超抗原SE-金葡菌肠毒素的研究进展

金黄色葡萄球菌肠毒素(SE)是一种外源性超级抗原,仅需微量即能能刺激非特性T细胞的大量增殖,促使产生大量和多种细胞因子及细胞毒,提高机体免疫力,使之获得抗肿瘤的能力,故是一种很有前途的新型肿瘤免疫治疗剂,目前已开始已用于肿瘤患者的辅助治疗。本文对葡萄球菌肠毒素的结构、抗肿瘤作用机理及其应用前景作了简要综述。

金葡菌肠毒素A和B诱导BALB/c鼠皮肤炎症的实验研究

目的:探讨金葡菌肠毒素A(SEA)和金葡菌肠毒素B(SEB)在特应性皮炎发病机制中的作用。方法:使用100μg/mL浓度的SEA或SEB溶液分别斑贴致敏BALB/c鼠,以生理盐水为阴性对照,ELISA测定血清总IgE水平,观察和比较各组小鼠皮肤组织病理改变,半定量RT-PCR法测定致敏局部皮肤中白介素-4(IL-4)、白介素-5(IL-5),干扰素-γ(IFN-γ)mRNA表达水平。结果:SEA组及SEB组小鼠组织病理未见明显炎症性变化,各组小鼠间血清IgE水平无明显差异,IL-4、IL-5、IFN-γmRNA表达水平无统计学差异(P>0.05)。结论:100μg/L的SEA或SEB用斑贴致敏的方法不能在BALB/c鼠诱发具有特应性皮炎特征的皮损。

夹心免疫PCR方法检测金葡菌肠毒素B

目的 建立双抗夹心免疫PCR的检测技术 ,用于检测极微量的抗原。方法 以亲和素作为连接分子 ,连接生物素化抗体和生物素化DNA ,应用于免疫PCR中检测极微量金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)。结果 双抗夹心免疫PCR的检测技术 ,检测SEB的灵敏度达 0 1ng/L ,与夹心ELISA方法比较灵敏度高 10 3 倍。结论 双抗夹心免疫PCR系统灵敏度高 ,可用于各种微量抗原的检测。

福氏2a志贺菌肠毒素ShET1/ShET2基因分型在菌痢快速诊断中的应用

目的对福氏2a志贺菌肠毒素ShET1(Shigellaenterotoxin1)和肠毒素ShET2(Shigellaenterotoxin2)进行基因分型,提高菌痢爆发流行时同源克隆的鉴定分析水平。方法对93株分离自不同地区,不同时间的福氏2a志贺菌用PCR法检测志贺菌肠毒素ShET1/ShET2基因,进行基因分型和同源克隆鉴定。结果93株福氏2a志贺菌按志贺菌肠毒素ShET1/ShET2基因可分为4种基因型,即12株ShET1(-)/ShET2(+),14株ShET1(+)/ShET2(-),59株ShET1(+)/ShET2(+),8株ShET1(-)/ShET2(-)。93株福氏2a志贺菌ShET1检出率为89.24%(83/93),ShET2为65.59%(61/93)。二者至少有一种基因被检出的检出率为91.39%(85/93)。结论福氏2a志贺菌的快速诊断可应用ShET1、ShET2双基因PCR检测,具有较高的敏感性与特异性。在应用多生物学标志进行福氏2a志贺菌同源克隆鉴定系统研究时,肠毒素ShET1/ShET2基因PCR分析是不可或缺的分析指标。

魏氏梭菌肠毒素研究进展

魏氏梭菌是一种重要的人兽共患病的病原体 ,可引起人的食物中毒和抗生素相关性腹泻 (非食源性胃肠道疾病 ) ,肠毒素是该菌的一个非常重要的致病毒素 ,在引起人的胃肠疾病方面起着关键性的作用 ,作者针对魏氏梭菌肠毒素的生物学特性及分子生物学等方面的研究内容进行论述。

金葡菌肠毒素SEC2的抗体制备及应用

生产厂家以金葡菌肠毒素C2(SEC2)的标示量作为金葡素注射液的质量控制标准,但其真正的含量由于滤液成分复杂而很难检测,本实验试图建立一种方便的鉴定金葡素注射液中的SEC2的方法。首先将重组的SEC2分别免疫BALB/c小鼠和新西兰兔,制备并纯化了单克隆及多克隆抗体。采用自制的抗体建立了检测SEC2的生物素-链霉亲和素酶联免疫吸附实验,检测目标蛋白的质量浓度范围为2～20ng.mL-1,在检测范围内检测值的平均变异系数为5.08%,采用本法检测质量浓度分别为100ng.mL-1的重组肠毒素(SEA/SEO/SEM/SEN/SEG/SEI),均呈现阴性反应,说明此检测方法的专一性较好。采用此方法对金葡素注射液中的SEC2含量进行了检测,发现SEC2标识量与实际含量存在一定的差距。

福氏2a志贺菌肠毒素ShET1/ShET2基因分型在同源克隆鉴定系统中的应用

目的 对福氏 2a志贺菌肠毒素ShET1和肠毒素ShET2进行基因分型 ,提高福氏 2a志贺菌同源克隆鉴定系统的分析水平。方法 综合运用质粒DNA分析、16srRNA基因探针分析及随机PCR分析方法对 93株分离自不同地区 ,不同时间的福氏 2a志贺菌进行多生物学标志分型 ,同时引入志贺菌肠毒素ShET1/ShET2基因PCR分析法检测福氏 2a志贺菌。结果 质粒DNA分析、RAPD分析、16srRNA基因探针分析三种方法联合运用 ,可将 93株S flexneri 2a分成 19个克隆群 ,克隆分辨率为 2 0 4 3% (19/ 93) ,引入毒素ShET1/ShET2基因PCR分析 ,可新增加 8个克隆群 ,克隆分辨率为 2 9 0 3% (2 7/ 93) ,克隆分辨率提高 8 6 0 % (8/ 93)。 93株福氏 2a志贺菌按志贺菌肠毒素分为 4种基因型 ,即 12株ShET1(- ) /ShET2 (+) ,14株ShET1(+) /ShET2 (- ) ,5 9株ShET1(+) /ShET2 (+) ,8株ShET1(- ) /ShET2 (- )。结论 在应用多生物学标志进行福氏 2a志贺菌同源克隆鉴定系统研究时 ,肠毒素ShET1/ShET2基因PCR分析是不可或缺的分析指标。

一种快速分离纯化金葡萄球菌肠毒素C_2的方法

目的建立一种简单快捷的方法,用来从金黄色葡萄球菌的发酵液(以下简称金葡液)中纯化分离肠毒素C2(staphylococcal enterotoxin C2,SEC2)。方法金葡液首先经超滤浓缩,之后再分别经阳离子交换层析和阴离子交换层析进行选择性分离SEC2,用SDS-PAGE电泳、HPLC法检测纯度及相对分子质量,飞行质谱测定精确分子质量,对其进行N-端氨基酸序列分析。结果分离得到的SEC2电泳纯及色谱分析纯度均达到质量分数98%以上,经各项理化指标检测均与文献一致,在等电点上表现出微不均匀性,等电点pI为7.49和6.74,该蛋白的分子质量为27.58 ku,N-端氨基酸序列分析与文献报道的SEC2序列一致(ESQPDPTPDELHKSS),最大吸收波长为277.5 nm。结论用该方法得到的SEC2纯度高,回收率质量分数高达50%,适宜于大批量制备SEC2。

含产气荚膜梭菌肠毒素基因重组质粒pET-28a-CPE的构建和表达

目的构建含全长产气荚膜梭菌肠毒素(CPE)基因的重组表达质粒pET-28a-CPE并进行原核表达。方法培养并提取表达肠毒素的产气荚膜梭菌标准菌株64615的基因组DNA,PCR扩增出全长CPE基因片段并连接入pET-28a载体质粒中,构建重组原核表达质粒pET-28a-CPE,进行酶切及测序鉴定,并转化入感受态大肠杆菌(E.coli)BL21中,用IPTG诱导CPE表达。结果复苏、培养成功产肠毒素的产气荚膜梭菌标准菌株64615,成功构建了表达质粒pET-28a-CPE,经酶切及测序鉴定结果与设计的完全相符,成功用E.coli BL21进行了原核表达,目的蛋白CPE占总表达蛋白45.37%。结论本实验成功构建并表达了含CPE的重组质粒pET-28a-CPE,为进一步观察CPE对前列腺肿瘤等的生物学作用奠定了基础。

金葡菌肠毒素C2的单克隆抗体制备、鉴定及初步应用

目的：制备抗金葡菌肠毒素C2（SEC2）的单克隆抗体（MeAb），并建立SEC2检测方法。方法：以金葡菌培养液中纯化的SEC2为抗原，免疫BALB／c小鼠，制备单克隆抗体；并对单克隆抗体的特性进行鉴定；利用纯化后的抗体建立了夹心ELISA定量检测SEC2方法，并进行了验证和初步应用。结果：筛选出4株稳定分泌抗SEC2抗体的杂交瘤细胞株，其免疫球蛋白亚类均为IgG1，除两株单抗的SEC2识别位点相同外，其余单抗均特异性识别SEC2的不同结合位点。建立的夹心ELISA定量检测法，特异性、灵敏度、重复性均较好，检测SEC2范围为0．5—20ng,／ml，回收率在97．8％-101％，变异系数为2％-5％。结论：本研究制备的抗SEC2的单克隆抗体，可用于建立了SEC2定量检测方法，为控制金葡素制品质量和金葡菌肠毒素研究提供了较实用的方法。

超级抗原金葡菌肠毒素在恶性肿瘤治疗中的作用

抗肿瘤生物疗法因疗效明显且副反应小,越来越受到临床的重视。体外实验证明:人的免疫效应细胞能识别并杀死人肿瘤细胞。恶性肿瘤患者免疫功能普遍低下,抗肿瘤生物疗法通过放大人体的自然防御机制,刺激免疫效应细胞增殖,提高免疫效应细胞对肿瘤靶细胞的细胞毒作用,增强单核细胞对抗原识别能力,调节肿瘤细胞的肿瘤相关抗原表达等强化人体免疫系统而使肿瘤退缩,达到治疗肿瘤的目的。

金葡菌肠毒素B对哮喘豚鼠高迁移率族蛋白B1表达的影响及意义

目的:探讨金葡菌肠毒素B(staphylococcal enterotoxin B,SEB)对支气管哮喘豚鼠模型支气管肺泡液高迁移率族蛋白B1(high mobility group protein B1,HMGB1)及Th1/Th2细胞因子水平的影响。方法:18只豚鼠随机分为对照组6只、支气管哮喘豚鼠模型组6只和SEB组6只,模型组用卵白蛋白(ovalbumin,OVA)建立豚鼠哮喘模型,SEB组在OVA致敏前10 d于腹腔注射SEB 1 ml(10 mg/L),对照组注射等量生理盐水。支气管哮喘诱发后2 d,收集支气管肺泡灌洗液进行白细胞和嗜酸性粒细胞计数,WB法测定HMGB1水平,ELISA法检测细胞因子IFN-γ和IL-4水平。结果:模型组肺泡灌洗液白细胞数、嗜酸性粒细胞数及比例、HMGB1水平和IL-4浓度显著升高,IFN-γ浓度显著降低。SEB组白细胞数、嗜酸性粒细胞数量及比例、HMGB1水平和IL-4浓度显著低于模型组,IFN-γ浓度高于模型组。结论:SEB能减少哮喘豚鼠支气管肺泡灌洗液中HMGB1水平及嗜酸性粒细胞数量及比例,其机制可能与Th1/Th2细胞因子比值调节有关。

魏氏梭菌肠毒素的生物学及结构特性

魏氏梭菌肠毒素的生物学及结构特性王云峰，王翠兰，王西川（中国农业科学院哈尔滨兽医研究所）Ａ型魏氏梭菌病是由魏氏梭菌（Ｃｉｏ，ｔｒｉｉｄｉ。ｍ。ｗｅｌｃｈ）。）及其毒素引起的，种暴发性、死亡跨很高的胃肠道疾病，业已证明，魏氏梭菌所产生的肠毒素是导致腹泻...

产气荚膜梭菌肠毒素肽段与Claudin4特异性结合对哺乳动物表皮屏障通透性的调控

目的 :探讨产气荚膜梭菌肠毒素肽段(Clostridium perfringens enterotoxin,c CPE194-319)对哺乳动物表皮屏障通透性的影响。方法:首先利用SWISS-MODEL软件模拟分析了c CPE194-319与Claudin4(Cldn4)结合的结构模型,然后通过细胞免疫荧光染色法和跨内皮细胞电阻法(trans-epithelial electrical resistance,TEER)检测c CPE194-319对人源永生化表皮细胞Ha Ca T膜蛋白Cldn4表达定位的影响和细胞层紧密性的影响,最后在小鼠中利用葡聚糖-罗丹明荧光素扩散法观察经c CPE194-319处理后的小鼠表皮的荧光素渗透变化情况。结果:c CPE194-319可与Ha Ca T细胞中Cldn4蛋白特异性结合,随着作用时间的增加,c CPE194-319结合Cldn4蛋白后形成复合体从Ha Ca T细胞膜上向细胞质中转移,TEER值降低;当洗脱c CPE194-319后,新合成的Cldn4蛋白可重新定位到细胞膜上,TEER值升高。小鼠体内实验表明,c CPE194-319处理后的小鼠表皮渗透性增强。结论:c CPE194-319能够通过与Cldn4蛋白的特异性结合,从而调控哺乳动物表皮屏障的通透性。

霍乱毒素和大肠埃希菌肠毒素的免疫调节作用

一般都知霍乱毒素和产毒性大肠埃希菌(大肠杆菌)不耐热肠毒素具有很强的免疫原性,这些细菌肠毒素的B亚单位尚有促进免疫耐受性的免疫调节作用。现综述这些有关分子调节白细胞群体的机制。

食品中金黄色葡萄球菌肠毒素分子检测方法研究进展

金黄色葡萄球菌肠毒素是引起金黄色葡萄球菌食物中毒的主要原因,其检测方法包括动物实验法和基于分子检测的酶联免疫法、PCR方法等。本文概述了金黄色葡萄球菌肠毒素的分子检测方法的研究进展。

金葡菌肠毒素B在烧伤脓毒症大鼠中的分布特点及意义

目的 探讨金葡菌肠毒素在烧伤后G+菌脓毒症发生、发展过程中的意义。 方法 采用大鼠 2 0 %TBSAⅢ度烫伤复合金葡菌攻击造成脓毒症模型 ,观察金葡菌肠毒素B(SEB)在动物血浆及心、肝、肺、肾等重要器官中的分布 ,同时动态检测相关器官功能指标的改变。 结果 烫伤脓毒症早期 ,动物血浆中SEB含量呈一过性升高 (P <0 .0 1) ,继而逐渐下降。心、肝、肺、肾等组织中SEB含量于金葡菌攻击后 2h即明显升高 (P <0 .0 1) ,且持续上升。烫伤后 2 4h动物多器官功能明显受损 ,金葡菌的攻击可进一步加重多脏器功能损害 ,且肝、肾等器官损害程度与组织SEB含量呈显著正相关 (P <0 .0 5～ 0 .0 1)。