野生革耳菌漆酶cDNA在巴斯德毕赤酵母中的表达

将分离到的野生革耳菌(Panusrudis)漆酶的cDNA序列克隆到毕赤酵母表达载体pPIC9K上,构建成受强启动子AOX1控制的重组表达载体.重组质粒DNA经BglII线性化后,电击转化毕赤酵母GS115细胞,通过G418筛选和PCR鉴定的重组酵母在甲醇诱导后能分泌表达活性漆酶.低温培养是该漆酶基因活性表达的必要条件.培养基中添加400μmol/L的CuSO4最有利于漆酶的活性表达.

野生革耳菌组成型漆酶的生成条件及性质研究

首次发现野生革耳菌 (Panusrudis)在 39℃液体振荡培养条件下 ,不需诱导剂的诱导 ,能持续产生漆酶 .优化后培养基的碳氮源分别为 2 %蔗糖和 2 6mM酵母抽提物 ,最高酶活达 1 .6× 1 0 4U/L ,属于目前已知的组成型漆酶高产菌株 .发酵液经硫酸铵沉淀 ,DEAE Sepharose ,SephacrylS 2 0 0 ,MonoQ柱层析分离纯化后 ,可得电泳纯漆酶蛋白 .该酶为单体蛋白 ,分子量为 58kDa .以愈创木酚为底物 ,该酶的最适作用pH为4 5,最适反应温度为 50℃ ,Km值为 0 .2 1mM ,并表现出较好的热稳定性 。

贝壳状革耳菌在固体及液体培养过程漆酶同工酶的产生研究

着重研究了白腐菌Pantusconchatus在固体和液体培养过程中跑外漆酶及其同工酶产生规律及其差异。研究结果表明：固体和液体培养产漆酶的最高峰在培养15d以后，固体和液体培养过程漆酶同工酶的差异比较大。液体培养过程中漆酶同工酶产生情况稍有差异，同工酶的数量远比固体培养少，而且分布在高分子量区域。固体培养过程中，漆酶同工酶的产生远比液体培养复杂。培养初期漆酶同工酶带主要分布在低分子置区域。随着培养时间延庆同工酶带增加，最多达七条同工酶带，其中部分同工酶带落在高分子量区域。随着培养时间再延长，低分子量区域的同工酶带相对减弱，而高分子旦区域的同工酶带增加和集中。到培养后期低分了量区域的同工酶带又重新出现。

日本亮耳菌──一种新的杀线虫真菌

从贵州省宽阔水自然保护区采到的日本亮耳菌Lampteromyces japonicus (Kawam.)Sing.这一中国新记录种，其菌丝体及其丙酮粗提物对线虫有毒杀作用，是一类有应用前景的食线虫真菌资源。

贝壳状革耳菌染料脱色作用的研究

利用比色法研究了贝壳状革耳菌产漆酶体系在不同情况下对两种不同类型合成染料的降解脱色。结果表明 ,染料在较低浓度 ( 1 0mg L)时 ,漆酶对其降解迅速而彻底 ;pH值、培养方式 (静态培养、摇瓶培养 )对降解作用都有较大的影响 ;通过在不同时间 ( 0d、6d、1 8d)向产酶体系中加入染料证实了漆酶活性与染料脱色率呈正相关。

贝壳状革耳菌固定化生物球处理毛皮染料废水的研究

用PVA复合包埋体系制备的贝壳状革耳菌固定化生物球，处理国产毛皮染料模拟废水，考察生物球投加量、染料浓度、转速、pH等对该生物球处理毛皮染料废水的影响，以及生物球的反复脱色能力。结果表明：PVA复合生物球对毛皮染料的脱色效果很好，酸性染料希力毛皮红、希力毛皮蓝和分散染料捷力毛皮蓝的脱色率分别高达97．80％、98．60％、92．33％。生物球的脱色能力受染料浓度、转速、pH的影响较大，生物球投加量影响较小。生物球的高脱色率处理条件为：生物球投加量1g/100mL，转速150r／min，酸性染料浓度低于200mg／L，分散染料浓度低于150mg／L，pH值范围为3—5：反复脱色能力强，3次之后脱色率仍在89％以上。

贝壳状革耳菌漆酶酶活测定方法分析

酶活测定方法中所用的反应底物、反应条件以及酶活单位定义对漆酶酶活的测定结果有很大的影响。在对贝壳状革耳菌 (Panusconchatus)漆酶酶活测定方法的研究中发现 ,该酶与 2 ,2’ -连氮 -双 ( 3-乙基并噻- 6 -磺酸 ) (ABTS)反应的最适pH值为 3.0 ,而与紫丁香醛连氮、2 ,6-二甲氧基苯酚和邻甲联苯胺反应的最适pH值均为 4.0。上述底物与Panusconchatus漆酶反应的Km (米氏常数 )分别为 0 .0 1 1 6(mmol·L) - 1 ,1 4.1 0 95 (mmol·L) - 1 ,0 .1 0 1 1 (mmol·L) - 1 ,0 .1 41 5 (mmol·L) - 1 。该酶与ABTS、2 ,6-二甲氧基苯酚和邻甲联苯胺反应均表现为零级反应 ,而与紫丁香醛连氮反应时只在一定范围的酶浓度以及反应时间内才表现为零级反应。

固体培养条件下外加营养碳源及微量元素对贝壳状革耳菌酶系产生的影响

研究了固体培养条件下外加营养碳源葡萄糖及土豆汁 ,微量元素Cu2 + 、Mn2 + 对贝壳状革耳菌产木素降解酶、纤维素酶和半纤维素酶的影响。结果表明 ,营养碳源和微量元素对贝壳状革耳菌漆酶的产生有显著的促进作用 ,外加碳源土豆汁要比外加葡萄糖所产生的促进作用大。对于依赖锰过氧化酶、CMC酶和半纤维素酶 ,外加营养碳源和微量元素对其产生无明显影响 ,而微晶纤维素酶在各个固体培养过程中都未检测到。

槐耳菌冲剂对慢性乙型肝炎e系统影响的初步观察

试用民间药用真菌槐耳冲剂治疗慢性乙型肝炎病毒感染患者20例,旨在观察其对血清HBV复制标志中e系统的影响。结果显示,治疗组20例HBeAg阴转6例,占30%,其中有3例HBeAb转为阳牲,有1例在HBeAg转为HBeAb时HBsAg阴转。对照组10例(IL-2)中HBeAg有4例阴转,占40%。两组比较阴转率相似。初步证明槐耳菌冲剂的活性成分可能对HBV复制有一定的抑制作用。

槐耳菌质干预TWIST介导乳腺癌紫杉醇化疗耐药蛋白及信号转导通路的机制研究

目的探讨槐耳菌质干预TWIST介导乳腺癌紫杉醇化疗耐药蛋白及相关信号转导通路的机制。方法采用不同浓度紫杉醇处理乳腺癌MCF-7细胞,建立紫杉醇耐药乳腺癌细胞株MCF-7/Taxol,将MCF-7/Taxol细胞分为对照组、紫杉醇组、合用组和槐耳清膏组,采用台盼蓝拒染法检测MCF-7/Taxol细胞的存活率,采用蛋白质印迹法(Western blot)检测MCF-7/Taxol细胞中TWIST、多药耐药相关蛋白(MRP)、P-糖蛋白(P-gp)的表达水平。对MCF-7/Taxol细胞进行基因瞬时转染,将转染后的MCF-7/Taxol细胞分为TWIST-shRNA(+)组和TWISTshRNA(-)组,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测转染后MCF-7/Taxol细胞中TWIST mRNA的表达水平。采用终浓度为3 mg/L的紫杉醇处理转染后的MCF-7/Taxol细胞,随后采用Western blot检测MCF-7/Taxol细胞中磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)的表达水平。结果药物处理24、72、120 h时,对照组、紫杉醇组、合用组和槐耳清膏组MCF-7/Taxol细胞的存活率比较,差异均有统计学意义(P﹤0.01);槐耳清膏组MCF-7/Taxol细胞的存活率低于对照组、紫杉醇组和合用组(P﹤0.05);合用组MCF-7/Taxol细胞的存活率低于对照组和紫杉醇组(P﹤0.05)。药物处理120 h时,紫杉醇组MCF-7/Taxol细胞中TWIST、MRP、P-gp蛋白的相对表达量均高于对照组,槐耳清膏组MCF-7/Taxol细胞中TWIST、MRP、P-gp蛋白的相对表达量均低于紫杉醇组和合用组,槐耳清膏组MCF-7/Taxol细胞中TWIST、P-gp蛋白的相对表达量均低于对照组。TWIST-shRNA(-)紫杉醇组MCF-7/Taxol细胞中p-AKT的相对表达量为TWIST-shRNA(-)对照组的(3.29±0.15)倍,TWIST-shRNA(+)紫杉醇组MCF-7/Taxol细胞中pAKT的相对表达量为TWIST-shRNA(+)对照组的(0.85±0.21)倍。结论槐耳菌质可以抑制紫杉醇耐药乳腺癌细胞株MCF-7/Taxol的增殖,逆转其化疗耐药性,且该作用可能与TWIST介导的AKT信号转导通路有关。

槐耳菌液体培养富硒的研究

当发酵培养基中的硒浓度达到20μg/mL时,对菌丝体生长的抑制率最小,多糖含量达到51.3mg/g。同时进行了槐耳菌富硒条件的优化:pH5.5,接种量10%,装液量80mL/500mL三角瓶,28℃,200r/min发酵培养9d,且在发酵第5d加入硒溶液,槐耳多糖含量达到50.3mg/g,多糖中硒含量达到761.9μg/g,多糖对硒的转化率达到35.8%。

窖泥己酸菌新菌种——耳涡形梭菌的发现与其形态及生理特性研究

耳涡形梭菌是窖泥中的一种己酸产生菌,它与业界普遍认可的克拉瓦氏菌间存在明显的差异,并不与甲烷菌共栖。耳涡形梭菌普遍地存在于浓香型窖泥中。

耳状网褶菌的化学成分

从野生真菌耳状网褶菌 (Paxillus panuoides Fr.)子实体中分得 4个化合物 ,经光谱和化学方法分别鉴定为 (2 S,3 S,4R,2′R) - 2 - (2′-羟基二十四碳酰氨基 )十八碳 - 1 ,3 ,4-三醇(1 )、5α,8α-表二氧 - (2 2 E,2 4 R) -麦角甾 - 6 ,2 2 -二烯 - 3β-醇 [5α,8α- epidioxy- (2 2 E,2 4 R) - ergos-ta- 6 ,2 2 - dien- 3 β- ol,2 ]、(2 2 E,2 4 R) -麦角甾 - 4,6 ,8(1 4) ,2 2 -四烯 - 3 -酮 [(2 2 E,2 4 R) - ergosta- 4,6 ,8(1 4) ,2 2 - tetraen- 3 - one,3 ]和对羟基苯甲酸乙酯 (ethyl 4- hydroxybenzoate,4)。其中化合物4作为天然产物属首次报道。化合物 1～

耳状网褶菌菌丝体的化学成分研究

从耳状网褶菌 (PaxilluspanuoidesFr.)培养发酵的菌丝体中首次分出 6个化合物。通过光谱分析鉴定为 :2 1 hydroxylanosta 8,2 4 dien 3 one (1)、2 3 methylergosterolperoxide (2 )、(2S ,3S ,4R ,2′R) 2 (2′ 羟基二十四碳酰氨基 )十八碳 1,3,4 三醇 [2S ,3S ,4R ,2′R) 2 (2′ hydroxytetracosanoylamino)oc tadecane 1,3,4 triol](3)、D 赤藓醇 (D erthyritol) (4 )、对羟基苯甲酸 (p hydroxybenzoicacid) (5 )和琥珀酸(succinicacid) (6 )。化合物 1、2和

榆耳菌株G118生物学特性初探

G118属于低温结实型菌株,菌丝生长最适温度是23～27℃,最适pH是6～7,原基形成的适宜温度是15～20℃,子实体生长的最适温度为15～20℃。培养料最适含水量是60%～65%,出菇期间最适空气相对湿度要求在85%～95%。一潮菇的生物学效率为104.29%。

红栓菌和槐耳菌菌体蛋白对硒富集的比较

主要研究了红栓菌和槐耳菌对硒的耐受力以及菌丝体蛋白对硒的富集作用。结果表明,红栓菌的生长速率明显要快于槐耳菌,蛋白质富集硒的能力比槐耳菌强,但对硒的敏感性较强。当发酵培养基中硒的添加量达到25μg/ml时,对菌丝体生长的抑制率最小,且在发酵初期添加无机硒,红栓菌蛋白质富硒能力最强,其中蛋白总硒量为255.87μg,蛋白质中硒含量为6.40μg/mg。

耳状网褶菌发酵液化学成分研究

耳状网褶菌Paxillus panuoides属于大型真菌,在全国各省份均有分布,对其发酵液主要化学成分进行研究具有重要的意义。通过运用多种分离与分析方法(CC、TLC、prep.TLC、MPLC、HPLC等)以及波谱学技术(1D NMR、2D NMR、MS、HR-MS、UV/Vis等)并借助必要的化学手段对其发酵液进行化学成分的研究,共分离得到7个化合物。分别为:(22E,24R)-麦角甾-5,7,22-三烯-3β-醇、5α,8α-过氧-(22E,24R)-麦角甾-6,22-二烯-3β-醇、5α,6α-环氧麦角甾-8,22-二烯-3β,7α-二醇、1-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(2S,3R,4E,8E,2'R)-2-N-(2'羟基棕榈酰基)-9-甲基-4,8-sphingadienine、1-9Z-十八烯酸甘油酯、4-羟基苯乙酸、对羟基苯乙醇。

肉灵芝、灵芝、槐耳菌及蝉花菌对S180肉瘤小鼠的抗肿瘤活性研究

目的:研究肉灵芝、灵芝、槐耳菌和蝉花菌的体内抗肿瘤活性。方法:将健康雄性昆明种小鼠接种S180肉瘤后随机分为对照组、环磷酰胺组、肉灵芝浸出液组、肉灵芝水煎液组、灵芝水煎液组、槐耳菌水煎液组和蝉花菌水煎液组,给药后观察对各组小鼠生存质量、抑瘤率、胸腺指数、脾脏指数。结果:肉灵芝浸出液、肉灵芝水煎液、灵芝水煎液、槐耳菌水煎液、蝉花菌水煎液对小鼠的抑瘤率分别为18.3%、13.1%、46.6%、34.2%、22.5%,灵芝组抑瘤作用显著(P<0.05);各组胸腺、脾脏指数与对照组比较,差异无统计学意义。结论:上述药物对小鼠体内肿瘤有一定抑制作用。

从直饮水中检出费氏耶耳森氏菌

目的查清直饮水中费氏耶耳森氏菌对直钦水质量的影响。方法采用细菌分离、微生物生化系统鉴定。结果从直饮水中检出费氏耶耳森氏菌。结论加强设备的维护,确保各项工艺的正常运行,为社会提供优质的放心产品。

银耳优良菌株选育的研究

银耳（Ｔｒｅｍｅｌｌａｆｕｃｉｆｏｒｍｉｓ）不同品种的子实体，在ＰＤＡ培养基上于适宜的条件下，均能弹射出担孢子，银耳担孢子在适宜的条件下能繁殖成孢子（芽孢）。选取不同品种的银耳孢子进行杂交后，淘汰去不理想的菌株，则可选出产量高、质量好的银耳优良菌株。