菲莱氏温扬球虫18S rDNA基因的扩增与克隆分析

菲莱氏温扬球虫是鸭球虫病的重要病原之一,为了寻找种特异性的遗传标记,本研究采集广东省某鸭场的新鲜鸭粪,通过Sheather’s蔗糖漂浮法收集球虫卵囊,经形态学鉴定为菲莱氏温扬球虫;提取该球虫DNA样品,经过PCR扩增,首次获得了该虫的18S rDNA基因部分片段;对该基因进行了克隆和测序,比较了该虫株与其他原虫的亲缘关系。结果显示,对菲莱氏温扬球虫序列与艾美耳科其他球虫关系较近,系统进化树分析属于艾美耳科的另一分支。表明18S rDNA基因在鸭菲莱氏温扬球虫的分类鉴定上是一种有效的分子标记。

菲莱氏温扬球虫裂体生殖的发育过程及超微结构

菲莱氏温扬球虫（ＷｅｎｙｏｎｅｌａｐｈｉｌｉｐｌｅｖｉｎｅｉＬｅｉｂｏｖｉｔｚ，１９６８）的裂体生殖过程是在具皱褶膜的纳虫空泡中进行的。发育早期的滋养体外被单层界膜，胞质中含一些退化的运动期虫体特有的细胞器（如微线体等），以及丰富的内质网、线粒体、高尔基体等。裂殖子以外出芽方式形成于裂殖体表面。裂殖子外被３层单位膜，中层和内层组成内膜复合体。裂殖子中部表膜上有１～２个微孔。类锥体由５～６圈微管组成，内有１对棒状体颈部，２根锥体内微管和若干微线体。类锥体前为Ｒ１、Ｒ２。棒状体起于顶孔，止于虫体中部，分细的颈部和膨大的体部，虫体前部有大量微线体。膜下微管为２２根。核位于虫体后部，每代成熟裂殖子均有数个致密体和大量支链淀粉粒。

菲莱氏温扬球虫(Wenyonella philiplevinei)受精和卵囊壁形成的超微结构研究

本文利用透射电镜研究了寄生于家鸭小肠上皮细胞的菲莱氏温扬球虫的受精和卵囊壁的形成过程。作者在感染后96 h 的样品中发现一例大、小配子已受精;小配子已进入大配子中,大配子胞质中有一根纵切的鞭毛,小配子的核呈流体状,位于大配子核附近。卵囊壁是由成囊颗粒内含物进入合子表面的膜之间沉积成层而形成。成囊颗粒Ⅰ形成外层卵囊壁,成囊颗粒Ⅱ形成内层卵囊壁。沉积于膜之间的成囊颗粒Ⅰ内含物逐渐浓缩,堆积成颗粒状,使卵囊壁外层外表面形成颗粒状突起。成熟的卵囊壁由三层组成:即薄的外周膜、外层和内层。其内的合子原生质还被两层单位膜包裹。

安徽省部分地区散养鸭菲莱氏温扬球虫感染情况的调查

为了解安徽省散养鸭群中菲莱氏温扬球虫的感染情况,本实验采集安徽省不同地区散养鸭的粪便样品487份,利用基于菲莱氏温扬球虫18S rDNA的PCR方法对所有样品进行检测,阳性样品测序后经同源性及遗传进化分析。结果显示,共鉴定出49个菲莱氏温扬球虫阳性样品,18S rDNA基因序列的同源性及构建的进化树分析结果均表明PCR获得的序列均为菲莱氏温扬球虫18S rDNA基因序列。流行病学调查显示,安徽省散养鸭菲莱氏温扬球虫的感染率为10.10%(49/487),其中,4周龄~8周龄鸭的感染率(14.69%,26/177)显著高于0~3周龄(5.48%,4/73)和>8周龄鸭(8.02%,19/237)(p<0.05)。粪便异常鸭菲莱氏温扬球虫的感染率(19.56%,18/92)显著高于粪便正常鸭(7.85%,31/395)(p<0.01)。本研究首次采用分子生物学方法对安徽省散养鸭菲莱氏温扬球虫的感染情况进行了调查,显示该虫种在安徽省散养鸭中的感染较为普遍,且菲莱氏温扬球虫感染鸭与其周龄和粪便性状显著相关,本研究结果可为鸭球虫病的诊断与防控提供参考。

鸭球虫病的防治

在北方地区鸭球虫病的发病率为30﹪～85﹪以上,致死率可达70﹪,患病鸭后期生长发育迟缓,增重缓慢,严重地危害着养鸭业。1病原学寄生于鸭的球虫包括艾美耳属、泰泽属、温扬属和等孢属的多种球虫,常寄生于肠道,少数艾美耳属球虫寄生于肾脏。对鸭具有致病力的球虫主要有泰泽球虫和菲莱氏温扬球虫2种。