菠萝凋萎相关病毒-1实时荧光定量RT-PCR检测体系的建立与应用

菠萝凋萎相关病毒-1(Pineapple mealybug wilt associated virus-1,PMWaV-1)是田间检出率最高的菠萝凋萎病毒。本研究根据PMWaV-1CP基因保守序列设计特异性TaqMan探针和引物,建立并优化了PMWaV-1实时荧光定量RT-PCR检测方法。优化后的反应体系制备的标准曲线为y=-3.307×log x+38.18,相关系数r2为0.998。试验结果表明,该方法能特异性地检测PMWaV-1,对PMWaV-2、3和阴性对照均无反应;最低检测限达到40拷贝。重复性试验表明批内和批间变异系数均小于1.98%,是一种操作简便、特异性强、灵敏度高、重复性较好的PMWaV-1定量检测方法。样品检测结果表明PMWaV-1在菠萝植株老叶、嫩叶和吸芽中的病毒含量呈递减趋势。

菠萝凋萎相关病毒-3实时荧光定量PCR检测方法的建立

【目的】建立菠萝凋萎相关病毒-3实时荧光定量PCR检测方法。【方法】根据PMWa V-3外壳蛋白基因的保守区域设计特异性引物和探针,通过优化PMWa V-3实时荧光定量PCR检测体系,构建以重组质粒为标准品的标准曲线,建立起PMWa V-3实时荧光定量PCR检测方法。【结果】该方法能特异性地检测PMWa V-3,且灵敏度是普通RTPCR的10倍;该方法重复性良好,组间和组内变异系数均小于1.73。【结论】建立的实时荧光定量PCR方法是一种快速、简便、可信度高的PMWa V-3定量检测方法。

血清HBD-1、CHI3L1水平在乙型肝炎病毒感染相关慢加急性肝衰竭预后预测中的效能

目的探讨血清人β防御素-1(HBD-1)、壳多糖酶3样蛋白1(CHI3L1)水平在乙型肝炎病毒(HBV)感染相关慢加急性肝衰竭(ACLF)疾病进展及预后预测中的效能。方法选取HBV-ACLF患者135例(HBV-ACLF组),另取同期体检健康志愿者60例(对照组),根据HBV-ACLF患者不同疾病分期分为早期组(54例)、中期组(48例)、晚期组(33例),观察28 d疾病转归情况。采用酶联免疫吸附法检测血清HBD-1、CHI3L1水平。多因素Logistic回归分析影响HBV-ACLF患者预后的因素,受试者工作特征(ROC)曲线分析血清HBD-1、CHI3L1水平对HBV-ACLF患者预后的评估价值。结果与对照组比较,HBV-ACLF组血清HBD-1、CHI3L1水平升高(P均<0.05)。早期组、中期组、晚期组血清HBD-1、CHI3L1水平依次升高(P均<0.05)。28 d死亡55例,存活80例,135例HBV-ACLF患者28 d病死率为40.74%(55/135)。与存活者比较,死亡者血清HBD-1、CHI3L1水平升高(P均<0.05)。疾病晚期、肝性脑病和中性粒细胞/淋巴细胞计数比值、Child-Turcotte-Pugh评分、终末期肝病模型评分(MELD)、MELD-血钠评分、HBD-1、CHI3L1升高为HBV-ACLF患者预后的独立危险因素(P均<0.05),白蛋白升高为独立保护因素(P<0.05)。血清HBD-1联合CHI3L1水平评估HBV-ACLF患者预后的曲线下面积为0.886,大于血清HBD-1、CHI3L1水平单独预测的0.779、0.786(P均<0.05)。结论HBV-ACLF患者血清HBD-1、CHI3L1水平升高,与疾病进展和预后不良密切相关,血清HBD-1联合CHI3L1检测预测HBV-ACLF患者预后的价值较高。

外泌体LncRNA SFTA1P和miR-483-3p诊断乙型肝炎病毒相关性肝癌的价值研究

目的分析血浆外泌体长链非编码RNA(LncRNA)SFTA1P和miR-483-3p在乙型肝炎病毒(HBV)相关性肝癌(HCC)的表达水平,评估其诊断价值。方法选择2022年1月—2024年1月本院收治的58例HBV相关性HCC患者作为HCC组;将同期收治的55例HBV患者作为HBV组;另选同期50名体检健康者作为对照组。运用纳米颗粒跟踪分析系统和蛋白质印迹分析鉴定血浆外泌体,并采用RT-qPCR检测外泌体LncRNA SFTA1P和miR-483-3p水平,分析二者水平分别与HCC临床病理特征之间的关系,Pearson法分析LncRNA SFTA1P和miR-483-3p表达水平的相关性,受试者工作特征(ROC)曲线分析LncRNA SFTA1P和miR-483-3p对HCC患者诊断的敏感性和特异性。结果外泌体LncRNA SFTA1P与miR-483-3p表达水平呈负相关(r=-0.7277,P<0.001)。与对照组相比,HBV、HCC组LncRNA SFTA1P水平依次增高,而miR-483-3p水平依次降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。LncRNA SFTA1P、miR-483-3p表达水平与TNM分期,肿瘤分化程度、淋巴结转移、AFP及AST有关(P<0.05),而与年龄、肿瘤大小、ALT、γ-GGT无关(P>0.05)。LncRNA SFTA1P和miR-483-3p单独诊断HCC时的曲线下面积(AUC)分别为0.886、0.851,敏感度分别为86.20%、89.70%,特异度分别为78.00%、70.00%;联合诊断的AUC为0.957,敏感度和特异度分别为94.80%、82.00%。结论血浆外泌体LncRNA SFTA1P和miR-483-3p的联合诊断可提高HBV相关性HCC的诊断率,为其诊断及后续治疗提供新的研究思路。

重组人缺氧诱导因子-1α腺相关病毒载体的构建及表达

目的:构建重组人缺氧诱导因子-1α腺相关病毒载体(rAAV-HIF-1α).并观察其在原代培养海马神经细胞中的表达。方法:构建含人类HIF-1α基因的AAV载体质粒pSNAV-HIF-1α.转染BHK21细胞并选择培养获得的G418抗性细胞,即AAV载体细胞株.以重组单纯疱疹病毒感染此细胞株获得rAAV-HIF-1α,PCR技术鉴定病毒.地高辛标记的CMV探针点杂交方法测定重组病毒滴度.SDS-PAGE电泳测定病毒纯度.Western印迹检测目的蛋白的表达。结果:PCR证实rAAV- HIF-1α内含有人HIF-1α基因序列,病毒滴度为1×10^(12)/ml.纯度大干98%,感染原代培养海马神经细胞后能够表达目的蛋白。结论:成功构建了rAAV-HIF-1α,为进一步应用该基因进行临床基因治疗提供了实验依据。

介导人血红素加氧酶-1基因的重组腺相关病毒载体的构建

目的:构建含人血红素加氧酶-1(hHO-1)基因的重组腺相关病毒(AAV)载体并进行鉴定。方法:利用基因重组技术,采用限制性内切酶HindⅢ从质粒XM-6/hHO-1中将目的基因hHO-1基因片段切出,克隆到质粒PAAV-MCS的HindⅢ位点中,构建重组质粒pAAV-hHO-1,采用限制性内切酶酶切,PCR和DNA测序鉴定。结果:PCR扩增出1 317 bp大小的片段,酶切鉴定证实插入位点及方向与预期的完全一致;测序证实hHO-1与Gene Bank提供的原始序列完全一致。结论:成功构建了含hHO-1基因的重组腺相关病毒载体,为缺血性疾病基因治疗的研究奠定了基础。

死亡相关蛋白激酶1、KLF4、6-氧-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶甲基化状态检测及与宫颈癌人乳头瘤病毒16感染的关系

目的检测宫颈癌组织死亡相关蛋白激酶1(DAPK1)、KLF4、6-氧-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)启动子区域甲基化状态,初步探讨其甲基化状态与宫颈癌人乳头瘤病毒16(HPV16)感染的关系。方法选取宫颈癌患者103例为宫颈癌组,另选取同期年龄相匹配的慢性子宫颈炎患者110例为对照组。检测2组宫颈脱落组织DAPK1、KLF4、MGMT基因甲基化状态。通过人乳头瘤病毒检测HPV16感染情况,分析宫颈癌组织DAPK1、KLF4、MGMT基因甲基化与HPV16感染相关性。结果与对照组相比,宫颈癌组患者HPV16感染阳性率升高,差异有统计学意义(P<0.05);与对照组相比,宫颈癌组DAPK1、KLF4、MGMT基因异常甲基化率升高,差异有统计学意义(P<0.05)。分化程度低、TNM分期Ⅲ~Ⅳ期、有淋巴结转移及有远处转移患者宫颈癌组织DAPK1、KLF4、MGMT甲基化率高于分化程度高、中及TNM分期Ⅰ~Ⅱ、无淋巴结转移、无远处转移患者,差异有统计学意义(P<0.05)。与HPV16感染阴性相比,HPV16感染阳性患者中APK1、KLF4、MGMT甲基化比例升高,差异有统计学意义(P<0.05)。HPV16感染情况与APK1、KLF4、MGMT甲基化相关(r=0.454,0.497,0.307,P<0.05)。结论HPV16感染可能与APK1、KLF4、MGMT甲基化有关,HPV16感染可能通过影响APK1、RAR-β、MGMT基因甲基化促进宫颈癌的发展。

小鼠树突状细胞相关C型凝集素-1基因重组腺病毒载体的构建及鉴定

目的树突状细胞相关C型凝集素-1(dendritic cell-associated C-type lectin-1,Dectin-1)是介导抗真菌天然免疫的重要受体之一。文中旨在构建表达小鼠Dectin-1基因的重组腺病毒载体,扩增、纯化获得高浓度的重组腺病毒。方法将PCR扩增的目的片段CLEC7A-p IRES2-EGFP重组到中间载体p DONR221上,再与腺病毒骨架质粒p AD/CMV/V5-DEST重组,获得重组腺病毒质粒p AD-CLEC7A-p IRES2-EGFP,经Pac I线性化后转染人胚肾293(HEK293)细胞,收获重组腺病毒p AD-CLEC7A-p IRES2-EGFP;利用HEK293细胞大量扩增腺病毒;并进行重组腺病毒的滴度测定;用荧光显微镜和实时荧光定量PCR鉴定转染重组腺病毒组(Dectin-1基因重组腺病毒转染HEK293细胞)和转染空病毒组(空病毒转染HEK293细胞)中Dectin-1基因的表达。结果菌落PCR鉴定、酶切鉴定及测序结果均显示重组腺病毒含有Dectin-1基因,腺病毒滴度为5×1011IU/m L,荧光显微镜下可见绿色荧光,PCR检测到转染重组腺病毒组Dectin-1表达量是转染空病毒组的8677.25倍。结论成功构建并获得了较高浓度的Dectin-1基因重组腺病毒载体,为下一步体内外研究Dectin-1高表达在宿主抗真菌天然免疫中的作用奠定基础。

单免疫球蛋白白介素-1受体相关蛋白基因腺病毒载体构建及其在体内外表达效力检测

目的:构建携带小鼠源性单免疫球蛋白白介素-1受体相关蛋白(mSIGIRR)基因重组腺病毒并对其体内外表达效力进行检测。方法:构建重组穿梭质粒pDC316-mSIGIRR,行酶切、测序鉴定。将穿梭质粒和骨架质粒共转293细胞,包装重组腺病毒Ad.mSIGIRR,行PCR及滴度鉴定。Ad.mSIGIRR感染A549细胞及小鼠肺组织后,通过RT-PCR、Western blot、免疫组化检测mSIGIRR表达情况。结果:扩增得到目的基因片段与Genbank中序列一致,获得表达mSIGIRR蛋白的重组腺病毒。病毒感染滴度为4×109pfu/mL,在体内外感染模型中均有较高表达效力。结论:成功构建携带mSIGIRR基因重组腺病毒,为进一步研究SIGIRR在炎症调控中的作用及分子机制奠定基础。

CTGF和TGF-β_1在乙肝病毒相关性肾炎中的表达及其意义

目的:观察CTGF及其上游因子TGF-β1在乙肝病毒相关性肾炎(HBV-GN)肾组织中的表达情况,探讨它们在HBV-GN进展中的作用。方法:采用免疫组化检测87例HBV-GN患者肾活检组织中CTGF和TGF-β1的表达,进行半定量评分,分析其与临床病理指标的相关性。结果:87例中膜性肾病(MN)35例、系膜增生性肾小球肾炎(MsPGN)26例、膜增生性肾小球肾炎(MPGN)11例I、gA肾病(IgAN)9例及其他类型6例。正常肾组织CTGF和TGF-β1呈微弱表达或不表达,HBV-GN肾组织中CTGF和TGF-β1的表达明显高于对照组,不同病理类型中CTGF和TGF-β1的表达差异有统计学意义,CTGF和TGF-β1的表达与肾小管间质病变程度及肾小球的病变程度成正相关。结论:在HBV-GN中CTGF和TGF-β1参与其间质纤维化和疾病的进展。

腺相关病毒介导的pdx-1基因表达促进糖尿病大鼠肝脏细胞向胰岛素产生细胞转化的研究(英文)

目的:胰十二指肠同源盒基因-1(pancreatic duodenal homeobox-1,pdx-1)是胰岛发育和分化过程中重要的转录因子。本实验旨在研究腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)介导的pdx-1基因的表达是否可以诱导糖尿病大鼠肝脏细胞分化成产生胰岛素的细胞,以进一步为糖尿病的细胞替代疗法提供信息。方法:门静脉途径注射AAV-pdx-1或AAV对照载体到大鼠体内。6周后,用RT-PCR和免疫细胞化学法检测肝脏中胰岛素的基因表达及测定大鼠血糖、体重的变化。结果:AAV-pdx-1治疗组明显提高了糖尿病大鼠肝脏中胰岛素的基因表达和胰岛素阳性细胞数,改善了糖尿病大鼠的高血糖状态及增加了体重。结论:AAV-pdx-1可诱导糖尿病大鼠肝脏细胞分化成产生胰岛素的细胞,缓解了糖尿病状态。其分化的机制及分化的肝脏细胞亚群需进一步实验研究,以提高分化效率。

缺氧诱导因子-1α和BCL-2/腺病毒E1B19 kDa相关蛋白3在中耳胆脂瘤表达及意义

目的探讨缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1,HIF-1α)和BCL-2/腺病毒E1B19KDa相关蛋白3(Bcl2/adenovirus E1B 19 kD interacting protein 3,BNIP3)在中耳胆脂瘤中的表达及胆脂瘤上皮的凋亡情况。方法采用免疫组织化学方法检测30例中耳胆脂瘤标本与18例外耳道皮肤标本中HIF-1α和BNIP3蛋白的表达情况,使用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick-end-labeling,Tunel)检测20例中耳胆脂瘤标本和18例外耳道皮肤标本的凋亡情况。使用Pearson相关分析检验HIF-1α和BNIP3蛋白之间的相关性。结果 HIF-1α在胆脂瘤组和对照组的平均光密度分别为0.16±0.07和0.08±0.03,两组比较差异有统计学意义(t=4.279,P<0.01);BNIP3在胆脂瘤组和对照组的平均光密度分别为0.16±0.08和0.11±0.06,两组比较差异有统计学意义(t=2.463,P=0.0185);经pearson相关分析,在胆脂瘤上皮中,HIF-1α和BNIP3之间呈正相关(r=0.418,P=0.003);Tunel染色中,凋亡指数在胆脂瘤组和对照组分别为(52.8±12.5)%和(9.99±2.97)%,两组比较差异有统计学意义(t=14.166,P<0.01)。结论 HIF-1α和BNIP3在中耳胆脂瘤中的异常表达可能与胆脂瘤的高凋亡特性有关。

重组腺相关病毒介导的PD-L1基因在大鼠移植肝中的表达

目的探讨供肝转染PD-L1-AAV2-RFP后基因的表达情况。方法近交系BN大鼠随机分3组:同基因肝移植组(ISO组)、腺相关病毒空载体组(AAV组)、基因转染组(PD-L1组),每组6对。ISO组供肝冷保存期经门静脉注射生理盐水2mL,保存2h后采用改良"二袖套法"行原位肝移植;AAV、PD-L1组所用灌注液分别为AAV2-RFP空病毒颗粒和PD-L1-AAV2-RFP(1×1011v.g./只)。术后7、14d各取3只大鼠采血测定肝功能,取肝组织即刻行冰冻切片在荧光显微镜下观察RFP的表达,免疫组化染色法检测PD-L1蛋白的表达。结果3组术后7d谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)均明显增高,14d后基本恢复正常,各组间相比均无显著性差异(P>0.05);术后7d在荧光显微镜下AAV、PD-L1组移植肝可见少量而微弱的红色荧光,14d可见高亮度的红色荧光,而各组肝外组织及ISO组各时段均未见红色荧光;免疫组化染色结果示未转染组PD-L1蛋白均微弱表达,而PD-L1转染7d后随时间延长靶基因表达逐渐增强(P<0.05)。结论重组腺相关病毒介导,体外冷保存期经门静脉途径供肝转染PD-L1,可以使PD-L1基因在肝内获得安全、有效的表达。

重组Ⅱ型腺相关病毒介导的TIMP-1感染B16细胞对其体外侵袭及体内成瘤性的抑制作用研究

目的研究重组Ⅱ型腺相关病毒(AAV2)介导的TIMP-1对小鼠恶性黑色素瘤细胞(B16细胞)侵袭性及体内成瘤性的抑制作用。方法重组构建携带金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)的AAV2(r AAV2-TIMP1)质粒,以r AAV2-TIMP1体外感染B16细胞,经蛋白质印迹法(Western blotting)检测TIMP-1表达。选择能够明确表达TIMP-1的B16细胞,并根据其对肿瘤细胞侵袭性的抑制作用探究TIMP-1的作用,将感染r AAV2-TIMP1的B16细胞接种至小鼠的皮下与尾静脉,进而观察AAV2介导的TIMP-1对体内成瘤情况的影响。结果 TIMP-1经AAV2成功导入B16细胞并获得有效表达,表明AAV2介导的TIMP1能够明显抑制体外肿瘤细胞的侵袭性,明显降低体内肿瘤细胞的成瘤性。结论 AAV2介导的TIMP1在体外能很好地抑制B16细胞的侵袭性,在体内可以明显抑制肿瘤的形成和生长。

血清VEGF、TK-1和T淋巴细胞亚群与乙型肝炎病毒相关性肝病发生和进展的关系

目的:探讨血清血管内皮细胞生长因子(VEGF)、可溶性胸苷激酶-1(TK-1)和T淋巴细胞亚群与乙型肝炎病毒(HBV)相关性肝病的发生和进展的关系。方法:选择HBV相关性肝病病人188例,其中单纯乙型肝炎(乙肝)52例,肝纤维化40例,肝硬化56例,肝癌40例。另选择30名健康体检者为对照组。采用PCR法检测HBV-DNA负荷量,常规生化法检测肝功能指标丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平,ELISA法检测VEGF和TK-1水平,流式细胞术检测T淋巴细胞亚群CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+)百分比和CD4^(+)/CD8^(+)。结果:单纯乙肝组、肝纤维化组、肝硬化组、肝癌组的HBV-DNA负荷量及ALT、AST水平差异均无统计学意义(P>0.05)。肝癌组、肝硬化组、肝纤维化组、单纯乙肝组、对照组VEGF和TK-1、CD4^(+)/CD8^(+)水平逐渐降低;各组CD3^(+)、CD4^(+)和CD8^(+)水平差异均无统计学意义(P>0.05)。HBV相关性肝病病人血清中VEGF与TK-1呈明显正相关关系(r=0.745,P<0.01),VEGF与CD4^(+)/CD8^(+)呈明显负相关关系(r=-0.217,P<0.01),TK-1与CD4^(+)/CD8^(+)呈明显负相关关系(r=-0.208,P<0.01)。结论:HBV相关性肝病病人血清中VEGF、TK-1和CD4^(+)/CD8^(+)水平与疾病的发生和进展相关,VEGF和TK-1表达升高、CD4^(+)/CD8^(+)下降可能参与了乙肝、肝纤维化、肝硬化和肝癌的发生和进展。

慢性牙周炎病变位点EB病毒感染与IL-1β和SFRP1含量之间的相关性

目的 通过检测慢性牙周炎(chronic periodontitis,CP)患者龈下菌斑中EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)、龈沟液中白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)和分泌型卷曲相关蛋白1(secreted frizzled-related protein 1,SFRP1)的含量,探讨EBV感染与IL-1β和SFRP1相关性,进而探讨EBV与CP进展的相关性。方法选取CP患者轻度23例、中度23例、重度24例以及牙周健康者15例作为健康对照组,提取龈下菌斑及龈沟液,应用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法检测龈下菌斑中EBV的DNA载量,应用ELISA法检测龈沟液中IL-1β和SFRP1含量。结果 轻、中、重度CP病变位点及牙周健康位点中EBV的阳性检出率分别为30.4%、43.5%、75%和13.3%,重度CP病变位点中EBV阳性检出率显著高于牙周健康位点(P<0.01)。轻、中、重度CP病变位点中EBV DNA载量均高于牙周健康位点,差异具有统计学意义(P<0.01),EBV的载量随CP的加重而不断升高(P<0.05)。IL-1β和SFRP1在不同程度CP位点中的总量和浓度均高于牙周健康位点(P<0.05),IL-1β和SFRP1的浓度和含量均随CP的加重而不断升高(P<0.05);CP病变位点中EBV DNA的载量与龈沟液中IL-1β和SFRP1的浓度和总量均呈正相关关系。结论 EBV的感染可加重CP的严重程度,EBV的活动性感染可能加重CP的炎症进而引起附着丧失。

宫颈癌合并HPV感染患者VEGF和PD-L1表达与临床病理特征的相关性分析

目的研究宫颈癌患者合并人乳头瘤病毒(HPV)感染肿瘤组织中血管内皮生长因子(VEGF)和程序性死亡配体1(PD-L1)表达与临床病理特征的相关性。方法前瞻性纳入2016年3月至2021年3月在延安市中医医院就诊的80例宫颈癌合并HPV感染患者,年龄(58.41±7.81)岁,分化程度:高分化18例、中分化30例、低分化32例。运用免疫组化方法检测肿瘤组织切片中VEGF和PD-L1的表达水平,Spearman法分析VEGF和PD-L1表达水平的相关性,Kaplan-Meier和Log-Rank法分析不同亚组之间总生存期及差异,Cox回归分析预后相关的风险因素。结果80例患者中,39例(48.75%)死于恶性肿瘤的疾病进展,41例(51.25%)存活。免疫组化结果显示,VEGF和PD-L1在宫颈癌合并HPV感染肿瘤组织中的阳性表达率分别为61.25%(49/80)和52.50%(42/80)。Spearman相关性分析显示,VEGF与PD-L1的表达呈正相关(r=0.682,P<0.05)。VEGF、PD-L1表达均与患者的分化程度、远处转移、国际妇产科联盟(FIGO)分期有关(均P<0.05),且患者有远处转移、FIGO分期越高、分化程度越低,VEGF和PD-L1相对表达量就越高。VEGF表达阳性和阴性的中位总生存期(OS)分别为13.08个月、14.73个月,PD-L1表达阳性和阴性患者的中位OS分别为13.56个月和15.12个月,VEGF表达阴性患者的预后优于VEGF阳性患者,PD-L1表达阴性患者预后优于PD-L1表达阳性患者(Logχ^(2)=9.962、6.018,均P<0.05)。Cox多因素回归分析提示VEGF表达、PD-L1表达、远处转移、FIGO分期是影响患者独立预后的风险因素[风险比(HR)=2.443、2.251、2.194、2.587,均P<0.05]。结论VEGF和PD-L1检测可作为评估宫颈癌患者合并HPV感染预后的重要指标,具有一定的临床价值。

羟基红花黄色素A对CVB3病毒性心肌炎小鼠血清TNF配体相关分子-1A及IFN-γ表达的影响

目的探讨羟基红花黄色素A(HSYA)对柯萨奇病毒性(CVB3)心肌炎小鼠TNF配体相关分子-1A(TL1A)及干扰素-γ(IFN-γ)表达的影响。方法 Wistar小鼠90只随机分为正常组、模型组及治疗组,腹腔注射CVB3诱发心肌炎小鼠模型。测定心肌肥厚指数,HE染色观察心肌变化,检测血清TL1A和IFN-γ水平。结果模型组小鼠血清TL1A及IFN-γ水平均较正常组显著升高(P <0. 05);与模型组相比,治疗组血清TL1A及IFN-γ水平显著降低(P <0. 01),但仍高于正常组(P <0. 05)。模型组心肌肥厚指数和心脏质量显著高于正常组(P <0. 01),经过治疗后,治疗组的心肌肥厚指数和心脏质量明显降低,显著低于模型组(P <0. 05),但仍略高于正常组(P <0. 05)。各组小鼠心肌组织病理改变,正常组小鼠心肌细胞形态正常,未见水肿等病变;模型组小鼠心肌细胞排列紊乱,心肌横纹不清,大量炎性细胞浸润;治疗组心肌纤维形态和排列基本正常。结论 HSYA可能通过调节血清TL1A、IFN-γ水平保护CVB3心肌炎的心肌细胞,减轻CVB3所诱导的心肌损伤。

scAAV9-IGF-1对SOD1-G93A小鼠抗凋亡通路的作用

目的 探索以自我互补双链腺相关病毒9为载体介导的人胰岛素样生长因子-1 (scAAV9-IGF-1)对SOD1-G93A转基因小鼠抗凋亡通路的作用。方法 采用肌萎缩侧索硬化(ALS)的动物模型即转基因SOD1-G93A突变型及野生型(wild type-SOD1,WT-SOD1)小鼠,在其出生后60 d龄时,雌性同窝阳性SOD1-G93A转基因小鼠采用随机的方法分配到治疗组及溶剂对照组,治疗组全身多点肌肉注射scAAV9-IGF-1,溶剂对照组多点肌肉注射AAV9-GFP,同年龄WT-SOD1作为阴性对照组。在肌肉注射40~50 d后,利用PCR技术检测腰髓中IGF-1含量的变化,同时检测抗凋亡通路因子Bcl-xl、Bcl-2的mRNA含量变化,通过免疫组化染色观察抗凋亡通路因子Bcl-xl、Bcl-2在小鼠腰髓前角神经元中的表达。结果 PCR技术检测显示scAAV9-IGF-1处理后,腰髓中IGF-1的mRNA含量显著高于GFP对照组,抗凋亡通路因子Bclxl、Bcl-2的mRNA含量均高于溶剂对照组(均P<0.05),而与WT组差异无统计学意义。免疫组化染色结果显示,治疗组中抗凋亡通路蛋白Bcl-xl,Bcl-2在小鼠腰髓前角神经元中的表达多于溶剂对照组,并且与WT阴性对照组相当。结论 scAAV9-IGF-1可以激活SOD1-G93A转基因小鼠模型中的抗凋亡通路,其通过上调Bcl-xl,Bcl-2的mRNA水平,进而增加Bcl-xl、Bcl-2的蛋白表达,从而产生抗凋亡的作用。

X连锁凋亡抑制蛋白相关因子-1抑制肝癌裸鼠移植瘤生长的研究

目的研究X连锁凋亡抑制蛋白相关因子-1(XAF1)基因对人肝癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用。方法建立人肝癌细胞株SMMC7721裸鼠荷瘤模型,每组5只裸鼠分别在瘤内分3点注射相同感染滴度的重组腺病毒Ad5/F35-XAF1、Ad5/F35-Null对照空病毒及等体积的磷酸缓冲液(PBS),隔天注射1次,疗程2周。每3天测量各组裸鼠移植瘤的体积,观察Ad5/F35-XAF1组移植瘤的生长与其他两组的差异。原位末端标记TUNEL法检测移植瘤细胞的凋亡,免疫组织化学法检测移植瘤中XAF1蛋白表达和微血管密度(MVD)。结果与PBS组和Ad5/F35-Null组比较,瘤内注射Ad5/F35-XAF1组裸鼠移植瘤体积、质量和MVD显著减小(P<0.05或P<0.01),而移植瘤细胞的凋亡指数和XAF1蛋白的表达率均明显增高(P<0.01)。结论腺病毒介导XAF1基因可抑制人肝癌裸鼠移植瘤的生长,可能与该基因诱导肝癌细胞凋亡和抑制肿瘤血管形成有关。