和核苷酸序列分析 。

用大肠杆菌K_(99)和F_(41)菌毛抗原检测牛血清抗体的琼脂扩散试验的研究

用含２ｍｏｌ／Ｌ尿素的磷酸盐缓冲液以热处理方法提取的Ｋ９９和Ｆ４１菌毛作为抗原，对琼脂扩散试验方法进行研究。结果表明本试验方法简便，特异性强，敏感性高，可用于血清抗体检测；所制备的抗原稳定、重复性好。

大肠杆菌菌毛抗原K88与热稳定肠毒素ST融合基因植物表达载体的构建及其在烟草中的初步表达

利用DNA重组技术，将编码大肠杆菌黏附素K88与稳定肠毒素ST的融合基因的序列片段可龙到植物表达载体pCAMBLM302中，成功的构建了植物重组表达质粒pCAMBIA-K88-ST。并将其转化农杆菌EHA105，利用农杆菌介导法转化烟草，并初步获得转化体。为K88-ST基因的进一步研究奠定了基础。

大肠杆菌K99和F41菌毛抗原的不同缓冲液热处理提取方法比较的研究

本试验用Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ缓冲液（Ｔ）、ＰＢＳ缓冲液（Ｐ）、生理盐水（Ｓ）和２Ｍ尿素ＰＢＳ缓冲液（Ｕ）以热处理的方法提取大肠杆菌Ｋ９９和Ｆ４１菌毛抗原，并用硫酸铵盐析纯化Ｋ９９以及用１Ｎ醋酸滴定和氯化镁沉淀分别纯化Ｆ４１。根据ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳和蛋白质含量测定结果，四种缓冲液对Ｋ９９的提取量依次是Ｕ＞Ｓ＞Ｐ，而Ｔ检不出Ｋ９９；对Ｆ４１的提取量依次是Ｕ＞Ｔ＞Ｐ＞Ｓ。Ｋ９９纯化后取得了满意的纯化结果，Ｆ４１纯化后大量上样做电泳时仍有微细的污染带出现，而且氯化镁沉淀后造成Ｆ４１严重损失。Ｋ９９和Ｆ４１纯化前后的各个样品经超声波处理、０．５％脱氧胆酸钠处理和未处理的原液与自家因子血清做琼扩试验以及Ｋ９９和Ｆ４１做交叉琼扩试验，均具有良好的特异性，而且以超声波处理后的样品做琼扩试验效果最佳。

致仔猪水肿病大肠埃希氏菌F_(107)菌毛抗原的提取及鉴定

将致仔猪水肿病大肠埃希氏菌 10 7/ 86菌株在TSB、TSA培养基上传代 ,使之表达F10 7菌毛 ,大量收集菌毛化的细菌 ,利用热洗脱法提取菌毛抗原。粗提菌毛抗原经聚丙烯酰胺凝胶电泳可见一条约 15ku的条带 ,以染色凝胶为对照 ,将未染色凝胶上的菌毛抗原条带切下 ,进行提纯。经免疫印迹反应 ,证实其条带为F10

大肠杆菌新菌毛抗原的研究Ⅵ．用沉淀反应检验菌毛抗原

大肠杆菌新菌毛抗原的研究Ⅵ．用沉淀反应检验菌毛抗原房海，陈翠珍（河北农业技术师范学院，昌黎０６６６００）对从腹泻动物所分离的大肠杆菌菌株，做菌毛抗原成分的检查是一项重要内容。常用的方法有抗甘露糖血凝试验及血凝抑制试验、用特异菌毛抗原因子血清做直接玻板...

大肠杆菌新菌毛抗原的研究V．用标记抗体技术检验菌毛抗原

应用荧光抗体染色、免疫酶染色及斑点酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）对大肠杆菌Ｆ１９８７新菌毛抗原进行了检验，经可行性、特异性及对粪便标本检验等试验，表明这些方法均可用于对Ｆ１９８７新菌毛抗原的检出。三种方法除均表现特异、准确外，又分别具有各自的特点。荧光抗体染色结果易分辨，但需具备荧光显微镜；免疫酶染色只需普通显微镜；Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ可用眼观判定结果，但对病料标本需做一定的处理后才能进行检验。本次试验均采用了间接染色法，同时试验建立了三种方法对Ｆ１９８７新菌毛抗原的具体操作程序。

琼脂扩散沉淀反应检测菌毛抗原的初步研究

用琼脂扩散沉淀反应检测了大肠杆菌菌毛抗原。结果表明 ,用巴比妥钠 -HCl缓冲液制备的琼脂平板 ,在菌毛孔与抗菌毛血清孔之间出现一条明显的沉淀线 ,而用 80 g/L的NaCl配制的琼脂板在菌毛孔与抗菌毛血清孔之间则无沉淀线。由此提示 ,用巴比妥钠

产毒性大肠杆菌菌毛抗原F_(41)单克隆抗体的制备及其特异性研究

本文报道以纯化的产毒性大肠杆菌菌毛F_(41)抗原,利用杂交瘤技术获得5株抗F_(41)抗原的单克隆抗体(1F6,2C5,3B6为IgG 1。1 H 5,4E11为IgM)。腹水抗体效价达10^(-6)培养上清抗体效价10^(-3)。通过免疫扩散、免疲印迹法及固相菌体ELISA试验证实,5株单克隆抗体均为针对ETEC菌毛F_(41)抗原的特异性抗体;红血球凝集抑制及肠上皮细胞粘附阻断试验证明1F6、2C5、3B6具有生物学活性,1H5与4E11无生物学活性,这可能(1)建立ELISA捕捉法,从粪便中直接检测F_(41)抗原以及用玻板凝集试验鉴定临床分离菌株。(2)用于F_(41)抗原性的分析及ETEC基因工程疫苗的监控手段。(3)为ETEC·F_(41)菌的致病性研究及被动免疫预防急性腹泻提供依据。

大肠杆菌菌毛抗原K99与耐热肠毒素STⅠ融合基因的克隆与核苷酸序列测定

采用PCR技术,从大肠杆菌K99中扩增出0.54kb的K99菌毛抗原基因,然后将其克隆到pUCm-T载体上,用BglⅡ鉴定K99插入的方向并测序。选择目的基因片段插入方向正确的重组质粒经BamHⅠ和SalⅠ双酶切后,通过T4连接酶与同样经BamHⅠ和SalⅠ双酶切合成的耐热肠毒素STⅠ核苷酸序列连接,通过PCR方法鉴定分析和核苷酸序列测序分析,证明插入的K99-STⅠ融合基因片段具有正确的核苷酸序列。

伤寒菌毛抗原分离方法的研究

目的 伤寒菌毛抗原的分离纯化。方法 采用冰浴磁力搅拌分离、硫酸按浓缩、Ｓｅｐｈａｒｏｓ ＣＬ－４Ｂ凝胶柱层析纯化伤寒菌毛抗原。结果 经电镜鉴定．菌毛分离完整，菌体杂质少。结论 该方法具有简便可行，重复性好等优点。既适用于菌毛疫苗的生产，又适宜于中小规模分离提取菌毛抗原的研究。

大肠杆菌新菌毛抗原的研究Ⅳ．菌株的致病作用检验

应用消化道接种途径，测定了产生Ｆ１９８７新菌毛抗原大肠杆菌菌株对貂、兔、犬、猪、貉子的致病作用，同时对貉子进行了静脉、肌肉接种的感染试验。结果初步表明：供试菌株仅引起了貉子明显发病，经消化道接种能引起腹泻并随粪便向外界排菌，剖检可见出现眼观、组织学及超微结构的病变，且在肠道内容物中能回收到原感染菌。

鸡大肠杆菌(O_(50))菌毛抗原气雾免疫和菌毛油乳苗皮下免疫效果比较研究

比较了鸡大肠杆菌 (O50 )菌毛抗原液气雾免疫与菌毛油乳苗皮下免疫的效果。油乳剂疫苗皮下免疫与菌毛液气雾免疫攻毒后的发病率分别是 1 3.33%和 2 0 %,病变差异不显著 (P >0 .0 5 ) ,而阳性对照组攻毒发病率为 80 %,病变差异显著。结果表明 ,鸡大肠杆菌菌毛液气雾免疫与菌毛油乳剂疫苗皮下注射免疫效果接近。

K_(88)、K_(99)基因工程菌菌毛抗原的提纯及其检测

采用SephadexG－100凝胶过滤和酸盐沉淀两种方法从基因工程菌（GHG001）提纯K88、K99菌毛抗原，经SDS－PAGE测定，所提纯的K88、K99抗原的分子量分别为25000和17000道尔顿.

产肠毒素性大肠杆菌K99菌毛抗原成熟肽的克隆表达及部分免疫学特性的分析

采用PCR方法,以83912(含K99)标准株菌液为模板扩增K99菌毛基因,克隆至pBS-T载体。提取阳性质粒,进行PCR和酶切鉴定。经测序正确后,构建原核表达载体pET-28a-K99,将重组质粒转入大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达后,菌体蛋白经SDS-PAGE,在约18Ku有一明显特异性条带,表达产物经初步纯化后,免疫印迹法(Western blotting)分析证实,此重组蛋白与K99阳性血清发生特异性反应。然后将初步纯化的重组蛋白免疫实验兔,并设对照组,建立间接ELISA法进行抗体检测,分析表达产物的抗原性和免疫原性,并对各组进行攻毒试验,为进一步对幼畜腹泻疫苗的研制奠定基础。

F1菌毛抗原在致病性大肠杆菌实验感染鸡体内的定殖和表述

导致鸡发生败血症的大肠杆菌一般具有Ｆ１（Ｉ型）菌毛（由Ｐｉｌ同源基因群编码）和／或Ｐ菌毛（由ｐａｐ同源基因群编码），这些菌毛通常被认为与感染和定殖有关。本实验以３株致病大肠杆菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）Ｏ１（Ｐｉｌ＾＋／ｐａｐ＾＋）、Ｏ２（ｐｉｌ＾＋／ｐａｐ）和Ｏ７８（ｐｉｌ＾＋／ｐａｐ＾＋）通过气管内注射１．５周龄鸡，旨在探讨由不同毒力因子引起传染的动力学变化及其菌毛在体内的表述。