亚抑菌浓度抗菌药物影响金黄色葡萄球菌生物膜形成的研究进展

金黄色葡萄球菌(SA)是引起医院获得性感染的常见病原体之一,极易黏附在导管或植入物表面形成生物膜导致耐药性增加,给临床治疗带来极大挑战。近年研究表明,抗菌药物处于亚抑菌浓度时可影响SA生物膜形成。因此,本文阐述SA生物膜的形成过程及基因调控,不同抗菌药物在亚抑菌浓度下对SA生物膜形成的影响及其作用机制,以期为有效控制及治疗SA生物膜相关感染提供一定依据。

亚抑菌浓度万古霉素对质粒接合转移的促进作用

为了分析亚抑菌浓度万古霉素对质粒接合转移的影响,本试验建立了以大肠杆菌(E.coli)J53作为受体菌,携带RP4-7质粒的E.coli DH5α和携带mcr-1阳性IncI2质粒的临床菌株E.coli LD67-1为供体菌的接合转移模型,测定亚抑菌浓度的万古霉素对接合转移的影响,并通过细胞膜通透性检测、扫描电子显微镜观察、活性氧(ROS)检测和实时荧光定量PCR(RT-qPCR)方法探究其内在机制。结果显示,与空白对照组相比,亚抑菌浓度万古霉素可显著提高RP4-7质粒和mcr-1阳性IncI2质粒的接合转移频率(P<0.05);N-苯基-1-萘胺(NPN)和碘化丙啶(PI)探针检测显示,亚抑菌浓度万古霉素可使受体菌细胞内、外膜通透性增加,供体菌细胞外膜通透性增加;扫描电子显微镜观察显示,经1/4最小抑菌浓度(MIC)万古霉素处理后接合细菌细胞膜发生损伤;ROS检测结果显示,与空白对照组相比,虽然经1/4 MIC万古霉素处理的受体菌的ROS表达水平显著上调(P<0.05),但1/8 MIC万古霉素处理后,供体菌和受体菌的ROS水平均无显著变化(P>0.05);RT-qPCR结果显示,与空白对照组相比,亚抑菌浓度万古霉素显著上调了供体菌和受体菌的孔蛋白基因ompF和ompC的mRNA表达水平(P<0.05),极显著上调了trbBp基因(调控细菌间形成“连接桥”)的mRNA表达水平(P<0.01),显著上调了细菌SOS响应(SOS response)相关基因recA、recN、ruvA和lexA的mRNA表达水平(P<0.05)。结果表明,亚抑菌浓度的万古霉素可能通过提高细菌细胞膜通透性,触发SOS响应,促进接合转移“连接桥”形成等方式促进RP4-7质粒和mcr-1阳性IncI2质粒的接合转移过程。

酵母样真菌最低抑菌浓度药敏试验的临床价值研究

目的 对酵母样真菌抗真菌药物最低抑菌浓度(minimal inhibit concentration,MIC)进行药敏试验,为临床合理用药提供相关依据。方法 采集铜仁市人民医院从2020年1月—2022年6月根据常规培养方式培养出344株酵母样真菌进行MIC药敏试验,对试验结果进行分析,统计标本来源类型、科室、不同种类酵母样真菌的分布情况,对主要酵母样真菌的药敏性进行分析。结果 培养出的344株酵母样真菌标本来源科室主要为重症医学科(23.55%)、神经外科(15.12%);标本类型主要为尿液标本(56.69%),其次为分泌物标本与切口分泌物标本(均12.21%);酵母样真菌种类主要为白色假丝酵母菌(39.83%),其次为光滑假丝酵母菌(22.97%)、克柔假丝酵母菌(14.83%)、热带假丝酵母菌(9.88%)。白色假丝酵母菌、光滑假丝酵母菌、热带假丝酵母菌对5-氟胞嘧啶、两性霉素B的敏感性较高,克柔假丝酵母菌对两性霉素B、伏立康唑的敏感性较高。结论 应当对重症医学科、神经外科的患者及中老年患者加强酵母样真菌感染的预防,尤其是对尿路感染的预防。不同种类的酵母样真菌对不同抗真菌药物敏感性有所不同,酵母样真菌MIC药敏试验对临床上合理使用抗真菌药物具有重要的指导价值。

西藏自治区鼠疫自然疫源地鼠疫耶尔森菌最低抑菌浓度的测定及研究

目的根据美国临床和实验室标准协会(CLSI)药敏试验方法中的琼脂平板稀释法,对分离自西藏自治区鼠疫自然疫源地内的164株鼠疫耶尔森菌进行抗菌药物最低抑菌浓度的测定,监测西藏地区耐药鼠疫耶尔森菌株,掌握其抑菌范围,为鼠疫的临床治疗提供基础数据。方法利用琼脂平板稀释法分别测定氧氟沙星、环丙沙星、复方磺胺甲恶唑(甲氧苄啶-磺胺甲恶唑)、硫酸卡那霉素、链霉素、头孢曲松钠、氨苄青霉素钠、氯霉素、盐酸壮观霉素、头孢呋辛钠、盐酸四环素、莫西沙星共12种抗生素对164株鼠疫耶尔森菌的最低抑菌浓度(MIC)。若发现耐药菌株,则用K-B法进行验证。结果所测的164株鼠疫耶尔森菌中有1株对链霉素具有耐药性(MIC=4096μg/mL),链霉素K-B法检测抑菌环直径为0,这株菌对其余11种抗菌药物均敏感。其余163株菌对12种抗生素均敏感。结论发现1株鼠疫耶尔森菌对链霉素具有耐药性,这是我国首次发现鼠疫耶尔森菌对链霉素耐药。因链霉素是国内外治疗鼠疫的首选药物,耐药鼠疫耶尔森菌会引起链霉素治疗失败,从临床和公共卫生的角度来看,对鼠疫耶尔森菌分离株的抗菌敏感性监测应常规开展。

耐碳青霉烯类肠杆菌目细菌耐消毒剂基因及四种消毒剂最低抑菌浓度检测

目的 了解临床分离耐碳青霉烯类肠杆菌目细菌(CRE)耐消毒剂基因qacE、qacE△1、qacE△1-SUL1携带情况,以及四种常用消毒剂最低抑菌浓度(MIC),为医院做好科学消毒提供参考依据。方法 收集某院2021年10月—2022年3月所有临床送检标本分离的CRE非重复菌93株,对菌株进行鉴定和药敏试验,采用聚合酶链反应(PCR)方法检测菌株耐消毒剂基因qacE、qacE△1和qacE△1-SUL1携带情况,采用琼脂稀释法检测戊二醛、碘伏、84消毒剂(含氯消毒剂)和乙醇对CRE的MIC值。结果 93株CRE以肺炎克雷伯菌(52株)和阴沟肠杆菌(25株)为主;CRE菌株耐药率较高,对大部分抗菌药物耐药率达100%;耐消毒剂基因qacE、qacE△1和qacE△1-SUL1携带率分别为72.0%(67株)、81.7%(76株)、89.2%(83株)。四种消毒剂对CRE的MIC值,戊二醛为500 mg/L,碘伏为625~2 500 mg/L,84消毒剂(有效氯浓度)为250~500 mg/L,乙醇为75%;碘伏中有4株CRE MIC值(2 500 mg/L)高于标准菌株,84消毒剂中有24株CRE MIC值(有效氯500 mg/L)高于标准菌株。结论 该院临床分离的CRE耐消毒剂基因携带率较高,部分CRE菌株对碘伏和84消毒剂有抗性,临床工作中需科学、规范地使用消毒剂,防止耐药菌医院内传播。

基于蜡螟感染模型研究亚抑菌浓度氟康唑对光滑念珠菌毒力的影响

目的基于蜡螟感染模型探究亚抑菌浓度(sub-MIC)氟康唑(fluconazole,FLU)对光滑念珠菌毒力的影响。方法收集青海省人民医院2021年4月至2022年10月临床分离非重复的光滑念珠菌作为实验菌株,采用ATB法测定FLU对光滑念珠菌的最低抑菌浓度(MIC)。采用蜡螟感染模型检测光滑念珠菌的毒力,并采用病理学和病原学方法评估建模是否成功。穿刺及不同sub-MIC FLU对健康蜡螟的影响:对照组不做任何处理,实验组分为三组,即PBS组(注射10μL PBS)、FLU亚组(分别注射10μL FLU药液,使感染蜡螟体内FLU浓度为0.5 mg/kg、1 mg/kg、2 mg/kg、4 mg/kg、8 mg/kg、16 mg/kg)和穿刺组(微量注射器穿刺但不注射)。不同sub-MIC的FLU对光滑念珠菌感染蜡螟的影响:采用2.50×10^(6)酵母/只剂量感染蜡螟,2 h后,对照组再注射10μL PBS,实验组再注射不同浓度FLU工作液,观测对光滑念珠菌感染的蜡螟的治疗效果。结果FLU对9株临床分离的光滑念珠MIC为8~32 mg/L,光滑念珠菌ATCC2001的MIC为32 mg/L。实验组蜡螟肠组织病理切片中检测到酵母样孢子,肠组织培养出光滑念珠菌,对照组中肠组织病理切片和真菌培养均未发现真菌。穿刺可造成蜡螟损伤,但所致死亡率低于10%。1/2MIC FLU可提高光滑念珠菌感染蜡螟生存率,具有统计学意义(P<0.05),而1/4MIC、1/8MIC、1/16MIC FLU对光滑念珠菌感染蜡螟生存率较PBS无明显的干预作用,差异无统计学意义(P>0.05)。结论1/2MIC FLU对光滑念珠菌感染的蜡螟具有一定的治疗作用,但浓度低于1/2MIC对感染蜡螟无明显的保护作用。

亚抑菌浓度抗菌药物联合对铜绿假单胞菌生物膜的体外作用

目的比较在1/2最低抑菌浓度(MIC)即亚抑菌浓度,哌拉西林/他唑巴坦(TZP)、头孢他啶(CAZ)、氨曲南(ATM)、亚胺培南(IPM)、左氧氟沙星(LVX)和庆大霉素(GEN)联合使用对铜绿假单胞菌(PA)生物膜的抑制效果。方法收集2020年10月至2021年3月该院临床分离的黏液型多重耐药PA 6株,确定菌株多位点序列分型(MLST),并测定TZP、CAZ、ATM、IPM、LVX和GEN 6种抗菌药物的MIC。在聚苯乙烯96孔板上构建生物膜,在1/2 MIC抗菌药物作用48 h后,采用结晶紫染色洗脱法定量检测残留生物膜,计算生物膜抑制指数。结果6株黏液型多重耐药PA的MLST均为ST 235型。在1/2 MIC,抗菌药物联合使用的生物膜抑制指数均值都大于50.0%。其中LVX+IPM和LVX+ATM对菌株的生物膜抑制指数均值大于70.0%,与其他药物联用相比,差异均有统计学意义(P<0.05)。TZP、CAZ、ATM、IPM、LVX和GEN 6种抗菌药物单独作用的抑制指数都小于50.0%,且都显著低于6种抗菌药物中任意2种联用的组合(P<0.05)。结论临床在治疗PA生物膜相关感染时,应尽量选择联合用药。在相同的耐药水平下,氟喹诺酮类和碳青霉烯类或单环β-内酰胺类抗菌药物联用对于生物膜具有更好的抑制效果。

上海地区促生长抗菌药物对猪、鸡源粪肠球菌最小抑菌浓度分布变迁分析

目的了解上海地区猪、鸡源粪肠球菌的最小抑菌浓度(MIC)在促生长抗菌药物(AGPs)禁用前后的分布变迁情况。方法收集2018-2021年上海地区猪、鸡源粪肠球菌391株,采用微量肉汤稀释法测定杆菌肽、黄霉素、吉他霉素、恩拉霉素等4种促生长药物的MIC,结合动物种类、药物使用状况等信息综合分析MIC的分布变迁情况。结果粪肠球菌对黄霉素敏感,MIC集中在1~4μg/mL,对吉他霉素最为耐受,超50%菌株MIC大于512μg/mL;2018-2021年间,黄霉素、吉他霉素和杆菌肽的MIC有降低趋势,恩拉霉素MIC呈上升趋势;吉他霉素等3种抗菌药物对鸡源粪肠球菌的MIC显著高于猪源菌株。结论禁止兽用促生长抗菌药物的大背景下,上海地区猪、鸡源粪肠球菌趋于敏感,但也存在如黄霉素MIC上升的情况,因此仍需对促生长抗菌药物的MIC进行监测以获得全面持续的数据,为后续政策提供依据。

枫杨萘醌对常见菌的抗菌谱、最低抑菌浓度和最低杀菌浓度研究

目的研究枫杨抗菌单体5-羟基-2-乙氧基-1,4-萘醌体外抗菌谱和活性强度。方法用琼脂平板法测定抗菌谱;以左氧氟沙星和阿奇霉素作为对照,用试管二倍稀释法测定最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)。结果该物质对常规菌株具有较为广泛的抗菌谱,对金黄色葡萄球菌(MIC为12.5μg.ml-1,MBC为50.0μg.ml-1)、大肠杆菌(MIC为6.25μg.ml-1,MBC为25.0μg.ml-1)、姜瘟菌(MIC为3.125μg.ml-1,MBC为6.25μg.ml-1)、蜡状芽孢杆菌(MIC为6.25μg.ml-1,MBC为25.0μg.ml-1)、白色念球菌(MIC为3.125μg.ml-1;MBC为12.5μg.ml-1)、沙门氏菌(MIC为25μg.ml-1;MBC为100.0μg.ml-1)有显著的拮抗作用。结论该物质抗菌谱较广,抗菌活性强度近似于左氧氟沙星,而远强于阿奇霉素。

犬肌肉注射头孢唑啉血液有效抗菌浓度检测

为探究犬血液中头孢唑啉的有效抗菌浓度及维持时间,以便为临床给药途径、剂量及给药时间间隔等提供理论依据,本试验以金黄色葡萄球菌(金葡菌)为供试菌株,用纸片扩散法(K-B法)从30种抗菌药中筛选出金葡菌敏感的抗菌药物——头孢唑啉;采用试管二倍稀释法测定所选药物的最小抑菌浓度(MIC)及最小杀菌浓度(MBC);选用3只中华田园犬肌肉注射头孢唑啉,用微生物法检测犬血浆中头孢唑啉的有效抗菌浓度及维持时间。结果显示:头孢唑啉对金葡菌的MIC为0.25μg/mL,MBC为0.50μg/mL;肌肉注射头孢唑啉1 h后犬血药浓度达到峰值418.67μg/mL,给药后9 h血药浓度降至0.17μg/mL,小于MIC(0.25μg/mL)。这表明中华田园犬肌肉注射头孢唑啉抑制金葡菌有效浓度维持时间在8 h以上。

微量法测定妇康乐洗剂对念珠菌的最低抑菌浓度

目的 对妇康乐洗剂进行体外抗色念珠菌试验 ,测定其最低抑菌浓度 (MIC)值和最低杀菌浓度 (MFC)值。方法 采用美国临床试验标准化委员会 (NCCL S)建议的酵母菌的液基稀释法抗真菌药物敏感试验参考方案进行试验。结果 测得妇康乐洗剂 MIC50 为 12 .2～ 39.1mg· m l- 1 和 MFC为 10 5 .6～ 331.7mg· ml- 1 。

纳他霉素的抑菌谱及最小抑菌浓度

主要介绍和研究了一种新型生物食品防腐剂——纳他霉素的使用范围和最小抑菌浓度,为纳他霉素的应用实验提供了理论依据。

鸡毒支原体的分离鉴定和最低抑菌浓度测定

从山东、河北、北京和天津等不同地区分离、鉴定了 4株鸡毒支原体 ,通过体外最低抑菌浓度测定发现泰妙菌素、泰乐菌素、百里霉素、罗红霉素、林可霉素 /壮观霉素合剂、氧氟杀星、乳酸红霉素和盐酸林可霉素对该 4个菌株的最低抑菌浓度 (MIC)平均值分别是 0 .0 0 62 μg/ml、0 .0 1 71 μg/ml、0 .0 682 μg/ml、8.5 2 48μg/ml、8.5 2 48μg/ml、0 .1 0 2 4μg/ml、0 .45 5 0 μg/ml和 1 5 .4944μg/ml,同时发现不同菌株之间的最低抑菌浓度有明显的差异。该试验结果表明鸡毒支原体容易对抗菌药物产生抗药性 ,目前临床预防或治疗鸡毒支原体感染可选用泰妙菌素、泰乐菌素、百里霉素和氧氟杀星等药物 ,而常规使用的红霉素和罗红霉素效果不佳。

苦瓜总皂甙最小抑菌浓度和最佳抑菌条件的研究

苦瓜总皂甙是苦瓜中有效成分,具有抑菌等作用。通过绘制生长曲线判断苦瓜总皂甙对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌和黑曲霉菌生长曲线的影响。采用琼脂稀释法测定苦瓜总皂甙的最小抑菌浓度(MIC)。运用正交实验设计法确定苦瓜总皂甙的最佳抑菌条件。结果表明,苦瓜总皂甙对黑曲霉菌的生长几乎没有抑菌作用。浓度为50、100、150、200mg/mL的苦瓜总皂甙对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌生长均有抑制作用,且以150mg/mL浓度时为最强,MIC分别为30、40、30mg/mL。苦瓜总皂甙对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的最佳抑菌条件为:40℃下,pH为6.0时,抑菌20h。

3种亚抑菌浓度抗生素对耐药基因水平传播的影响

目的揭示在不同种类的亚抑菌浓度抗生素作用下,细菌耐药基因水平传播的一般规律。方法选择四种不同抑菌机制的抗生素(氨苄西林、环丙沙星、红霉素和链霉素),在亚抑菌浓度条件下,将供体菌和受体菌共培养,通过PCR法和整合效率的测定,研究了整合酶对耐药基因整合效率的变化规律,并使用了不同耐药基因进行验证。结果除红霉素外,在低于50%MIC浓度抗生素的作用下,随着抗生素作用剂量的提高,整合酶整合效率有增高的趋势。结论亚抑菌浓度的抗生素作用下,提高了整合酶的整合效率,能够促进耐药基因的水平传播。

亚抑菌浓度抗生素对细菌生物膜形成的影响

细菌生物膜是临床持续性感染的主要原因之一。多项研究显示抗生素在亚抑菌浓度下可抑制细菌生物膜的形成,亚抑菌浓度抗生素对细菌生物膜的作用已受到临床和基础研究者的关注。事实上,亚抑菌浓度抗生素对生物膜的调控作用仍不清楚,常因抗生素和菌株的不同表现各异,有时甚至诱导生物膜生成,因此亚抑菌浓度抗生素的临床应用尚需大量的证据。

苦杏壳木醋液最小抑菌浓度及其抑菌活性的稳定性

采用金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、大肠杆菌(Escherichia coli)作为指示菌,由D值计算法得到了对苦杏壳木醋液在不同浓度时的存活曲线及死亡曲线,从而精确求得最小抑菌浓度(MIC):木醋液对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的MIC分别为0.44%和0.46%,可见木醋液对2种代表性细菌有较显著的抑菌效果;采用滤纸片法,对木醋液抑菌稳定性测试结果表明,苦杏壳木醋液在温度、pH值、紫外光、活性碳吸附及微波加热等不同处理下,抑菌效果基本不变,具有良好的抑菌稳定性。

次抑菌浓度的药物诱导细菌耐药与交叉耐药

铜绿假单胞菌接种于含次抑菌浓度的哌拉西林和阿米卡星的营养肉汤中，葡萄球菌接种于次抑菌浓度的氧氟沙星和环丙沙星的营养肉汤中，经传代培养可获得相对应的耐药菌株。哌拉西林诱导耐药的铜绿假单胞菌对头孢他啶亦耐药，但对阿米卡星、环丙沙星、亚胺培南／西司他丁不耐药；阿米卡星诱导耐药的铜绿假单胞菌对哌拉西林亦耐药，但对头孢他啶、环丙沙星、亚胺培南／西司他丁没有交叉耐药；氧氟沙星或环丙沙星诱导耐药的葡萄球菌对氟喹诺酮类药物都有交叉耐药，但对苯唑西林、阿米卡星。

恩诺沙星和环丙沙星对金葡菌的抗菌后效应及抗菌后亚抑菌浓度效应

报告了抗菌后效应 (postantibiotic effect,PAE)、抗菌后亚抑菌浓度效应 (postantibiotic sub- MIC effect,PASME)、亚抑菌浓度效应 (sub- MIC effect,SME)研究的方法学和恩诺沙星、环丙沙星对金葡菌抗菌后效应及抗菌后亚抑菌浓度效应的研究结果。试验表明 :2、4MIC的恩诺沙星对金葡菌的 PAE为 1.0 3、1.5 0 h,1/2、1、2、4MIC的环丙沙星的 PAE为 0 .5 1、0 .88、1.47、1.92 h;1/8、1/4、1/2 MIC的恩诺沙星对经 4MIC药物诱导 1h的金葡菌可产生0 .38、1.15、>12 .31h的 PASME,1/8、1/4、1/2 MIC的环丙沙星的 PASME为 2 .6 9、>10 .17、>13.17h;1/8、1/4、1/2 MIC的恩诺沙星和环丙沙星对金葡菌产生的 SME分别为 0 .40、0 .91、>9.44 h和 0 .42、1.14、>9.0 2 h。上述结果说明 ,PAE、PASME和 SME的大小与药物浓度呈正相关 。