菜用大黄染色体制片优化及核型分析

以菜用大黄根尖为材料,探讨不同取材时间、预处理溶液、解离时间对菜用大黄根尖染色体制片的影响,并对2个菜用大黄品种RAMB和RO进行了核型分析,以期为菜用大黄的起源、演化及遗传育种提供一定理论依据。结果表明,在上午8:00取材,用冰水混合物预处理24 h,然后在60℃条件下用1 mol/L HCl解离15 min,最后用改良石碳酸品红染色3～5 min,此时染色体制片效果最佳;RAMB和RO的染色体数目均为2n=44,其核型公式分别为2n=4x=44=36m+8sm和2n=4x=44=32m+12sm,核型均为1B型,核型不对称系数分别为57.46%和58.60%,核型对称程度均较高,这表明菜用大黄在进化中处于比较原始类型。

开瓶炼苗对菜用大黄组培苗气孔特性的影响

研究了菜用大黄组培苗开瓶炼苗过程中叶片气孔的特性。结果表明，菜用大黄组培苗经直接开瓶炼苗0～14d，气孔大小、气孔长径、气孔宽径随开瓶炼苗时间的延长而逐渐减小，并趋向稳定；气孔的关闭率随开瓶时间的延长而迅速增加，达到76．5％；14d炼苗结束后，叶表皮细胞密度显著增加，气孔密度与气孔指数稍有增加，但不显著。闭瓶炼苗7d、然后开瓶炼苗7d可以较快恢复菜用大黄组培苗叶片气孔关闭的适应能力；显微观察发现，不同开瓶时间处理对叶片表皮气孔的细胞结构有明显影响，有光环境与无光环境对炼苗最终没有显著影响。

菜用大黄SRAP-PCR反应体系的优化及验证

为建立菜用大黄最佳的SRAP反应体系,进一步对菜用大黄品种进行遗传多样性分析,以菜用大黄基因组DNA为模板,采用单因素与正交设计相结合的方法,对SRAP-PCR扩增体系中的模板DNA、Mg2+、dNTPs、引物和Taq DNA聚合酶浓度5个因素进行优化,并确立菜用大黄SRAP-PCR的最佳体系。结果表明:菜用大黄各因素对反应体系影响大小依次为:引物浓度>Mg2+浓度>dNTPs浓度>Taq DNA聚合酶浓度>DNA用量;最佳反应体系为:25μL反应体系中含10×PCR Buffer 2.50μL、模板DNA 30 ng、Mg2+2.50 mmol/L、dNTPs 0.25 mmol/L、Taq DNA聚合酶0.04 U/μL、上下游引物各0.5μmol/L。用8个菜用大黄品种DNA样品对优化的反应体系进行验证,均获得了条带清晰且多态性较好的扩增图谱,证实了该体系的稳定性和可靠性,可用于菜用大黄的遗传多样性分析。

不同激素对菜用大黄茎尖离体再生的影响研究

以菜用大黄无菌苗的茎尖为外植体,探讨了不同激素对菜用大黄茎尖离体再生能力的影响。结果显示,不同激素对菜用大黄不定芽再生有显著影响。6-BA对菜用大黄茎尖增殖的效果优于KT,MS+6-BA1.0mg/L+NAA1.0mg/L培养基可获得最大增殖系数(3.1);新生不定芽经生根培养后可获得完整植株,而1/2MS+NAA0.5mg/L的生根培养基生根率高达92.6%。再生植株经驯化炼苗后,可获得75%的移栽成活率。

菜用大黄的研究进展

菜用大黄是一种特色保健蔬菜,以营养价值高、保健功能强、风味独特而被誉为"新兴特色蔬菜,"具有广阔的开发利用前景。从起源、分类、繁殖、营养价值与经济效益等方面综述了菜用大黄的国内外研究现状,并讨论了菜用大黄的开发利用前景。

生根基质对菜用大黄组培苗生根及移栽成活率的影响

对在河沙、蛭石、海绵和琼脂4种不同生根基质上生根的菜用大黄组培苗进行形态指标和生理指标观察研究,发现不同基质对不定芽生根及生根植株移栽成活率有很大影响,同时组培苗的形态指标和生理指标也有显著性差异。其中,以河沙为生根基质获得的植株较小,根系活力、干湿重比、叶片叶绿素含量最高,获得的小植株移栽成活率也最高,成活率达79.4%;在琼脂和海绵上栽培的植株较大,根系活力、干湿重比、叶片叶绿素含量较低,成活率也较低(琼脂仅25.9%)。成活率与叶绿素含量、干湿重比、根系活力呈正相关,与苗高增量、平均根长、平均根数没有显著的相关性。

铅处理对菜用大黄种子萌发和幼苗生长的影响

以菜用大黄为试验材料,研究不同浓度的铅溶液(0、50、150、300、600、1 200 mg/L)对菜用大黄种子萌发和幼苗生长的影响。结果表明,Pb^(2+)浓度为0~300 mg/L时对菜用大黄种子发芽指标影响不大,随着Pb^(2+)浓度的升高出现一定的抑制作用,表明菜用大黄种子萌发对铅有一定耐性。幼苗形态指标在Pb^(2+)浓度为0~50 mg/L时最高,当浓度大于50 mg/L时各项指标均表现为下降趋势;幼苗可溶性蛋白含量、过氧化氢酶(CAT)活性随着Pb^(2+)浓度的升高呈现波动变化的趋势,丙二醛(MDA)含量整体呈现升高的趋势。

菜用大黄组培苗生根特性研究

对菜用大黄组培苗不同生根培养阶段的形态指标和生理指标进行了观察研究,发现生根是伴随愈伤组织的形成而产生的,愈伤组织分化和生根过程符合Logistic累计曲线方程模型。菜用大黄组培苗生根培养在12 d时生根率达到100%,14 d以后根数不再增加,14 d开始炼苗移栽最为合适,成活率为90%,且根长与外植体生长程度比较适中。叶片总叶绿素含量、叶绿素a/b值和组培苗干湿重比在7 d后的变化没有明显差异,叶绿素总含量与组培苗干湿重比与组培苗的驯化移栽成活率呈正相关,叶绿素a/b值与组培苗的驯化移栽成活率呈负相关。根数、根长、苗高、叶数和掉根率与组培苗的驯化移栽成活率之间并没有显著的直接关系。

菜用大黄种子吸水特性及种皮显微结构比较研究

对菜用大黄3个品种种子的吸水过程、发芽特性以及种子表皮的显微结构进行观察研究。结果表明，莱用大黄种子在12h内吸水饱和，其吸水量为种子重量的0．79—1．1倍；种子在滤纸上总平均发芽率为88．8％，能反应出种子的发芽特性，但不同品种间种子萌发率有显著差异，其中Oflicinal品种发芽率最高（96．3％），Guards man品种的发芽率最低（80．1％）；显微观察显示，3个品种种子的种皮细胞结构、细胞的形状及大小都有很大差异。

不同NaCl浓度对菜用大黄种子萌发与幼苗生长的影响

以菜用大黄种子为试材,根据国际标准采用纸培法,在培养箱(25±1)℃条件下分析0(CK)、50 mmol/L(A1)、100 mmol/L(A2)、150 mmol/L(A3)、200 mmol/L(A4)、250 mmol/L(A5)等6个NaCl溶液浓度梯度处理对菜用大黄种子的电导率、发芽率、发芽势、幼苗茎粗、茎高、鲜质量以及幼苗叶片中叶绿素含量和丙二醛含量的影响。结果表明,当NaCl溶液浓度为100 mmol/L时,菜用大黄种子的发芽率、发芽势最高,说明菜用大黄种子有一定的耐盐特性;随着NaCl浓度的升高,菜用大黄种子的电导率、发芽率、发芽势、幼苗茎粗、茎高、幼苗叶片鲜质量、叶绿素含量和丙二醛含量分别呈不同的变化趋势。

渗透胁迫对菜用大黄组培苗生长及生理特性的影响

以菜用大黄(Rheum rhaponticum L.)组培苗为材料,比较不同浓度的聚乙二醇PEG6000(分别为0、10、30、50、70 g/L)对其生长和生理特性的影响,主要测定了生长势、形态指标(苗高、鲜重)、生理指标(可溶性蛋白、脯氨酸、丙二醛含量及过氧化氢酶、过氧化物酶活性)的变化。结果表明,随着聚乙二醇浓度增加和培养时间的延长,菜用大黄组培苗出现萎蔫、玻璃化等现象;苗高和鲜重逐渐降低;可溶性蛋白含量先升后降,脯氨酸含量急速增长后缓慢下降,丙二醛含量、过氧化物酶和过氧化氢酶活性不断上升。说明菜用大黄对适度的聚乙二醇渗透胁迫有一定的抗性,但高浓度聚乙二醇胁迫会对其造成严重伤害。

Zn2+对菜用大黄种子萌发和幼苗生长的影响

为了科学种植菜用大黄,以菜用大黄种子为试验材料,研究不同Zn2+浓度(0、20、50、100、150、200、300、500、700mg·L-1)对菜用大黄种子萌发及幼苗生长的影响。结果表明:菜用大黄种子的发芽指标随着Zn2+浓度的增加表现为先升高后降低的趋势。发芽势、发芽率、发芽指数都是在Zn2+浓度为100mg·L-1时达到最大,电导率则在Zn2+浓度为100mg·L-1时最低,幼苗根长、茎长和叶绿素的含量都随着Zn2+浓度的增加而逐渐降低。研究表明,适量的锌虽然能促进种子的萌发,但是幼苗的根长、茎长和叶绿素含量将受到不同程度的影响。

开花对菜用大黄植株生长的影响

观察了菜用大黄移栽后,开花对植株形态特性的影响.结果显示,开花使植株来年春季根茎不定芽平均数增加了8.5倍,叶片数增加5倍.开花也使植株当年不定芽数和叶片数比开花前和未开花植株分别增加4倍和3倍.另外,开花对植株生长有明显的抑制作用,单株花枝数量与植株叶冠直径呈显著负相关关系.

菜用大黄组培苗不定芽增殖能力比较研究

以5个欧洲菜用大黄品种‘RT’、‘RO’、‘RV’、‘R5’和‘R19’种子为试材,以组培苗茎尖为外植体,在MS+1.0mg/L NAA+1.0mg/L 6-BA+5.3g/L琼脂+30g/L蔗糖培养基上进行连续24d的离体培养,研究不同欧洲菜用大黄品种组培苗不定芽增殖能力差异。结果表明:5个品种的不定芽再生方式可以分为基部愈伤组织萌发再生不定芽和腋芽萌发再生不定芽。各品种间不定芽再生能力差异显著,‘RT’的再生不定芽增殖速度最快,增殖系数最大,为3.71,‘R19’的再生不定芽增殖速度最慢,增殖系数最小,为1.96;根据各品种增殖系数连续变化曲线得出,菜用大黄合理的继代周期为24d。

不同培养条件对菜用大黄组培苗玻璃化的影响

为预防菜用大黄玻璃化苗的产生、提高组培苗的培养质量,以菜用大黄丛生芽为外植体,以1/2 MS为基本培养基,研究了蔗糖、琼脂、6-BA对菜用大黄组培苗玻璃化现象的影响,同时测定了玻璃化苗与正常苗的生理指标差异。结果表明:适于菜用大黄组培苗最大增殖及玻璃化率最小的培养基组合是添加30g·L^(-1)蔗糖+6g·L^(-1)琼脂+1.0mg·L^(-1) 6-BA+1.0mg·L^(-1) NAA的1/2 MS培养基;正常苗的可溶性糖和可溶性蛋白含量明显高于玻璃化苗,而玻璃化苗的组织含水量比正常苗的略高。

45份菜用大黄的SRAP标记引物筛选及亲缘关系分析

以45份引种的菜用大黄遗传背景未知为出发点,利用已报道的相关序列扩增多态性(sequence-related amplified polymorphism,简称SRAP)引物,对这些引种材料进行遗传多样性分析,旨在阐明这些材料的亲缘关系。结果表明:在选用的182对引物组合中有42对引物扩增产物稳定、条带清晰、多态性较好,可以用作菜用大黄遗传多样性分析;利用42对引物对45份材料扩增后共获得230个等位基因位点,其中多态性位点202个,平均多态性位点比例达到87.8%。基于非加权组平均法(unweighted pair-group method with arithmetic means,简称UPGMA)的聚类分析结果表明:45份菜用大黄材料聚为7类,虽然来源地相同的大部分种群可以聚在同一个类群内,但种群间存在遗传交叉现象,揭示了种群间的亲缘关系,为这些引入材料的进一步利用提供了参考。