菠萝凋萎相关病毒-3实时荧光定量PCR检测方法的建立

【目的】建立菠萝凋萎相关病毒-3实时荧光定量PCR检测方法。【方法】根据PMWa V-3外壳蛋白基因的保守区域设计特异性引物和探针,通过优化PMWa V-3实时荧光定量PCR检测体系,构建以重组质粒为标准品的标准曲线,建立起PMWa V-3实时荧光定量PCR检测方法。【结果】该方法能特异性地检测PMWa V-3,且灵敏度是普通RTPCR的10倍;该方法重复性良好,组间和组内变异系数均小于1.73。【结论】建立的实时荧光定量PCR方法是一种快速、简便、可信度高的PMWa V-3定量检测方法。

菠萝凋萎相关病毒-1实时荧光定量RT-PCR检测体系的建立与应用

菠萝凋萎相关病毒-1(Pineapple mealybug wilt associated virus-1,PMWaV-1)是田间检出率最高的菠萝凋萎病毒。本研究根据PMWaV-1CP基因保守序列设计特异性TaqMan探针和引物,建立并优化了PMWaV-1实时荧光定量RT-PCR检测方法。优化后的反应体系制备的标准曲线为y=-3.307×log x+38.18,相关系数r2为0.998。试验结果表明,该方法能特异性地检测PMWaV-1,对PMWaV-2、3和阴性对照均无反应;最低检测限达到40拷贝。重复性试验表明批内和批间变异系数均小于1.98%,是一种操作简便、特异性强、灵敏度高、重复性较好的PMWaV-1定量检测方法。样品检测结果表明PMWaV-1在菠萝植株老叶、嫩叶和吸芽中的病毒含量呈递减趋势。

血清HBD-1、CHI3L1水平在乙型肝炎病毒感染相关慢加急性肝衰竭预后预测中的效能

目的探讨血清人β防御素-1(HBD-1)、壳多糖酶3样蛋白1(CHI3L1)水平在乙型肝炎病毒(HBV)感染相关慢加急性肝衰竭(ACLF)疾病进展及预后预测中的效能。方法选取HBV-ACLF患者135例(HBV-ACLF组),另取同期体检健康志愿者60例(对照组),根据HBV-ACLF患者不同疾病分期分为早期组(54例)、中期组(48例)、晚期组(33例),观察28 d疾病转归情况。采用酶联免疫吸附法检测血清HBD-1、CHI3L1水平。多因素Logistic回归分析影响HBV-ACLF患者预后的因素,受试者工作特征(ROC)曲线分析血清HBD-1、CHI3L1水平对HBV-ACLF患者预后的评估价值。结果与对照组比较,HBV-ACLF组血清HBD-1、CHI3L1水平升高(P均<0.05)。早期组、中期组、晚期组血清HBD-1、CHI3L1水平依次升高(P均<0.05)。28 d死亡55例,存活80例,135例HBV-ACLF患者28 d病死率为40.74%(55/135)。与存活者比较,死亡者血清HBD-1、CHI3L1水平升高(P均<0.05)。疾病晚期、肝性脑病和中性粒细胞/淋巴细胞计数比值、Child-Turcotte-Pugh评分、终末期肝病模型评分(MELD)、MELD-血钠评分、HBD-1、CHI3L1升高为HBV-ACLF患者预后的独立危险因素(P均<0.05),白蛋白升高为独立保护因素(P<0.05)。血清HBD-1联合CHI3L1水平评估HBV-ACLF患者预后的曲线下面积为0.886,大于血清HBD-1、CHI3L1水平单独预测的0.779、0.786(P均<0.05)。结论HBV-ACLF患者血清HBD-1、CHI3L1水平升高,与疾病进展和预后不良密切相关,血清HBD-1联合CHI3L1检测预测HBV-ACLF患者预后的价值较高。

外泌体LncRNA SFTA1P和miR-483-3p诊断乙型肝炎病毒相关性肝癌的价值研究

目的分析血浆外泌体长链非编码RNA(LncRNA)SFTA1P和miR-483-3p在乙型肝炎病毒(HBV)相关性肝癌(HCC)的表达水平,评估其诊断价值。方法选择2022年1月—2024年1月本院收治的58例HBV相关性HCC患者作为HCC组;将同期收治的55例HBV患者作为HBV组;另选同期50名体检健康者作为对照组。运用纳米颗粒跟踪分析系统和蛋白质印迹分析鉴定血浆外泌体,并采用RT-qPCR检测外泌体LncRNA SFTA1P和miR-483-3p水平,分析二者水平分别与HCC临床病理特征之间的关系,Pearson法分析LncRNA SFTA1P和miR-483-3p表达水平的相关性,受试者工作特征(ROC)曲线分析LncRNA SFTA1P和miR-483-3p对HCC患者诊断的敏感性和特异性。结果外泌体LncRNA SFTA1P与miR-483-3p表达水平呈负相关(r=-0.7277,P<0.001)。与对照组相比,HBV、HCC组LncRNA SFTA1P水平依次增高,而miR-483-3p水平依次降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。LncRNA SFTA1P、miR-483-3p表达水平与TNM分期,肿瘤分化程度、淋巴结转移、AFP及AST有关(P<0.05),而与年龄、肿瘤大小、ALT、γ-GGT无关(P>0.05)。LncRNA SFTA1P和miR-483-3p单独诊断HCC时的曲线下面积(AUC)分别为0.886、0.851,敏感度分别为86.20%、89.70%,特异度分别为78.00%、70.00%;联合诊断的AUC为0.957,敏感度和特异度分别为94.80%、82.00%。结论血浆外泌体LncRNA SFTA1P和miR-483-3p的联合诊断可提高HBV相关性HCC的诊断率,为其诊断及后续治疗提供新的研究思路。

乙型肝炎病毒相关性肝细胞肝癌患者血清miR-125a-5p、miR-127-3p表达及临床意义

目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)相关性肝细胞肝癌(HCC)患者血清微小核糖核酸(miR)-125a-5p、miR-127-3p表达及临床意义。方法选取2018年1月至2020年10月该院收治的90例HBV相关性HCC患者作为HBV相关性HCC组。另选取同期该院的90例体检健康者作为对照组。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测血清miR-125a-5p、miR-127-3p表达。分析miR-125a-5p、miR-127-3p表达与HBV相关性HCC患者病理特征的关系。根据HBV相关性HCC患者血清miR-125a-5p、miR-127-3p表达的平均值分为高、低表达组,通过Kaplan-Meier法绘制各组不同的生存曲线。通过Cox回归分析影响HBV相关性HCC患者预后的因素,受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-125a-5p、miR-127-3p表达对HBV相关性HCC患者死亡的预测价值。结果HBV相关性HCC组血清miR-125a-5p、miR-127-3p相对表达水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。不同肿瘤最大径、分化程度、脉管侵犯、TNM分期、淋巴结转移的HBV相关性HCC患者血清miR-125a-5p、miR-127-3p表达比较差异有统计学意义(P<0.05)。Kaplan-Meier生存曲线分析显示,miR-125a-5p高表达组3年总生存率(64.58%)高于miR-125a-5p低表达组(38.10%),miR-127-3p高表达组3年总生存率(66.00%)高于miR-127-3p低表达组(35.00%),差异有统计学意义(χ^(2)=7.770、9.507,P=0.005、0.002)。HBV相关性HCC患者死亡的独立危险因素为肿瘤最大径≥5 cm、低分化、有脉管侵犯、TNM分期Ⅲ~Ⅳ期、有淋巴结转移,其独立保护因素为miR-125a-5p、miR-127-3p升高。ROC曲线分析结果显示,血清miR-125a-5p、miR-127-3p表达联合预测的曲线下面积(AUC)为0.907,高于血清miR-125a-5p、miR-127-3p表达单独预测的AUC(0.790、0.787),差异有统计学意义(Z=2.691、3.152,P=0.007、0.002)。结论HBV相关性HCC患者血清miR-125a-5p、miR-127-3p低表达,与肿瘤最大径、分化程度、脉管侵犯、TNM分期和预后有关,血清miR-125a-5p、miR-127-3p表达联合对HBV相关性HCC患者预后有较高的预测价值。

宫颈癌患者血清miR-3607-3p水平与人乳头瘤病毒感染相关性

目的:探究宫颈癌患者血清中微小RNA-3607-3p(miR-3607-3p)表达水平及其与人乳头瘤病毒(HPV)感染相关性。方法:选取2018年8月-2020年2月本院行宫颈活检的74例患者临床资料,根据病理检查结果分为宫颈炎患者18例(宫颈炎组)、宫颈鳞状上皮内病变(SIL)患者31例(SIL组)和宫颈癌患者25例(宫颈癌组)。检测3组血清miR-3607-3p水平及宫颈脱落细胞中HPV-DNA、HPV E6/E7 mRNA表达,Spearman分析miR-3607-3p与HPV感染的相关性;多因素lLogistic回归分析影响宫颈癌发生的危险因素。结果:血清中miR-3607-3p水平宫颈炎组(0.98±0.16)、SIL组(0.64±0.15)、宫颈癌组(0.34±0.13)依次降低,HPV阳性表达率、HPV E6/E7 mRNA高载量率依次升高(均P<0.05)。宫颈癌患者血清miR-3607-3p水平与HPV阳性表达、HPV E6/E7 mRNA表达呈负相关(r=-0.541、-0.492,P=0.000),miR-3607-3p水平是宫颈癌发生的保护因素,HPV阳性表达、HPV E6/E7 mRNA高载量是影响宫颈癌发生的危险因素(P<0.05)。结论:宫颈癌患者血清中miR-3607-3p表达水平较低,与HPV感染呈负相关,可能作为宫颈癌筛查的潜在生物指标。

缺氧诱导因子-1α和BCL-2/腺病毒E1B19 kDa相关蛋白3在中耳胆脂瘤表达及意义

目的探讨缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1,HIF-1α)和BCL-2/腺病毒E1B19KDa相关蛋白3(Bcl2/adenovirus E1B 19 kD interacting protein 3,BNIP3)在中耳胆脂瘤中的表达及胆脂瘤上皮的凋亡情况。方法采用免疫组织化学方法检测30例中耳胆脂瘤标本与18例外耳道皮肤标本中HIF-1α和BNIP3蛋白的表达情况,使用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick-end-labeling,Tunel)检测20例中耳胆脂瘤标本和18例外耳道皮肤标本的凋亡情况。使用Pearson相关分析检验HIF-1α和BNIP3蛋白之间的相关性。结果 HIF-1α在胆脂瘤组和对照组的平均光密度分别为0.16±0.07和0.08±0.03,两组比较差异有统计学意义(t=4.279,P<0.01);BNIP3在胆脂瘤组和对照组的平均光密度分别为0.16±0.08和0.11±0.06,两组比较差异有统计学意义(t=2.463,P=0.0185);经pearson相关分析,在胆脂瘤上皮中,HIF-1α和BNIP3之间呈正相关(r=0.418,P=0.003);Tunel染色中,凋亡指数在胆脂瘤组和对照组分别为(52.8±12.5)%和(9.99±2.97)%,两组比较差异有统计学意义(t=14.166,P<0.01)。结论 HIF-1α和BNIP3在中耳胆脂瘤中的异常表达可能与胆脂瘤的高凋亡特性有关。

抑制14-3-3ζ表达的siRNA及其重组腺相关病毒载体的构建

[目的]通过构建靶向14-3-3ζ的siRNA及其报告基因EGFP的重组腺相关病毒载体,包装出含有目标基因的腺相关病毒。[方法]设计靶向14-3-3ζ的siRNA,插入到psiRNA质粒H1启动子下游,Western-Blot检测siRNA的抑制效果。从psiRNA质粒上扩增H1-si-ζ基因表达单位亚克隆到AAV表达质粒AAV-MCS-EGFP的Mlu1酶切位点,构建重组质粒pAAV-14-3-3ζ-EGFP。重组质粒与包装质粒pAAV-RC和辅助质粒pHelper用磷酸钙法共转染AAV-293细胞制备重组病毒rAAV-14-3-3ζ-EGFP。重组病毒感染HT1080细胞,荧光显微镜检测病毒介导的EGFP表达。[结果]通过酶切鉴定和测序确定重组病毒载体pAAV-14-3-3ζ-EGFP已构建成功。病毒感染的细胞中检测到绿色荧光,表明重组病毒成功包装。[结论]成功包装出重组腺相关病毒AAV-14-3-3ζ-EGFP,为今后利用腺相关病毒载体进行14-3-3ζ相关的体内、外研究提供了试验基础。

联合检测CHI3L1、AFP和GGT在乙肝相关肝癌患者中的相关性研究

目的探讨血清壳多糖酶3样蛋白1(chitinase-3-like protein 1,CHI3L1)、甲胎蛋白(alpha fetoprotein,AFP)和γ-谷氨酰转移酶(γ-glutamyl transferase,GGT)检测在乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染相关肝癌诊断中的临床应用价值。方法选取2021年7月—2023年7月在玉林市第一人民医院就诊HBV病毒感染相关的50例肝癌患者,50例肝硬化患者,50例慢性乙型肝炎患者以及50名同期健康体检者作为研究对象。比较4组研究对象血清中CHI3L1、AFP、GGT、丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)等水平的差异,用受试者工作特征(receiver operating characteristic curve,ROC)曲线评估各指标在肝癌中的诊断价值。结果肝炎组、肝硬化组、肝癌组的CHI3L1、AST、ALT水平均高于对照组,肝癌组AFP、GGT水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。与肝炎组比较,肝硬化组及肝癌组的CHI3L1、AFP、GGT、AST、ALT水平均升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与肝硬化组比较,肝癌组的CHI3L1、AFP、GGT、AST水平均升高,差异有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线分析显示,CHI3L1、AFP、GGT联合时的曲线下面积(area under the curve,AUC)最大(AUC=0.936)。Spearman相关分析结果显示,CHI3L1与AST呈正相关(r=0.414,P=0.003),AFP与GGT呈正相关(r=0.437,P=0.002),AFP与AST呈正相关(r=0.504,P<0.001),GGT与AST呈正相关(r=0.759,P<0.001),GGT与ALT呈正相关(r=0.636,P<0.001)。结论CHI3L1、AFP及GGT联合检测可提高肝癌的诊断价值,对临床肝癌患者诊疗有重要作用。

高危型HPV感染对宫颈阴道微生态、miR-149-3p、CYBRD1表达的影响

目的:探讨宫颈炎患者高危型HPV(HR-HPV)感染对宫颈阴道微生态、miR-149-3p、CYBRD1表达的影响。方法:选取2020年12月-2022年12月因宫颈炎就诊于本院的102例临床资料,根据是否感染HR-HPV分入高危HPV阴性组(n=65)与阳性组(n=37)。检测HPV阳性患者HPV感染亚型,比较两组阴道微生态改变及阴道微生态平衡状态;采用荧光定量PCR法检测宫颈脱落细胞miR-149-3p、CYBRD1水平;Spearman法分析宫颈阴道微生态与宫颈脱落细胞miR-149-3p、CYBRD1水平的相关性;采用多因素logistic逐步回归分析HR-HPV感染影响因素。结果:HR-HPV阳性组宫颈病变严重程度高于阴性组,阳性组中HPV16亚型检出率最高(51.0%),其次为HPV18(18.6%);阳性组阴道微生态失衡、解脲脲原体阳性率、乳酸杆菌异常率均高于阴性组,miR-149-3p(0.53±0.12)低于阴性组(1.67±0.23),CYBRD1相对表达量(1.29±0.27)高于阴性组(0.46±0.10)(均P<0.05);HR-HPV感染与宫颈脱落细胞miR-149-3p表达呈负相关、与CYBRD1表达、阴道微生态失衡、解脲脲原体阳性率及乳酸杆菌异常率呈正相关(均P<0.05)。HR-HPV阳性组不良孕产史占比高于阴性组(P<0.05)。多因素分析显示:解脲脲原体阳性率、乳酸杆菌异常率、不良孕产史、阴道微生态失衡、miR-149-3p降低、CYBRD1升高是HR-HPV感染影响因素(均P<0.05)。结论:HR-HPV感染者宫颈脱落细胞中miR-149-3p低表达、CYBRD1高表达,亚型检出以HPV16、HPV18为主,且HR-HPV感染会影响患者宫颈阴道微生态失衡,增加宫颈病变严重程度。

外周血Treg细胞与吲哚胺2,3-二氧酶联合检测在慢性乙型肝炎病毒感染肝癌中的意义

目的:探索外周血Treg细胞与吲哚胺2,3-二氧酶(IDO)联合检测在慢性乙型肝炎病毒感染肝癌中的意义.方法:选取2017年7月~2019年7月于我院接受治疗的124例HBV感染患者为研究对象,42例慢性乙型肝炎(CHB)患者为CHB组,54例HBV-DNA阳性原发性肝癌(HCC)患者为HCC组,28例肝硬化患者为肝硬化组,另外选取同期于本院接受体检的32例健康体检者为对照组.对比各组患者性别及年龄信息,检测各组外周血Treg细胞及IDO指标水平,分析HBV感染程度与外周血Treg细胞与IDO指标水平的相关性.结果:对照组、CHB组、肝硬化组、HCC组患者性别、年龄信息对比不具有统计学意义(P>0.05).HCC组外周血Treg和IDO mRNA指标水平最高,分别为(11.94±1.46)%和(2.89±0.73)×10^3copies,对照组外周血Treg和IDO mRNA指标水平最低,分别为(2.89±0.13)%和(0.71±0.10)×10^3copies;肝硬化组外周血Treg和IDO mRNA指标水平分别为(4.26±0.87)%和(1.87±0.57)×10^3copies,较CHB组外周血Treg(3.67±0.54)%和IDO mRNA(1.21±0.45)×10^3copies高,各组外周血Treg和IDO mRNA指标水平数据对比具有统计学意义(P<0.05).相关性分析结果显示,外周血Treg及IDO mRNA与HBV感染呈正相关关系(r=0.336,P=0.008及r=0.178,P=0.010),即HBV感染程度越高,患者外周血Treg及IDO mRNA指标水平越高.结论:HBV感染与性别及年龄差异不具有统计学意义,HCC患者外周血Treg和IDO mRNA指标水平明显高于CHB患者、肝硬化患者及健康体检者,且外周血Treg和IDO mRNA指标水平与HBV感染程度呈正相关关系.

BNIP3 HIF-1α在食管鳞癌中的表达及其临床病理意义＊

目的:初步探讨BCL-2/腺病毒E1B 19 kDa相关蛋白3(BCL2/adenovirus E1B19 kd-interacting protein3,BNIP3)和乏氧诱导因子-1α(HIF-1α)在食管鳞癌(ESCC)中表达及其与临床病理之间的关系和意义。方法:采用免疫组织化学S-P方法分别测定食管鳞癌组织和切端正常食管黏膜组织芯片的BNIP3、HIF-1α的表达水平。运用统计学方法对比分析BNIP3和HIF-1α在食管鳞癌组织和切端正常黏膜组织中的表达以及BNIP3和HIF-1α与肿瘤原发病灶部位、肿瘤浸润深度(T分期)、TNM分期、淋巴结转移(含淋巴侵犯)、肿瘤组织分化程度(分级)等临床病理特征之间的关系。结果:BNIP3表达在细胞质中,HIF-1α表达在细胞核和细胞质中。食管鳞癌组织中BNIP3蛋白表达阳性率37.5%(27/72),明显低于正常切端组织的60%(18/30)(P=0.037);HIF-1α蛋白表达阳性率52.7%(38/72),明显高于正常切端组织的13.3%(4/30)(P<0.001)。BNIP3蛋白表达与食管癌的肿瘤浸润深度、TNM分期、淋巴结转移相关(P=0.035、P=0.048、P=0.033)。HIF-1α蛋白表达亦与肿瘤浸润深度、TNM分期、淋巴结转移相关(P=0.023、P=0.004、P=0.002)。并且,BNIP3表达与HIF-α表达呈负相关(r=-0.274,P=0.020)。结论:在食管鳞癌中,BNIP3与HIF-1α的表达密切相关,且均与肿瘤的浸润深度、TNM分期、淋巴结转移密切相关。因此,联合检测BNIP3和HIF-1α,有助于食管鳞癌的辅助诊断、病期评价及预后判断。

TCT联合HPV DNA及血清CA15-3、SCCA、CA125水平检测对宫颈上皮内瘤变的诊断价值

目的探讨液基薄层细胞学检测(TCT)联合人乳头瘤病毒基因分型(HPV DNA)及血清肿瘤标志物[糖类抗原15-3(CA15-3)、癌相关抗原(SCCA)、糖类抗原125(CA125)]水平检测对宫颈上皮内瘤变(CIN)的诊断价值。方法选取2017年5月至2018年5月焦作市人民医院收治的58例CIN患者作为观察组,经宫颈病理活检,确诊CIN I级19例、CINⅡ级16例、CINⅢ级23例。另选择同期于焦作市人民医院进行健康体检的58例女性作为对照组。所有患者均接受TCT、HPV DNA及血清CA15-3、SCCA、CA125水平检测。比较各项指标单一检测与联合检测对CIN的阳性检出率。结果观察组血清CA15-3、SCCA、CA125水平均较对照组高,差异有统计学意义(均P<0.05)。TCT联合HPV DNA、CA15-3、SCCA、CA125对CIN的阳性检出率较SCCA、CA125、CA15-3、TCT、HPV DNA单一检测时高,差异有统计学意义(均P<0.05)。结论 TCT联合HPVDNA、CA15-3、SCCA、CA125检测可提高CIN的阳性检出率。

GSK-3β对小鼠骨髓树突状细胞成熟和功能的调控作用

目的探讨GSK-3β对小鼠骨髓树突状细胞(BMDC)成熟和功能的调控作用。方法脂多糖催熟BMDC,Western blotting检测刺激前后糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)的磷酸化水平的改变;利用GSK-3β的选择性抑制剂SB216763处理BMDC,检测表型、细胞因子表达和混合淋巴反应(MLR)的变化情况;构建过表达小鼠GSK-3β的慢病毒载体并转染DC2.4细胞,Western blotting检测过表达GSK-3β对调控树突状细胞(DC)成熟的关键调控因子鸟的网状内皮组织增生病毒癌基因相关B(Rel B)蛋白水平的影响。结果经脂多糖处理后,GSK-3βY216磷酸化水平下调,Ser9磷酸化水平显著上调,表明GSK-3β的活性显著下降。抑制GSK-3β的活性能上调DC表面共刺激分子CD40和CD86的表达,削弱脂多糖诱导的促炎细胞因子IL-6和IL-12表达上调,而对抗炎细胞因子IL-10的表达有促进作用,同时降低脂多糖诱导成熟的DC刺激同种异基因T细胞增殖的能力。在未成熟的DC2.4细胞中,过表达GSK-3β能够下调Rel B的水平。结论 GSK-3β参与调控DC的成熟和功能,高活性的GSK-3β抑制未成熟树突状细胞(i DC)的自发性成熟,GSK-3β失活后促进DC表型的成熟,而在脂多糖诱导DC分化的过程中GSK-3β发挥促炎作用。GSK-3β能够下调Rel B的蛋白水平,有望成为构建新型耐受性DC的新靶点。

基于NLRP3炎性体及细胞焦亡研究犀角地黄汤对流感病毒性肺炎小鼠炎症反应的抑制作用

目的探究犀角地黄汤对流感病毒性肺炎小鼠炎症反应的作用及作用机制。方法BALB/c小鼠,随机分为正常组、模型组、犀角地黄汤组、达菲组,除正常组外其余小鼠以流感病毒滴鼻感染,1小时后给药。各组分别以对应的水煎剂或溶液灌胃,每日1次,连续6天。BALB/c小鼠分别在感染后第2、4、6天取材,观察小鼠肺大体病变情况;计算肺指数;光镜下观察肺组织病理切片;RT-PCR法检测肺组织中NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3,NLRP3)、凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein,ASC)、半胱天冬氨酸酶1前体(Pro-Caspase-1)和gasdermin D(GSDMD)mRNA水平;ELISA法检测小鼠血清中肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)和白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)水平。Western blot检测肺组织中NLRP3、Caspase-1 p20、GSDMD和gasdermin D N端片段(GSDMD-N)蛋白表达量。结果犀角地黄汤组和达菲组均可在第2、4、6天改善小鼠肺脏充血、红肿和坏死现象,且不同程度的减轻感染小鼠肺组织炎性病理改变。第6天,犀角地黄汤组的肺指数显著降低。模型组小鼠肺组织NLRP3、ASC、Pro-Caspase-1、GSDMD mRNA表达增多,NLRP3、Caspase-1 p20、GSDMD和GSDMD-N蛋白表达亦增多,肺组织IL-1β、IL-6、TNF-α水平升高;犀角地黄汤可显著减少上述分子mRNA、蛋白表达及炎症因子水平。结论犀角地黄汤通过调控NLRP3-Caspase1介导的细胞焦亡抑制流感病毒性肺炎小鼠的炎症反应,是其截断疾病的传变的机制之一。

HCMV感染新生儿外周血和脑脊液中TNF-α、Acrp30、MMP-3水平及临床意义

目的探讨人巨细胞病毒(HCMV)感染新生儿后外周血和脑脊液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、脂肪细胞补体相关蛋白30(Acrp30)、基质金属蛋白酶-3(MMP-3)水平及临床意义。方法选取2017年10月至2019年10月收治的196例HCMV感染新生儿(病例组),选取同期80例健康新生儿(对照组)。比较两组新生儿外周血和脑脊液中的TNF-α、Acrp30、MMP-3水平以及病例组治疗前、后各指标水平的变化,评估各指标对HCMV感染的预测价值。结果病例组新生儿外周血和脑脊液TNF-α、Acrp30、MMP-3水平均高于对照组,差异均具有统计学意义(P<0.05)。外周血和脑脊液TNF-α、Acrp30、MMP-3预测HCMV感染的灵敏度分别为75.51%、88.27%、83.16%、75.51%、82.14%、64.29%,特异度分别为81.15%、88.75%、80.00%、70.00%、87.50%、76.25%。治疗后,HCMV感染新生儿的外周血和脑脊液TNF-α、Acrp30、MMP-3水平均低于治疗前,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论外周血和脑脊液TNF-α、Acrp30、MMP-3水平可为新生儿HCMV感染以及预后评估提供参考,具有一定的临床辅助诊断价值。

弥漫大B细胞淋巴瘤并乙型肝炎病毒感染血清sIL-2r、Flt3L、cTfh水平及与预后的关系

目的探讨弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)并乙型肝炎病毒(HBV)感染患者血清可溶性白细胞介素-2受体(sIL-2r)、Fms相关酪氨酸激酶3配体(Flt3L)、循环辅助T细胞(cTfh)水平及与预后的关系.方法选取2019年3月-2022年3月在新乡医学院第一附属医院收治的60例DLBCL并HBV感染患者为合并HBV组,选取同期收治的60例DLBCL未合并HBV感染患者为未合并HBV组,均在治疗前检测血清sIL-2r、Flt3L、cTfh水平.另选取30名健康志愿者为健康对照组.比较各组间指标水平差异.比较两组患者1年生存差异.利用受试者工作特征(ROC)曲线和多因素COX分析各指标与DLBCL并HBV感染患者预后关系.结果DLBCL患者血清sIL-2r、Flt3L、cTfh水平均高于健康对照组(P<0.05);合并HBV组血清sIL-2r、cTfh、Flt3L水平均高于未合并HBV组(P<0.05).合并HBV组无进展生存率、总生存率均低于未合并HBV组(P<0.05).ROC分析结果显示,sIL-2r、Flt3L、cTfh均具有预测DLBCL并HBV患者的预后价值(P<0.05).多因素COX分析结果显示,淋巴瘤分期(AnnArbor)、非霍奇金淋巴瘤预后(IPI)评分、sIL-2r、Flt3L、cTfh是影响患者预后的危险因素(P<0.05).结论HBV感染可影响DLBCL患者预后,DLBCL并HBV感染患者血清sIL-2r、Flt3L、cTfh高表达,具有预测预后的价值,且Flt3L是影响预后的危险因素.

山东省葡萄几种主要病毒病调查及检测研究

对采自山东省不同葡萄园类别的葡萄样品,采用PTA-ELISA法和Dot-ELISA法对葡萄茎痘相关病毒(GRSPaV)进行了检测,采用DAS-ELISA法对葡萄卷叶病的3个毒原(GL-RaV-1-、2-、3)进行了检测。GRSPaV检测结果表明:检测的61个品种518个样品,阳性样品率33.6%,阳性品种率73.8%,其中资源圃样品阳性率32.7%,生产园样品阳性率34.0%。对检测到阳性样品辅以RT-PCR法验证,2对引物均扩增出了预期片段,分别为解旋酶基因340 bp片段、CP基因842 bp片段。GLRaV-1-、2-、3的检测结果表明:鲜食品种3种病原的阳性样品率分别为33.7%、7.1%、62.2%,酿酒品种阳性样品率分别为35.1%、16.2%、54.1%,综合3种病毒的阳性样品率为76.3%,品种感染率87.7%。通过该类研究对推动国内葡萄无毒化生产有重要意义。

miR-497-5p miR-3607-3p与宫颈癌合并高危型HPV感染的相关性分析

目的探究miR-497-5p、miR-3607-3p与宫颈癌合并高危型HPV感染的相关性分析。方法选取2018年7月至2023年7月上海交通大学医学院苏州九龙医院妇科82例行宫颈活检患者临床资料进行回顾性研究,分为慢性宫颈炎组(20例)、宫颈上皮内瘤变(CIN)组(34例)、宫颈癌组(28例),另按2∶1选取同期体检健康人群41例为健康对照组,比较各组的miR-497-5p、miR-3607-3p表达与高危型HPV感染差异,分析miR-497-5p、miR-3607-3p表达与高危型HPV感染的关系;比较宫颈癌临床不同病理特征患者miR-497-5p、miR-3607-3p表达;通过ROC曲线分析miR-497-5p、miR-3607-3p表达诊断高危型HPV感染合并宫颈癌的价值。结果miR-497-5p、miR-3607-3p表达在四组中的排序依次为宫颈癌组CIN组>宫颈炎组>健康对照组(P<0.05),且随着宫颈病变加重,高危型HPV16、18型别感染发生率逐渐增加,其他型别逐渐降低(P<0.05)。miR-497-5p、miR-3607-3p表达均与高危型HPV感染呈负相关(r=-0.793、-0.697,P<0.05)。不同FIGO分期、脉管或宫旁转移、淋巴结转移宫颈癌患者miR-497-5p、miR-3607-3p表达比较差异有统计学意义(P<0.05),ROC曲线分析显示,miR-497-5p、miR-3607-3p表达诊断高危型HPV感染合并宫颈癌的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.829、0.807;诊断敏感度、特异度:miR-497-5p为92.9%、83.3%;miR-3607-3p为100.0%、64.8%,诊断具有一定价值。两项联合诊断高危型HPV感染合并宫颈癌的AUC为0.907,敏感度为100.0%、特异性为77.8%。结论miR-497-5p、miR-3607-3p在宫颈癌中低表达,与高危型HPV感染及宫颈癌临床病理特征相关密切,可作为诊断宫颈癌合并高危型HPV感染的有效指标,且两者联合诊断价值更高。

5-氮杂脱氧胞苷对胶质母细胞瘤细胞U87增殖的影响及其机制探讨

目的观察5-氮杂脱氧胞苷对胶质母细胞瘤细胞U87增殖的影响,并探讨其可能机制。方法采用不同浓度(0、0.1、0.5、1.0、5、10μmol/L)5-氮杂脱氧胞苷作用于U87细胞,比较细胞增殖抑制率和Bcl-2腺病毒E1B19k Da相关蛋白3 mRNA(BNIP3 mRNA);将5μmol/L的5-氮杂脱氧胞苷作用于U87细胞0、1、2、3、4、5、6 d,比较细胞增殖抑制率及BNIP3 mRNA。将5μmol/L 5-氮杂脱氧胞苷作用于U87细胞4 d,并分别添加和不添加Caspase抑制剂Boc-D-FMK,测算细胞增殖抑制率。结果 5-氮杂脱氧胞苷对U87细胞增殖有抑制作用,且呈剂量及时间依赖性(P均<0.05),抑制作用最强的浓度为5μmol/L,最强的时间点为4 d;Boc-D-FMK并不能抑制由BNIP3所诱导的细胞凋亡,P>0.05。结论 5-氮杂脱氧胞苷可抑制U87细胞增殖,其机制可能与BNIP3 mRNA表达上调有关。