蜜环菌菌索多糖抗衰老作用研究

目的:研究蜜环菌菌索多糖(ARP)抗衰老活性。方法:选用黑腹果蝇和D-半乳糖致衰老模型小鼠,观察ARP对果蝇寿命的影响,跳台法与迷宫法测定衰老小鼠学习记忆能力,称小鼠体重,测定脾脏、胸腺指数,取血清、肝、脑组织测定SOD、MDA、GSH-Px、NO。结果:ARP可显著延长果蝇寿命,明显改善衰老模型小鼠的学习记忆能力,增加其体重,拮抗胸腺、脾脏的萎缩,显著提高SOD、GSH-Px活性并降低MDA、NO含量。结论:ARP可通过调节机体免疫功能、清除自由基等方面发挥其延缓衰老的作用。

蜜环菌菌索多糖的免疫增强作用研究

研究了野生蜜环菌菌索多糖 (polysaccharidefromtherhizomorphofArmillariamellea ,AMP)对小鼠免疫功能的影响。结果表明 :对小鼠分别灌胃 (ig)剂量为 1 0 0、2 0 0、3 0 0mg/kg·d的AMP均能增加小鼠体重、改变免疫器官重量、抵抗环磷酰胺 (CY)对小鼠外周血白细胞数量的影响。实验显示灌胃AMP能提高小鼠单核巨噬细胞系统的吞噬功能 ,增强小鼠迟发型变态反应 ,促进溶血素的生成。

蜜环菌菌索多糖对四氧嘧啶致胰岛细胞损伤的保护作用

目的研究蜜环菌菌索多糖(AMP-1)对四氧嘧啶(AXN)致胰岛细胞损伤的影响。方法培养大鼠胰岛素瘤细胞(INS-1),以AXN损伤细胞,培养液中加入不同浓度的AMP-1(2、10、50、100、500、1000mg.L-1),用MTT法测细胞存活率;使用放免法检测不同浓度AMP-1对INS-1细胞葡萄糖刺激性的胰岛素分泌量的变化;用比色法检测INS-1细胞一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)等指标的变化。结果AMP-1可减少AXN对INS-1细胞的损伤,AMP-1处理组的INS-1细胞存活率增加;在5.6mmol.L-1、16.7mmol.L-1葡萄糖刺激下,AMP-1(50、100、500、1000mg.L-1)剂量依赖性地促进了INS-1细胞葡萄糖刺激性的胰岛素分泌;AMP-1能使INS-1细胞NOS活性降低,MDA和NO含量减少,同时增强了SOD的活性,增加了GSH的含量。结论一定浓度范围的AMP-1对葡萄糖刺激下INS-1细胞的胰岛素分泌的促进作用,可能与AMP-1能够增加细胞清除自由基能力有关。

蜜环菌菌索培养特性的研究

研究了蜜环菌菌索在7种不同培养基上的生长特性,结果表明:菌索在蛋白胨综合PDA培养基和综合培养基上生长速度最快,分别为5.02和4.35mm/d,长满斜面的时间分别为20和23d,而且菌索生长势强、分枝多、密度高。

蜜环菌菌索多糖对小鼠血糖及急性毒性作用研究

本文研究了蜜环菌菌索多糖AMP - 1和AMP - 2组分对小鼠血糖及其急性毒性作用。结果表明 :AMP - 1能使正常小鼠的糖耐量增强 ;AMP - 1、AMP - 2均能抑制四氧啶糖尿病小鼠血糖升高 ;AMP - 2能显著降低四氧啶糖尿病小鼠的血糖 ;AMP - 1、AMP - 2 (灌胃剂量为 10g/kg/d)对供试小鼠无毒性作用 。

蜜环菌菌索多糖提取条件的优化及其部分生物学性质

为了提高蜜环菌菌索多糖收率 ,本文按正交表L9(33 )设计试验 ,获得蜜环菌菌索多糖最佳提取条件为加水倍数 2 5倍 ,提取时间 3h ,醇浓度 99 5 % ;同时以多刺裸腹蚤为实验对象 。

蜜环菌发育(连载二)——菌索、假菌核

4 菌索的分化结构和功能 目前已知菌索分化的基本结构：菌索的结构和功能在复杂程度上可与植物的根相比拟。菌索可能也分泌一些物质（Mallett＆Colotelo，1984）。按照Garraway（1991）的观点，菌索结构和功能如下。

野生和人工培养的蜜环菌菌索营养成分比较

对野生和人工培养的蜜环菌菌索主要营养成分及氨基酸含量进行了测定和比较。结果表明:人工培养的蜜环菌菌索蛋白质、脂肪、多糖含量均高于野生菌索,二者的氨基酸组成相似,但人工培养的菌索氨基酸总量高于野生菌索。

琼脂固体培养基培养蜜环菌菌索总DNA的提取

野外采集的蜜环菌[Armillaria mellea(Vahl.ex Fr.)Quel]在提取DNA前需要分离获得纯化的菌丝体。常规液体培养获得菌丝团的方法感杂率较高,采集固体培养基表面cellophane膜上形成的菌丝则难以获得足量的DNA提取材料。蜜环菌细胞内含有大量多醣类物质,也使得蜜环菌高质量DNA的提取存在一定的困难。本研究通过改进试验,提供一个直接从琼脂固体培养基培养的蜜环菌菌索中提取高质量DNA的方法。其中样品的预先冻融处理方法可以促使蜜环菌菌索与琼脂分离;而在裂解提取缓冲液裂解材料细胞后加入1.25 mol/L KAc溶液,则有利于除去蜜环菌细胞内的多醣类物质以及残留的少量琼脂。通过琼脂糖电泳、紫外分光光度计对DNA浓度及OD值的测定、ISSR引物的PCR扩增以及酶切产物的PCR扩增等方法的检测,结果均表明该方法提取的DNA质量较好,符合进一步进行分子生物学研究的要求。

核桃壳与棉籽壳对蜜环菌菌索生长的影响比较

探究核桃壳与棉籽壳对蜜环菌菌索生长的影响。在瓶栽和袋栽栽培过程中,采用单因素试验结合统计分析方法比较不同栽培原料的栽培效果。实验表明,菌索平均生长速度在核桃壳与麦麸培养料处理中生长最快;核桃壳与棉籽壳组合次之;棉籽壳与麦麸组合最慢。在蜜环菌培养过程中,进一步采用核桃壳与麦麸为主要原料,且比例为4:6时,可以明显促进蜜环菌菌索生长,而且可以缩短生长周期,提高产量。新的培养方法可用于蜜环菌菌索生产,为天麻和猪苓提供优质伴栽材料。

菌索接种蜜环菌的简易技术

一、前言受蜜环菌感染的木材是最常用的接种体尽管用这种方法能够较好地摸拟接种感染,但由于不可能预测到根和菌索的接触部位和菌索的脆碎期,所以菌索侵染的发生无规律可循,而且菌索与根的接触的检测很花费时间。因此侵染早期阶段的调查研究尤为复杂。所以,通过对天然感染根的观察,得到了直接用菌索作为接种体的方法便克服了这些障碍。

菌索根朽病

我们极有价值的绿化树种和观尝树种极易感染菌索根朽病。这是根据该真菌在根上的病皮下,或在土壤中产生的细长的、园柱形、黑色的组织似鞋带状物而定此名的。此病害在别处称为蜜环菌(Armillaria)根朽病。该病使根颈及根腐烂,并在根颈处产生蕈。在绿化树种和观尝树木中,栎和槭树最感病。而且有时还可毁坏苹果、桦属、刺槐、栗、桉树属、一枝黄花树、落叶松、花楸树、松属、美国梧桐、杨属、红芽树和云杉属等。要是具备对侵染有利的条件,该病害几乎可在任何乔灌树木上发生。

蜜环菌菌索多糖延缓秀丽隐杆线虫衰老机制研究

目的探讨蜜环菌菌索多糖(AMP)延缓秀丽隐杆线虫衰老的作用机制。方法以模式生物秀丽隐杆线虫作为活体模型,测定其在正常培养条件下的生存期与后代平均数量,氧化应激条件下的存活率和热休克蛋白16.2(HSP-16.2)、超氧化物歧化酶-3(SOD-3)的表达。结果在正常培养条件下,蜜环菌菌索多糖(AMP-1、AMP-2)显著延长秀丽隐杆线虫的生存期,对其生殖力没有损害;在氧化应激条件下,显著提高秀丽隐杆线虫HSP-16.2和SOD-3的表达。结论提高秀丽隐杆线虫的氧化应激能力可能是AMP延缓秀丽隐杆线虫衰老的作用机制。

SmartRoot在蜜环菌菌索表型谱分析中的应用

目的:建立获取精确的表型谱数据研究平台,是目前中药资源研究亟待解决的技术难点。如传统的蜜环菌菌索表型表征方式多为描述性文字,存在较大的主观性和经验性,亟需一种客观并准确的方法进行蜜环菌菌索表型的表征。方法:基于图像处理软件Image J和根系识别插件SmartRoot与Synbiosis ProtoCol 3影像分析仪相结合,对蜜环菌平板生长图片进行分析,测定蜜环菌菌索长度、生长速度、分枝情况、新生菌索夹角等,建立蜜环菌菌索表型谱分析测量体系。结果:基于该文开发的方法,可以在不影响蜜环菌生长情况下,实时分析蜜环菌菌索的生长长度、生长速度、分枝数、新生菌索夹角等表型谱变化,继代后9~12 d的蜜环菌生长最为迅速,新生菌索与母体菌索之间夹角接近垂直。该方法与传统的蜜环菌生物量表型参数干重呈现一定的相关性,具有较好的实际应用价值。结论:该研究建立了一套客观、准确、快捷和实时的蜜环菌菌索表型谱分析测量体系,拓展了SmartRoot的应用范围,可用于受控实验条件下中药资源的表型谱分析。

蜜环菌索发育的研究

利用光学和电子显微镜对蜜环菌索的发育及其结构分化进行了较系统研究。菌索的顶端有保持细胞不断分裂的分生组织区。由此衍生的菌丝细胞组成菌索的初生结构,包括分化不明显的表皮、皮层及初生髓;初生髓细胞体积大,核同步分裂产生多核体细胞,以一个或几个核为单位在母体细胞中分化出细长的菌丝后,可以出芽方式自母体细胞中伸出,并且一开始就有薄壁与厚壁之分,同一母体细胞中可同时产生这两类菌丝。发育后期母体细胞破裂形成菌索的髓,两类疏松菌丝分布在其中。观察了成熟菌索的结构和侧枝的形成过程。菌索侧枝起源于皮层细胞,该细胞横向分裂首先形成分枝原基,之后突破菌索壳而分化出新的菌索顶端。讨论了蜜环菌索在不同寄主中的侵染方式。

蜜环菌糖苷水解酶家族基因在菌索与菌丝间的差异表达分析

蜜环菌是一种兼性腐生和寄生的真菌,通过降解伴栽基质并为药用植物(天麻)或菌物(猪苓)提供营养物质,而糖苷水解酶是这一过程的主要酶类。本研究从蜜环菌Armillaria mellea 541菌株转录数据库中共获得糖苷水解酶家族基因170个,分布于39个亚家族。进一步分析发现,这些家族基因编码的糖苷水解酶家族蛋白(glycoside hydrolase family,GHF)结构域多达48种181个,以Aamy、Glycohydro、MelibiaseC、Nod B homology和PA14等结构域为主。对糖苷水解酶家族蛋白进行了系统的Gene Ontology(GO)功能注释和Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes(KEGG)代谢通路分析,其功能以结合、水解和催化细胞壁成分为主。编码GHF3(A0A2H3D3T6)、GHF78(A0A2H3D8T6)、GHF51(A0A2H3E4X4)、GHF47(A0A2H3EK71)和GHF5(A0A2H3EBW7)等5个糖苷水解酶家族蛋白的基因在A. mellea541菌索与菌丝间差异表达,其结构域依次为PA14、Bacrhamnosid6H/C、Alpha-L-AFC、Glycohydro47和Glycohydro5,可能发挥结合碳水化合物和催化鼠李糖苷、阿拉伯呋喃糖苷、甘露糖残基和纤维素等水解的功能,这为研究蜜环菌与天麻或猪苓的相互作用提供了理论依据。

蜜环菌菌索形成及分支过程中钙离子流的非损伤微测

为研究蜜环菌Armillaria mellea菌索形成及分支与钙离子的关系,以菌株Armillaria mellea 541为试验材料,采用离子非损伤微测技术,对在马铃薯琼脂糖培养基(PDA)、含0.2 g/L CaCl_(2)的PDA和NADPH氧化酶抑制剂200μmol/L氯化二亚苯基碘鎓(Diphenyleneiodonium chloride,DPI)PDA上培养的蜜环菌菌丝及菌索顶点、菌索分支点和成熟菌索与微环境间钙离子流进行测试。结果表明:菌株A.mellea 541菌丝和菌索的生长及菌索分支均与钙离子相关。添加0.02%CaCl_(2)或200μmol/L DPI后,菌丝及菌索生长速度均加快,菌丝及菌索顶端钙离子内流;0.2 g/L CaCl_(2)能够促进菌株A.mellea 541菌索的形成和侧向分支,菌索数量和分支数量均显著增加,成熟菌索及菌索分支处均外排钙离子;200μmol/L DPI则抑制菌索形成及侧向分支过程。推测钙离子与活性氧可能协同调节菌索分支。试验结果为深入揭示蜜环菌菌索形成及分支的机制提供了数据支持和研究方向。

蜜环菌菌索生物学特性的研究

为提高榛蘑人工栽培中出菇的稳定性,对蜜环菌菌索的生物学特性进行了研究,通过在不同生长时间、环境温度、培养基质的条件下对蜜环菌菌索进行培养.试验发现,菌索会由具有活性的黄色菌索逐渐角质化变成黑色丝状菌索,为保持蜜环菌菌索的活性状态,最佳培养条件：培养时间应控制在15～23 d,最佳培养温度为恒温25℃,最佳培养基配方为PDA＋麦麸＋锯末.

北方蜜环菌菌索生长、发育对环境氧气及土壤湿度的响应

蜜环菌属Armillariaspp.真菌是重要的植物病原菌和兰科Orchidaceae植物天麻Gastrodia elata的专性共生菌,能以菌索形式在土壤中存活和传播,因此,土壤环境变化对蜜环菌菌索生长、发育的影响,是关系天麻栽培和森林蜜环菌病害的重要过程。为了揭示蜜环菌生长发育对土壤水分和氧气的适应特征,本研究以北方蜜环菌Armillaria borealis为研究材料,设计氧气浓度5%、15%、20%和30%的4个水平与土壤湿度20%、40%、60%和80%的双因素实验,在室内24℃及黑暗条件下培养,观察菌索发生时间(T)、测定菌索生物量(DW)、菌索长度(L)、菌索数(Nt)、菌索分枝数(Nf)和菌索直径(AD)。结果表明,土壤湿度和氧气浓度对北方蜜环菌菌索发育和生长具有显著影响,在15%的氧气浓度和60%的土壤湿度发育最快。本研究为人工模拟蜜环菌生长发育的环境提供了部分依据,对提高天麻人工栽培的产量,揭示森林蜜环菌病害发病机制具有重要价值。

我国蜜环菌分类单元间菌索的相互作用

蜜环菌菌索是天麻生长的主要营养来源,而蜜环菌生物种菌索之间可能存在种间相互作用,因此天麻栽培时蜜环菌种的混用可能对天麻的产量产生影响。为揭示我国蜜环菌分类单元间菌索的相互作用,以我国8个蜜环菌分类单元为研究对象,通过研究其共同培养时整体及单侧菌索的生长速率和单位长度内生长尖端个数来研究其菌索间的作用特性。结果表明:两者间相互拮抗的有CBS D-CBS F;仅有一个蜜环菌菌索未受到影响或受到协同作用的有:CBS A-CBS H中的CBS A、CBS F-CBS J中的CBS J、CBS A-CBS F中的CBS A、CBS A-CBS N中的CBS A、CBS F-CBS M中的CBS M、CBS J-CBS M中的CBS M、CBS B-CBS J中的CBS B;组合中两种蜜环菌菌索靠近侧协同生长的有:CBS A-CBS M;组合中对两者靠近的区域具有优势的有:CBS A-CBS B中的CBS B、CBS A-CBS J中的CBS J、CBS B-CBS F中的CBS F、CBS D-CBS H中的CBS H、CBS D-CBS N中的CBS N和CBS F-CBS M中的CBS F。本研究的开展为我国蜜环菌的鉴定、天麻栽培用蜜环菌种的选用提供理论指导。