牙龈卟啉单胞菌菌毛FimA与福赛斯类杆菌表面蛋白间相互结合机制

目的 :探讨牙龈卟啉单胞菌菌毛蛋白FimA与福赛斯类杆菌相互结合的机制。方法 :将福赛斯类杆菌ATCC 4 30 37全菌蛋白经室温、DTT和加热处理 ,SDS -PAGE梯度胶电泳 ,采用Western -blot技术检测其与牙龈卟啉单胞菌全菌蛋白及其菌毛FimA之间相互作用的表面蛋白分子。结果 :福赛斯类杆菌与牙龈卟啉单胞菌菌体蛋白相互结合的蛋白Mr分别为 36× 10 3 、2 1.9× 10 3 、7.4× 10 3 ;牙龈卟啉单胞菌菌毛FimA与Mr为 36×10 3 的福赛斯类杆菌菌体蛋白发生结合 ,且福赛斯类杆菌菌体蛋白变性不影响两者间结合。结论 :牙龈卟啉单胞菌菌毛蛋白FimA能与福赛斯类杆菌菌体蛋白相互结合 ,两者结合为碳水化合物 -蛋白质凝集素样机制。

Pg FimA Ⅱ型特异性单克隆抗体制备及鉴定

[目的]诱导表达、纯化牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)FimAⅡ蛋白,将其作为免疫原制备抗Pg FimAⅡ单克隆抗体(mAbs),对抗体特性进行初步研究。[方法]将BL21-pET28a-FimAⅡ菌株诱导表达,镍柱亲和层析纯化重组蛋白并作为抗原免疫BALB/c小鼠,经PEG融合法和腹水法获得FimAⅡ单克隆抗体;分别采用SDS-PAGE法、酶联免疫吸附实验检测抗体纯度、效价和亚型,Western Blot和Biacore检测抗体的特异性和亲和力。[结果]FimAⅡ重组蛋白为可溶性表达,最适诱导条件为1 mmol/L IPTG诱导12 h;纯化后的重组蛋白纯度为90%以上,该免疫原制备的FimAⅡ单克隆抗体为IgG1亚类,kappa亚型,效价为1:8×104以上,特异性良好,亲和力可达到9nM。[结论]成功诱导表达、纯化FimAⅡ蛋白并制备抗Pg FimAⅡ特异性单克隆抗体,为后续开发快速检测Pg诊断试纸条奠定基础。