萋尼氏染色:理论与实践

世界卫生组织、国际防痨与肺病联盟的指南所提供的萋尼氏染色内容,在某些方面缺乏实用性,本文给出的建议意在对指南加以补充。这些建议是建立在有关碱性复红染色和染色液的试验以及实际经验基础之上的。

萋-尼氏抗酸染色法和金胺O荧光染色法在结核分枝杆菌痰涂片检测中的对比

目的:比较萋-尼氏抗酸染色法(简称Z-N)和金胺O荧光染色法(简称荧光染色)在痰涂片镜检中对结核分枝杆菌的检测效果差异。方法:纳入580份痰标本,挑取相同部位制成两份涂片,分别使用Z-N和荧光染色进行染色镜检,比较两种方法的阳性检出率、阳性分级标准及读片时间上的差异。将涂片后余下的痰标本采用全自动分枝杆菌检测/药敏系统做液体培养。结果:Z-N法阳性检出率为10.8%,荧光染色法为15.3%,两种方法比较差异有统计学意义(P<0.05)。对两种方法每一级别的结果进行χ~2检验,结果表明两种染色方法在各个分级没有统计学差异(P>0.05)。荧光染色法的读片时间要明显短于Z-N。结论:荧光染色阳性检出率略高于Z-N,证明荧光染色法是一种快速、灵敏的检测方法,对肺结核的临床诊断具有重要意义。

荧光显微术与萋-尼氏染色技术在检查痰抗酸杆菌方面的比较

背景:塞内加尔达喀尔国家结核病参比实验室。目的:比较荧光显微镜和明视野显微镜检查抗酸杆菌的结果。方法:1996年1月至1998年6月期间2630份痰标本被同时制备2种涂片,在1000倍物镜下分别进行萋-尼氏染色和荧光显微术检查,并应用这两种方法同时检查一例标本的68张涂片来确定判断一张涂片为阴性所需的检查时间。结果:诊断和随访检查时两者的符合率分别为96.9％和92.3％。当标本中每100个视野至少10条菌时,两者的检出率相似,但当标本中每100个视野少于10条菌时,荧光显微术的检出率较高。在同倍物镜下,荧光显微术判断一张涂片为阴性所需的检查时间平均为3分34秒,而萋-尼氏染色技术需7分44秒。结论:两者的检查结果非常相似。对于含菌量少的病例,荧光显微镜似比明视野显微镜的检出率更高,而且所需检查时间少一半多。

温度对萋尔-尼尔氏染色镜检找抗酸杆菌方法的影响

目的:了解温度对萋-尼氏抗酸杆菌的方法的影响。方法:选择已知阴阳性涂片结果的100例标本进行涂片,一份标本涂5张痰膜片,分别放置25、40、60、80、100℃下予以干燥,并且阴阳性片子间隔排列,干燥后进行萋-尼氏染色、镜检。结果:25、40、60、100℃干燥的痰膜片阳性率为50%、80℃干燥的痰膜片阳性率为48%,各温度干燥处理的阳性率没有统计学意义(P>0.05)。各温度阳性的分级报告稍不同。各温度阴阳性间隔的阴性片子镜检结果全部与25℃自然干燥镜检结果相符,没有产生标本间交叉污染,也没有产生痰膜脱落的后果。结论:25℃～100℃干燥痰膜片对萋-尼氏染色找抗酸杆菌的方法影响不大,只要控制好干燥的时间可提高工作效率,减轻工作量。

萋-尼氏抗酸和金胺O荧光染色法在结核菌痰涂片检测的对比

对比萋-尼氏抗酸和金胺O荧光染色法在结核菌痰涂片检测中的检测效果。方法:2015年1月-2021年2月,选取本院管理的162名结核病患者(上级结防反馈)痰液标本以及80名健康人群痰液标本,共计242份痰液标本开展研究,所有痰液标本均涂片两张并等分为两份,其中一份为研究1组,应用萋-尼氏抗酸检测法检测,另一份为研究2组,应用金胺O荧光染色法检测。结果:研究2组阳性分级为2+、3+和4+痰液涂片占比与研究1组对比无统计学差异(P>0.05),但研究2组≤1+和阳性率对比均显著高于研究1组,具有统计学差异(P<0.05);研究2组和研究1组特异性对比无统计学差异(P>0.05),但研究2组灵敏度和诊断符合率显著高于研究1组,具有统计学差异(P<0.05);研究2组读片时间短于研究1组,具有统计学差异(P<0.05)。结论:与萋-尼抗酸染色法相比,金胺O荧光染色法在结核杆菌涂片检测中具有更高的阳性检出率,更高的灵敏度,也具有更高的准确率,并且此方法染色操作更加方便,读片时间更短,同时此方法能够配套图像采集系统使用,从而让检测更加便捷,对此在结核菌痰涂片检测时在条件允许情况下有限选用金胺O荧光染色法进行检测。

荧光染色法与萋-尼氏抗酸染色法检测痰液中抗酸杆菌的对比观察

目的:评价荧光染色法在痰涂片抗酸杆菌镜检中的临床价值。方法:收集330例结核病门诊就诊病人的痰液,用荧光染色法与萋-尼氏抗酸染色法检测痰液中抗酸杆菌,比较两种方法的阳性检出率及阳性分级标准差异。结果:荧光染色法阳性检出率为21.3%,萋-尼氏抗酸染色法阳性检出率为21.6%,结果无统计学意义(P>0.05)。阳性标本量化级别在1-9条/50个视野(荧光染色)和1-8条/300个视野(萋-尼氏抗酸染色)时,其阳性样本百分比分别为2.2%和9.6%,差异有统计学意义(P<0.05);在其他分级标准下,两种方法阳性百分比差异不大(P>0.05)。结论:痰涂片荧光染色法更适合临床推广。

1030例支气管刷检痰片查找抗酸杆菌结果报告

目的：了解1030例支气管刷痰查找抗酸杆菌结果。方法：由临床医务人员制作好刷检痰片用本室自备的萋尼氏染液进行染色并镜检。结果：1030例刷检痰片中39例镜检阳性，占3．79％，其中临床上诊断为肺癌患者无一例阳性；疑似肺癌患者、AIDS患者及肺结核患者阳性率分别为2．23、10．41及4．13％。结论：刷检痰片查找抗酸杆菌对结核病的诊断提供很重要依据，对临床治疗有重要的参考价值。

一例肉牛副结核分枝杆菌感染的诊断

2018年6月份,齐齐哈尔市某规模肉牛场1头肉牛发生以腹泻为主要症状的疾病,采用抗菌药物消炎治疗后病情好转,但腹泻反复发作,为了对该病例进行确诊,试验通过直肠采集病牛腹泻粪便,采用萋-尼氏染色及PCR方法进行诊断。结果表明:该腹泻病例为副结核分枝杆菌感染引起的牛副结核病。说明该肉牛场已存在牛副结核分枝杆菌,该肉牛场针对该病进行了排查,对检测为副结核分枝杆菌阳性牛进行了隔离、淘汰。

免疫磁珠荧光染色法在痰液结核分枝杆菌检测中的应用

目的建立免疫磁珠(immunomagnetic beads,IMB)荧光染色法并评估其在临床痰液标本结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)检测的应用价值。方法利用IMB富集纯化结核分枝杆菌,利用自动染色机和自动显微镜智能软件扫描系统进行荧光染色及结果分析,建立结核分枝杆菌IMB荧光染色法。用实验室培养的标准菌株评估该方法的检测灵敏度和特异度。同时选取2021年5月~2022年2月在山东省第二人民医院就诊的145例疑似肺结核患者作为临床研究对象,取每例患者的痰液标本,选用萋-尼氏(Ziehl-Neelsen,Z-N)抗酸染色法、IMB荧光染色法和BACTEC 960系统培养法检测结核分枝杆菌感染情况,比较三种方法的阳性检出率、灵敏度、特异度和准确率,验证IMB荧光染色法在诊断结核分枝杆菌感染中的优势和临床应用价值。结果IMB荧光染色法的最低结核分枝杆菌检测量是30 CFU/ml,在标本含菌量≥30 CFU/ml时,该方法学的敏感度为100%;而在10 CFU/ml时则降到56%,该方法检测的特异度为100%。在利用临床标本检测中,IMB荧光染色法、Z-N抗酸染色法和培养法对于结核分枝杆菌的阳性检出率分别为73.10%,40.69%和78.62%;IMB荧光染色法的阳性率明显高于传统Z-N抗酸染色法的阳性率,差异具有统计学意义(χ^(2)=31.0599,P<0.05);略低于培养法,差异无统计学意义(χ^(2)=1.2052,P>0.05)。IMB荧光染色法在临床标本检测中的灵敏度、特异度和准确率分别为92.98%,100.00%和94.48%,明显高于Z-N抗酸染色法的灵敏度、特异度和准确率(47.37%,83.87%和55.17%),差异具有统计学意义(χ^(2)=56.6647,5.4386,P<0.05;59.4792,均P<0.05)。结论研究建立的IMB荧光染色法优于目前应用的其他染色法,可为结核病早期诊断提供新方法。

现场条件下痰涂片查抗酸杆菌石炭酸复红染色方法的差异

地点:孟加拉国现场项目。目的:比较常规使用的石炭酸复红染色法改变的有效性。设计:75个现场临床检查地点,使用常规1％碱性复红加热15分钟的萋-尼氏染色法(ZN)。盲法对照检查ZN 1％与ZN 0．3％碱性复红染色5分钟,或ZN 1％5分钟与Kinyoun冷染色法的双份涂片的结果。结果不符时进行复检。结果:假阳性的数目可对照时,Kinyoun氏法的敏感性比ZN 1％5分钟低的多(85．6％对93．0％, P<0．001)。ZN 1％5分钟的敏感性不比0．3％5分钟染色高(89．9％对86．5％)。常规使用的1％15分钟的ZN检查法比本研究中的其它方法查出的阳性教都要高。结论:Kinyoun氏冷染色法在现场临床条件下的敏感性不令人满意。WHO/IUATLD推荐的0．3％复红5分钟的敏感性和原来的1％ZN法5分钟没明显区别,但1％15分钟加热染色法更好。降低复红浓度、减少染色时间可能会增加出错的机会。结核项目中使用的较高浓度和较长时间的热ZN法不应当鼓励去改变。

2种染色方法查找痰中结核杆菌的比较

目的评价发光二极管荧光染色法(简称LED法)与萋-尼氏抗酸染色法(简称Z-N法)查找痰中结核杆菌的差异。方法对1 168份痰标本分别进行萋-尼氏抗酸染色和荧光染色检测,比较2种方法检查结核杆菌的阳性检出率、读片时间、褪色速度等方面的差异。结果 LED法检测结果与Z-N法检测结果的符合率为99.1%,二者差异无统计学意义(P>0.05),另有11份用Z-N法染色检测为阴性的标本其荧光染色检测为阳性,表明荧光染色检测方法具有更高的灵敏度,LED法的读片时间明显短于Z-N法。结论 LED法具有读片时间短、灵敏度较高、操作步骤简单等特点,在基层痰检室对肺结核患者的发现具有一定优势,适合在临床推广。

2598份门诊痰标本留取质量对于结核杆菌阳性率的影响

目的探讨结核门诊病人标本留取质量对于抗酸杆菌的涂阳率的影响。方法痰标本经过,结核厚涂片法,萋尼氏染色,对比各种性状的痰标本与抗酸杆菌涂阳率的关系。结果干酪样标本最高脓性痰标本的次之,后面为血痰,唾液性痰涂阳率最低。结论重视结核门诊病人的留取痰标本前的干预与正确的指导,提高合格痰标本的送检率对于抗酸杆菌涂阳率至关重要。

提高抗酸杆菌痰涂片镜检阳性率方法探讨及应用评价

目的探讨提高抗酸杆菌痰涂片镜检阳性率的方法,为发现更多传染源,减少结核病的传播提供科学依据。方法对标本分别采用直接法和消化离心沉淀法进行涂片,经萋-尼氏染色镜检,比较两法涂片阳性率。消化离心沉淀处理的标本再分别经荧光染色、LED镜检和萋-尼氏染色镜检结果对比,并对两法差异结果进行分析评价。结果 158份唾液痰分别用直接涂片和消化离心沉淀法涂片,经萋-尼氏染色镜检,涂片阳性率分别为2.53%和10.76%,204份粘液痰阳性率分别为5.88%和13.73%,396份干酪痰阳性率分别为16.92%和19.19%,62份血痰阳性率分别为9.68%和14.52%。唾液痰与粘液痰阳性率结果差异有统计学意义(P<0.01),干酪痰与血痰阳性率差异无统计学意义(P>0.05),而两法合计阳性率结果差异有统计学意义(P<0.01)。上述标本全部经消化离心沉淀法处理后涂片,分别用萋-尼氏染色光镜镜检和荧光染色LED荧光镜检,唾液痰、粘液痰、干酪痰和血痰阳性率依次提高了5.06%、4.41%、5.05%与4.83%。每种不同性状标本两法阳性率结果差异无统计学意义(P>0.05),而两法合计阳性率结果差异有统计学意义(P<0.05)。对两法阳性差异结果比较,荧光染色1+,而萋-尼氏染色仅只能判为1+以下的标本27份,荧光染色判为2+,而萋-尼氏染色判为2+以下的标本30份,荧光染色判为3+,而萋-尼氏染色判为3+以下的标本18份。结论对痰标本采用消化离心沉淀法进行涂片,再配合荧光染色、LED荧光显微镜镜检是一种能提高抗酸杆菌涂片阳性率、且操作简单、适合基层开展的方法。

痰检点痰涂片抗酸杆菌镜检阳性漏检分析

目的为提高结核病痰涂片镜检的工作质量,提高结核病人的涂阳发现率,满足结核病防治工作的需要。方法 2010年对湾里区内痰检点进行盲法复检,分析痰涂片镜检阳性漏检的原因并提出措施。结果抽检各查痰点保存的痰涂片136张,其中阳性44张,阴性92张,出现量化误差6张,占阳性痰涂片的13.6%;低假阴性痰涂片4张,高假阴性痰涂片1张,阳性漏检率11.7%,漏、错检现象较严重。结论应加强操作人员的技术培训,提高工作责任感。痰检时严格按要求操作,控制痰标本的采集质量,提高痰涂片制作水平,做好镜检,提高痰涂片镜检的阳检率。