高虫草素含量蛹虫草菌的复合诱变选育研究

蛹虫草菌是冬虫夏草的近缘种,简称蛹草,不仅含有种类齐全、含量比例适宜的人体必需氨基酸,还含有大量腺苷、虫草素、腺嘌呤,是食药两用的虫草属真菌。其中,虫草素具有抗菌消炎、抗病毒、抗肿瘤、抗癌等功效,是蛹草中重要的活性成分。不同蛹草菌产虫草素能力不同,本文采用LiCl、60Coγ复合诱变,对1株蛹草菌原始菌株进行诱变,考察了LiCl不同质量浓度、60Coγ射线不同辐照剂量对诱变菌株致死率、突变率的影响,并用高效液相色谱法对筛选出的稳定突变体发酵液中的虫草素含量进行测定,筛选出高产虫草素突变体1株,虫草素含量达2.64mg/mL,为蛹虫草菌的进一步改良提供了一定的参考依据。

蛹虫草菌糠对黄粉虫生长发育的影响

以麦麸、玉米面、蛹虫草菌糠为原料,配制成7种不同比例的饲料饲养黄粉虫,观察黄粉虫的生长发育情况并测定其各项经济指标(幼虫体长、体重、头宽、蛹重、化蛹率、蛹历期、幼虫及蛹的死亡率、孵化率、幼虫历期、羽化率)的影响。结果表明:不同处理的蛹虫草菌糠对黄粉虫的体重、头宽、蛹重、化蛹率、幼虫历期有极显著影响,但对体长、蛹历期、幼虫死亡率、孵化率、羽化率无显著影响;饲料中添加30%的蛹虫草菌糠对黄粉虫头宽、蛹重、化蛹率、孵化率、羽化率、死亡率等指标影响效果显著。

蛹虫草菌皮中虫草素的提取纯化工艺研究

目的:优化从蛹虫草菌皮中提取、纯化虫草素方法并鉴定其纯度。方法:以虫草素提取量为指标,优化虫草素提取工艺;以虫草素的吸附与解吸特性为指标,筛选不同树脂;采用结晶法成功的获得虫草素晶体并对其纯度进行鉴定。结果:用15倍药材重量的体积分数为70%的乙醇提取3次,每次1h为最佳提取条件;D001大孔强酸离子交换树脂吸附量、吸附率最高,直接洗脱后纯度可以达到80%左右,适合虫草素的纯化;重复结晶得到虫草素晶体纯度达98%以上。结论:该方法简单,分离的虫草素纯度高,是一种可行的虫草素提取方法,有利于蛹虫草综合开发利用和虫草素大规模的工厂生产。

蓝光诱导蛹虫草菌丝类胡萝卜素的积累

蛹虫草(CordycepsmilitarisL·)在培养时受蓝光诱导,其菌丝体中有高产量的类胡萝卜素积累。当温度为25℃且蓝光光照强度为6·5μmol·m-2·S-1时,菌丝体的类胡萝卜素含量在含蚕蛹粉的培养基上24h达到最高峰的495·5μg/gFW;而在不含蚕蛹粉的培养基上72h才达最高峰414·1μg/gFW。蛹虫草菌丝类胡萝卜素的积累也受蓝光光照强度的影响,最适光照强度可随培养时间的不同而有所变化。此外,黑暗培养时间的长短和温度也可共同影响蛹虫草菌丝产类胡萝卜素时对蓝光的敏感性。

利用蛹虫草菌培养基生产保健酱油的研究

实验以蛹虫草菌培养基、豆粕、麸皮为主要原料生产酱油,在对制曲、制醅、发酵淋油等工艺研究的基础上,通过大量实验确定了食用菌保健酱油制作的最佳工艺,生产出了一种富含蛹虫草菌保健成分并有浓厚蛹虫草菌香味的保健酱油。实验得出最佳配料比为:豆粕50g,麸皮20g,面粉10g,水80mL,蛹虫草菌培养基30g。

蛹虫草菌胞外多糖发酵及其发酵动力学

对蛹虫草菌（ Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ ｍｉｌｉｔａｒｉｓ） 胞外多糖（ Ｅ Ｐ Ｓ） 的发酵过程和发酵动力学进行了研究。基于 Ｌｏｇｉｔｉｃ 方程和 Ｌｕｅｄｅｋｉｎｇ Ｐｉｒｅｔ 方程，得到了描述发酵过程的动力学数学模型和模型参数，同时对实验数据与模型进行了验证比较。模型计算与实验结果拟合良好，模型正确地反应了蛹虫草菌胞外多糖的发酵过程及其动力学机制。

蛹虫草菌保健黄酒的研究

以蛹虫草菌培养基为主要原料,采用喂饭法通过对其总醪加水量的控制、糯米与蛹虫草菌培养基比例以及糖化剂接入量的确定进行研究,生产出风味俱佳的保健黄酒。结果表明,最佳配比方案为:黄酒专用干酵母用量为0.2%,糖化酶用量为10%,总醪加水量为3倍,糯米∶蛹虫草菌培养基1:1。

不同蛹虫草菌株栽培蚕蛹虫草的形态性状及活性成分含量比较

选择5株蛹虫草菌株感染家蚕5龄第3天幼虫生产蚕蛹虫草,通过观察检测蚕蛹虫草的形态性状及采用反相高效液相色谱(RP-HPLC)法测定虫草素和腺苷的含量,为筛选高产优质蛹虫草菌株提供依据。不同菌株栽培生产的蚕蛹虫草的外观形状、生长状况以及活性成分含量均有明显差异:1-Y菌株栽培的蚕蛹虫草整体形状较接近于野生的冬虫夏草,MS菌株栽培的蚕蛹虫草子座形状较佳,17-3菌株栽培的蚕蛹虫草僵虫体形状较佳;1-1菌株栽培的蚕蛹虫草总质量和僵虫体质量均最高,干质量分别达到1.460 g和1.170 g;MS菌株栽培的蚕蛹虫草子座总数量、子座总长度及子座质量占虫草总质量的比率等指标均极显著高于其他菌株(P<0.01),分别达15.100根、44.877 cm和41.357%;1-Y菌株栽培的蚕蛹虫草整体所含虫草素最高,达8.92 mg/g,MS菌株栽培的蚕蛹虫草整体所含腺苷最高,达2.22 mg/g,并且5株供试菌株栽培的蚕蛹虫草僵虫体中的虫草素含量均高于子座,而子座中的腺苷含量均高于僵虫体。研究结果表明,蛹虫草菌株是影响人工栽培蚕蛹虫草形态性状及活性成分含量的重要因素,初步认为1-Y菌株和MS菌株具有较高的生产应用价值。

蛹虫草菌发酵五味子药渣菌质的免疫活性

为了研究蛹虫草菌发酵五味子药渣菌质的免疫活性,选择28日龄＂杜×长×大＂断奶仔猪90头,随机分为空白对照组（基础日粮）、阳性对照组（基础日粮添加0.5%的五味子）和实验组（基础日粮添加0.2%的蛹虫草菌发酵五味子药渣菌质）,每组3个重复。实验期21d。每周从每个重复中随机选取1头,流式细胞仪检测脾脏T淋巴细胞亚群分类,CCK-8法检测脾脏淋巴细胞增殖活性,ELISA检测血清中IgA、IgG和IgM含量。结果表明：阳性对照和实验组脾脏CD3＋、CD3＋CD4＋百分率,CD4＋/CD8＋比值在1~3周均高于空白对照组（p〈0.05或p〈0.01）;脾脏淋巴细胞增殖指数显著提高（p〈0.01）,血清免疫球蛋白IgA、IgG和IgM含量升高。实验表明：五味子药渣经蛹虫草菌发酵后能提高仔猪的免疫功能。

蛹虫草菌的液态培养基优化

采用响应面法优化蛹虫草菌的液态培养基,以获得最大菌体量为响应值,采用Plackett-Burman试验筛选出主要影响因素为葡萄糖、蛋白胨、七水硫酸镁。再利用最陡爬坡试验确定响应区域的中心点。最后利用中心复合试验确定最优的培养基配方为葡萄糖53.363 6g/L,蛋白胨26.720g/L,七水硫酸镁2.195 2g/L,磷酸二氢钾0.5g/L。蛹虫草菌的最终菌体总干重为3.91g/L,比优化前增加了2.48倍。

蛹虫草(Cordyceps militaris)菌丝体液体培养基的优化和发酵条件的研究

采用二次回归通用旋转组合设计方法，对蛹虫草菌丝体液体发酵培养基的最佳组合进行了研究，建立了培养基的反应模型，并用实验数据验证了数学模型，对培养基最佳优化组合的各种因子、影响产量的反应规律及交互作用进行了探讨，并在此基础上进行了蛹虫草菌丝体液体发酵条件的研究。结果表明，蛹虫草菌丝体液体发酵的最适条件为：接种量６％（ｖ／ｖ），发酵初始ｐＨ７．０，培养基装量１００ｍｌ／５００ｍｌ三角瓶，发酵温度２４℃～２８℃，发酵周期９６ｈ。

蛹虫草菌产生的胞外多糖及其理化性能和抗氧化活性的初步研究

蛹虫草菌Cordycepsmilitaris在液体发酵条件下可产生胞外多糖，其粗多糖的蛋白含量在14．31％左右，氨基酸含量为13．8％，共有17种氨基酸，水分5％左右，多糖含量大约占80％。蛹虫草菌胞外多糖具有良好的增稠性、触变性、抗盐耐热和对广泛pH的稳定性能。蠕虫草菌丝体及其胞外多糖具有一定的抗氧化活性，在60℃的促进氧化条件下放置7天，0．05％含量的菌丝体及其胞外多糖降低油脂氧化率分别达到18．8％和19．8％。

蛹虫草菌胞外多糖发酵工艺优化

通过碳氮源的单因子筛选和正交试验，对蛹虫草菌（Ｃ．ｍｉｌｉｔａｒｉｓ）胞外多糖（ＥＰＳ）的发酵培养基和发酵条件进行了优化，使其胞外多糖产量由３．２ｇ／Ｌ提高到５．４ｇ／Ｌ，与初始发酵工艺条件相比多糖产量提高了６８．７５％，发酵周期由１２０ｈ缩短到９６ｈ．胞外多糖发酵的最适碳源为甜菜糖，最适氮源为ＫＮＯ３．正交试验的方差分析结果表明，影响胞外多糖产量的显著性因子是甜菜糖和酵母浸出粉，培养基中各成份的显著性排列顺序为：甜菜糖＞酵母粉＞ＫＮＯ３＞ＭｇＳＯ４·７Ｈ２Ｏ＞ＦｅＳＯ４＞Ｋ２ＨＰＯ４．

响应面法优化蛹虫草菌固体发酵五味子药渣发酵条件

将五味子药渣用作蛹虫草菌发酵培养基且不添加其他任何营养物质,并以水料比、基质重量、接种量、发酵温度为考察因子,在单因素实验基础上,结合响应面法以发酵产物中虫草素含量为响应值对发酵条件进行优化。响应面法分析得出蛹虫草菌发酵五味子药渣最佳条件:水料比为2mL/g,基质重量为37g,接种量为23%,发酵温度为26℃。在此条件下发酵15d,发酵产物中虫草素含量高达5.1202mg/g;多糖含量为2.87%,相比发酵前五味子药渣中多糖含量提高了24.97%。结果说明,以五味子药渣作为蛹虫草菌发酵培养基,不仅可以提高五味子药渣的利用价值,而且可以降低发酵蛹虫草菌生产虫草素的成本。

蛹虫草菌丝体降血脂作用的动物试验研究

目的 了解人工培育的蛹虫草菌丝体降血脂效果。方法以 12 5 0、2 5 0 0、5 0 0 0mg kgBW剂量的蛹虫草菌丝体粉连续给大鼠灌胃 2 8d ,并于第 15天及第 2 9天采血测定TC、TG及HDL -C含量。结果 受试样品组大鼠血清的TC、TG含量低于模型对照组 ,而其HDL -C含量高于模型对照组。

蛹虫草菌粉胶囊和金水宝胶囊对照治疗慢性支气管炎

目的:评价蛹虫草菌粉胶囊治疗慢性支气管炎的疗效和安全性。方法:本试验为Ⅱ期临床试验,采用多中心、随机、单盲、阳性药物平行对照法。425例患者分为试验组(n=315)和对照组(n=110),试验组给予蛹虫草菌粉胶囊,对照组给予金水宝胶囊,2药剂量均为1g,tid,疗程2个月。结果:试验组在咳嗽、咳痰、喘息、肺功能、胸部X线征象改善及综合疗效等方面均优干对照组(P<0.01)。试验组血常规、肝功、肾功、心电图等安全耐受性指标无明显变化(P>0.1)。结论:蛹虫草菌粉胶囊是治疗慢性支气管炎安全有效的药物。

蛹虫草菌粉胶囊治疗慢性支气管炎510例

目的:观察蛹虫草菌粉胶囊治疗慢性支气管炎迁延期的疗效与安全性。方法:本试验为Ⅲ期临床试验,随机选取510例慢性支气管炎迁延期的患者,从咳嗽、咳痰、喘息、肺部哮鸣音、肺功能、肺部X线征象等方面观察治疗前后的变化,进行统计学处理,并考察其安全性。结果:治疗后患者的慢支症状及体征均有显著改善(P<0.05);治疗慢性支气管炎迁延期的总有效率为88.04％,显效率为57.26％。结论:蛹虫草菌粉胶囊确为治疗慢性支气管炎迁延期属肺气虚、肾阳虚证候的安全有效的药物。

泰山蛹虫草菌产胞外多糖发酵工艺的研究

目的研究蛹虫草菌产胞外多糖的最佳发酵培养基和发酵条件。方法采用干重法测定菌丝生物量。采用硫酸-苯酚法测定多糖含量。结果蛹虫草产胞外多糖最佳发酵培养基组成为:蔗糖6%,硝酸钾0.2%,酵母膏2%,MgSO4.7H2O 0.02%,K2HPO40.04%,FeSO4.7H2O 0.002%;优化发酵培养条件为:接种量6%,初始pH7.0,温度24℃。结论在优化的培养基组成和发酵条件下,蛹虫草胞外多糖产量为4.84 g/L,菌丝体干重为21.12g/L。

蛹虫草菌发酵五味子药渣成分变化及其对断奶仔猪血液指标的影响

为了研究蛹虫草菌发酵五味子药渣前后成分的变化及其对断奶仔猪血液指标的影响,试验选取24头28日龄"杜×长×大"断奶杂交猪,随机分成空白对照组(饲喂基础日粮)和试验组(饲喂基础日粮+2‰发酵药渣菌质),试验期为21 d。结果表明:与发酵前比较,发酵后的五味子药渣菌质粗蛋白与粗脂肪含量分别提高8.02%(P>0.05)与5.94%(P>0.05),粗纤维含量下降13.45%(P<0.01)。与空白对照组比较,试验组仔猪血清中谷草转氨酶(AST)含量下降10.81%(P<0.05),尿素氮含量(BUN)降低7.52%(P>0.05),碱性磷酸激酶含量(ALP)提高15.50%(P>0.05),白蛋白含量(ALB)和白球比(A/G)分别提高1.03%(P>0.05)、8.72%(P>0.05),免疫球蛋白IgG提高2.89%(P>0.05),IgA提高7.69%(P<0.05)。说明通过蛹虫草菌发酵能降低五味子药渣粗纤维含量,提高粗蛋白、粗脂肪含量;在日粮中添加蛹虫草菌发酵五味子药渣菌质能改善仔猪血液指标,提高免疫球蛋白含量。

蛹虫草白化菌株生物学特性及其子实体成分分析

对在栽培蛹虫草（Cordyceps militaris）B6过程中发现的白化菌株AB6的部分生物学特性和所获得的子实体成分进行研究。结果表明,AB6在光照条件下菌丝不变色,其菌丝最佳生长温度为25℃、pH 4.0~6.0。AB6子实体的粗蛋白、粗纤维、水、灰分、总水解氨基酸和粗多糖等成分含量与B6子实体无显著差别;而其灰分和虫草素含量较高,分别为8.29%和12.9 mg/g,均高于退化的白化菌株DAB6和B6的子实体;其黄酮类、虫草酸和腺苷,分别为0.22%、14.8 mg/g和1.16 mg/g,比B6子实体低。