菌源性磁珠在病原菌检测中的应用

目的 建立一种可检测低浓度大肠埃希菌O157等的产Vero毒素大肠埃希菌（verotoxigenic escherichia coli,VTEC）的方法.方法 从磁性细菌中获取菌源性磁珠（bacterial magnetic particles,BMPs）,将大肠埃希菌O157抗体接种于BMPs表面,形成免疫BMPs.收集养牛场排出的污水标本,每份10ml中添加免疫BMPs 1mg,通过外磁场诱导,以免疫BMPs对污水标本进行靶向取样.增菌培养12h,以VTEC的vt1（Vero毒素1基因）、vt2（Vero毒素2基因）为增扩对象,进行PCR检测.作为对照,同样的污水标本,每份10ml,常规离心分离,分离物经过12h增菌培养后,同样进行PCR检测.结果 经免疫BMPs靶向取样处理后,40份污水标本,确诊含有vt1及/或vt2基因的6份.而同样40份污水标本,经离心分离处理,最后确诊含有vt1和/或vt2基因的1份.结论 对于有大量杂菌和异物的污水标本,利用免疫BMPs,通过外磁场诱导可对目标病原菌进行靶向取样,作为病原菌检测的辅助手段,可降低漏检率.

BMPs的凝集性特征及其应用研究

目的对菌源性磁珠(Bacterial Magnetic Particles,BMPs)在溶液中的凝集,及免疫BMPs在免疫检测中的凝集性特征进行分析和评价。方法从磁性细菌体内提取BMPs,以粒径相仿的Fe3O4磁珠为对照,对BMPs在溶液中的凝集,以吸光度半减法进行量化比较。将癌胚抗原(Carcinoembryonic Antigen CEA)相关抗体接种于BMPs表面形成免疫BMPs。在CEA溶液中添加免疫BMPs,借助显微镜观察凝集现象;并且对回收的凝结体经0.1MAlbumiHCl缓冲液(pH2.3)处理,再进行同样免疫凝集检测及显微镜观察。结果浓度为50μg/ml的BMPs PBS溶液,测定吸光度半减时间值为126min,Fe3O4磁珠吸光度半减时间值为35min。在一定浓度的CEA溶液中添加免疫BMPs5μg,通过显微镜观察,CEA浓度在100pg/ml以上时,凝集现象非常明显,且CEA浓度增大时凝集体也随之增大。但结合了CEA的免疫BMPs经0.1M Albumin-HCl缓冲液(pH2.3)处理,解开抗原抗体的结合,再进行同样免疫凝集检测及显微镜观察,发现无类似凝集现象出现。表明凝集现象系由抗原抗体所致,而非单纯的磁性体凝集。结论与Fe3O4磁珠相比,BMPs相互间不易凝集,主要表现为对外磁场的感应性凝集。从BMPs的凝集性特征分析,与普通Fe3O4磁珠相比,具有明显的优势,比较适合作为免疫磁珠法检测中的磁性载体。