重组人内皮抑素工程菌菌种稳定性考察

研究重组人内皮抑素突变体质粒HM-E的宿主菌E.coliBL21(DE3)在LB培养基中传代50代过程中菌种的稳定性。研究表明,重组人内皮抑素工程菌在传代50代的过程中质粒稳定性(ST)高,为98%,菌体与菌落呈典型的大肠杆菌形态,反复冻融后表达量未下降,目标蛋白在菌体超声的沉淀中质量分数为(58.75±3.78)%,同时,四甲基偶氮唑盐微量反应比色法(MTT)结果表明目的蛋白质量浓度为20μg/mL时对内皮细胞ECV-304具有很高的抑制率,达(94.72±2.10)%。

基因工程TNF菌种稳定性观察

对重组的ｐＲＬ－ｈＴＮＦ／Ｊｍ１０３工程菌菌种按规程进行了５０代传代，并进行了一系列检测，结果表明：我们目前所用的工程菌经５０代传代后，用还原型ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳其表达量占菌体蛋白的７．８～８％，生物学活性为７．８×１０５－１．７×１０６ＩＵ／ｍｌ，与原代菌种基本一致。一般生物学性状如革兰氏染色及质粒内切酶图谱与原始菌种无变异。电镜检查经传代的工程菌与原始菌种形态一致，菌体内部结构相同，无支原体、病毒样颗粒及其它微生物污染。