MB染色检测PKA调节亚基对烟曲霉萌发孢子活性的影响

烟曲霉是一种机会性致病真菌,肺巨噬细胞(AM)通过活性氧物质(ROS)清除萌发的烟曲霉孢子。蛋白激酶A(PKA)参与调节多种生物体内的氧化损伤应答反应。本实验通过亚甲基蓝(MB)染色和再培养试验,检测烟曲霉野生株(WT)与PKA调节亚基(pkaR)缺失株(ΔpkaR)萌发孢子的活性,分析pkaR基因对烟曲霉萌发孢子抗氧化损伤的影响。实验结果表明,ΔpkaR株的萌发孢子,对于氧化压力有更强的抵抗能力,表明pkaR基因参与调节烟曲霉对于氧化损伤的抵抗。

温度、光照对秋葵褐腐病病原菌菌丝生长、孢子萌发的影响及其田间药剂防治效果评价

了解病原菌在不同环境下生活的状态,是控制病害流行的基础。为了解褐腐病菌在黑龙江地区的发生条件,并找到有效的防治药剂,采用室内试验对影响菌丝和孢子萌发的温度、光照条件进行研究,并对6种药剂防治秋葵褐腐病的田间防治效果进行评价。室内试验结果表明:秋葵褐腐病病原菌菌丝在15~40 ℃条件下均可生长,而产孢温度为20~30 ℃;30 ℃条件下菌丝生长速度最快,产孢量最高,均分别显著高于其他条件下的菌落直径和产孢量。光照不利于菌丝生长,但有利于产孢;在0 h光照下菌丝生长最快,菌落直径最长,第3天达7.85 cm,但产孢量最低,为1.04×10^(7)个/mL,均分别与其他处理有显著性差异;24 h光照处理第3天菌落直径(7.15 cm)显著小于其他2个处理,而病原菌产孢量最大(4.64×10^(7)个/mL),显著高于其他2个处理。孢子萌发的最适温度是30 ℃,在此温度下2 h就可以完成孢子萌发,在25 ℃条件下5 h时孢子才开始萌发,在20 ℃条件下24 h后孢子仍无萌发迹象。通过田间试验,筛选出50%烯酰吗啉水分散粒剂、20%腐霉利悬浮剂和72%霜脲·锰锌可湿性粉剂这3种药剂对秋葵褐腐病的防治效果较好,其中,50%烯酰吗啉水分散粒剂600倍液、1 200倍液分别较对照药剂10%多抗霉素可湿性粉剂600倍液显著提高15.2百分点、14.2百分点,分别较对照药剂1 200倍液显著提高13.8百分点、12.8百分点;20%腐霉利悬浮剂600倍液、1 200倍液防治效果分别较对照药剂600倍液显著提高9.3百分点、11.8百分点,分别较对照药剂1 200倍液显著提高8.3百分点、10.8百分点;72%霜脲·锰锌可湿性粉剂防治效果也显著高于对照药剂。综上,秋葵褐腐病发生的适宜温度为25~30 ℃,黑龙江地区主要发病时期在6月末—7月初,生产中可选用50%烯酰吗啉水分散粒剂、20%腐霉利悬浮剂、72%霜脲·锰锌可湿性粉剂在病害发生初期交替进行防治,每7 d喷雾1次,连续施药3次,可有效控制病害的发生。

解淀粉芽胞杆菌YN-J3对禾生炭疽菌孢子萌发和附着胞形成的影响

燕麦炭疽病是由禾生炭疽菌Colletotrichumcereale引起的作物病害,可以危害植株地上部。为研究解淀粉芽胞杆菌Bacillus amyloliquefaciens YN-J3对禾生炭疽菌的抑菌作用机理,用菌株YN-J3代谢液、菌体悬浮液、代谢物处理和培养皿对扣熏蒸处理禾生炭疽菌分生孢子,并对孢子萌发率和附着胞形成率进行测定。结果表明,经菌株YN-J3代谢液直接处理的禾生炭疽菌分生孢子形成的不正常附着胞体积变大,没有黑色素沉积。透射电镜观察发现,禾生炭疽菌不正常附着胞的细胞壁疏松、质膜崩溃、细胞器解体、细胞质空泡化。YN-J3菌株菌体悬浮液抑制禾生炭疽菌分生孢子萌发、附着胞形成的EC50值为1.14×10^(5)、1.91×10^(4) cfu/mL。将YN-J3菌株菌体悬浮液和禾生炭疽菌分生孢子用0.22μm滤膜隔开培养,禾生炭疽菌分生孢子萌发和附着胞形成比例明显下降,10~8 cfu/mL菌体浓度下30 h形成不正常附着胞比例为15.67%。菌体代谢液的乙酸乙酯抽提液能够完全抑制分生孢子萌发和附着胞的形成。与菌株YN-J3菌体对扣培养30 h的分生孢子不萌发。以上结果表明,解淀粉芽胞杆菌YN-J3菌株的代谢物,能够抑制禾生炭疽菌分生孢子萌发和附着胞形成并产生一种不正常附着胞,菌株YN-J3抑制禾生炭疽菌侵染结构的形成。

濒危植物粗梗水蕨孢子高效无菌萌发及成苗技术

粗梗水蕨(Ceratopteris pteridoides)为一年生蕨类植物,是水体和湿地生态系统中重要成员之一。上世纪80年代以来,由于生存环境受到了严重破坏,我国粗梗水蕨的数量锐减。虽然早在1999年粗梗水蕨就被国务院列为国家二级重点保护濒危植物,但自然界中粗梗水蕨还是越来越稀少,对其进行人工保护势在必行。我们研究并解决了粗梗水蕨孢子无菌培养中的一些主要问题,建立了一套简单、高效的孢子萌发成苗方法。首先,用0.5%有效氯的次氯酸钠消毒孢子5 min,在含3 mL/L抗菌剂Plant Preservation Mixture^(TM)(PPM)和20 g/L蔗糖的1/2 MS液体培养基中培养5周;然后,将孢子萌发形成的培养物转到含20 g/L糖和6 g/L琼脂的1/2 MS培养基上培养1个月,得到大量的幼孢子体(幼苗);最后,将幼苗转到新鲜的含20 g/L糖和6 g/L琼脂的1/2 MS培养基上,1个月后可长成健壮的大苗。2021年组培苗投放到野外保护区后能正常生长和形成孢子,次年部分孢子自然萌发形成了新的植株。

中华缩叶藓孢子萌发与原丝体发育特征研究

通过室内人工培养中华缩叶藓的孢子,在光学显微镜下详细观察了其孢子萌发、原丝体发育及配子体发生的全过程.结果表明:中华缩叶藓的孢子在壁内萌发,随后分裂产生块状原丝体;块状原丝体上可产生两种丝状体,一种是具疣的棒状原丝体,另一种是由长圆柱状细胞组成的轴丝体;配子体原始细胞只产生于块状原丝体上.根据中华缩叶藓的孢子萌发和原丝体发育特征,并参照Nishida对藓类植物孢子萌发类型的划分,确定中华缩叶藓的萌发孢子型应属于缩叶藓型(Ptychomitrium-type).

不同培养条件对尖孢镰刀菌苜蓿专化型分生孢子形成及萌发的影响

为明确有利于尖孢镰刀菌苜蓿专化型(Fusarium oxysporum f.sp.medicaginis,Fom)分生孢子形成及萌发的培养条件,本研究通过十字交叉法测量Fom菌株在马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)、合成低营养琼脂(SNA)和羧甲基纤维素钠(CMC)固体培养基培养不同时间的菌落直径,并通过镜检法和血球板计数法观测以上不同固体及其液体培养基(不加琼脂)培养不同时间的分生孢子产量、比例,以及不同液体培养基中菌株分生孢子萌发率。结果发现,CMC培养基上菌株生长最快(P<0.05)。PDA培养基培养分生孢子产量最高(P<0.05),固、液体培养基分别为(1.05×10^(6))~(7.63×10^(6))和(5.01×10^(6))~(9.49×10^(6))个·mL^(−1),且小分生孢子比例总体相对较高;CMC培养基上大型分生孢子比例最高(P<0.05),固、液体培养基上分别为0.85%~4.40%、2.32%~5.63%。PDA、SNA液体培养基培养分生孢子萌发率较高,且时间越长萌发率越高,培养48 h时分别可达35.98%、47.32%。由此可见,CMC固体培养基有利于Fom生长,其液体培养基诱导菌株大型分生孢子形成效果较好;PDA液体培养基有利于诱导分生孢子形成,尤其是小分生孢子;SNA液体培养基更利于分生孢子萌发。本研究为防治苜蓿镰刀菌根腐病及有关机理研究提供了前期基础。

六种杀菌剂对烟草赤星病菌菌丝生长和分生孢子萌发的抑制作用

采用菌丝生长速率法和孢子萌发法测定了烟草赤星病菌Alternaria alternata对6种杀菌剂(氟硅唑、异菌脲、菌核净、嘧菌酯、醚菌酯及多菌灵)的敏感性。结果表明:6种杀菌剂对烟草赤星病菌菌丝生长和分生孢子萌发均表现出了不同程度的抑制活性。其中,对菌丝生长抑制活性最强的是氟硅唑,EC50平均值为(0.34±0.11)mg/L,其次为菌核净[(1.13±0.68)mg/L]和异菌脲[(2.08±0.24)mg/L];对分生孢子萌发抑制活性最强的是嘧菌酯协同100 mg/L水杨肟酸,EC50平均值为(0.28±0.09)mg/L,其次分别为单独处理的嘧菌酯[(5.79±2.76)mg/L]、醚菌酯[(11.93±3.93)mg/L]、菌核净[(19.95±15.94)mg/L]和异菌脲[(23.33±11.33)mg/L]。多菌灵对烟草赤星病菌菌丝生长和分生孢子萌发的抑制活性均最差,不宜用于烟草赤星病的防治,而异菌脲、氟硅唑、嘧菌酯和醚菌酯均有必要进一步针对烟草赤星病进行田间防效试验。

光照、温度和pH值对小黑桫椤孢子萌发及早期配子体发育的影响

小黑桫椤(Alsophila metteniana)被列为我国国家二级保护植物。为探讨其种群数量下降原因,作者采用无菌培养方法和显微观察技术,在实验条件下研究了光照强度、光质、温度和pH值对小黑桫椤孢子萌发及早期配子体发育的影响。结果表明:孢子萌发和配子体发育的最适光照强度为40-70μmol·m-2·s-1,全黑暗时孢子不萌发;白光、红光、黄光和蓝光下的萌发率分别为68.78%、65.66%、63.74%和7.51%;白光和蓝光下配子体可以形成正常的心形原叶体,红光和黄光下配子体发育一直处于丝状体阶段。孢子萌发和配子体发育需要在酸性土壤进行(pH值在3.7-6.7);孢子萌发的适宜温度为20-30℃。从孢子接种到心形原叶体形成需要55d左右。根据上述结果,我们认为光照强度是小黑桫椤孢子萌发的必需条件,光质是限制小黑桫椤孢子繁殖的重要原因;光质、温度和pH值等环境因子的作用和配子体发育时间等是导致小黑桫椤种群数量日趋减少的主要原因。

十种杀虫剂对布氏白僵菌孢子萌发和菌落生长的影响

白僵菌与杀虫剂科学混用是提高白僵菌杀虫效果的有效措施。本文研究了布氏白僵菌菌株NEAU30503孢子与10种常用杀虫剂混合不同时间后对其孢子萌发和菌落生长的影响。结果表明,杀虫剂种类、混合浓度和时间均能影响孢子萌发和菌落生长,但存在较大差异。几乎所有供试杀虫剂随混合浓度的增加,对孢子萌发的抑制作用有增强趋势;高效氯氟氰菊酯、啶虫脒对孢子萌发影响较小,辛硫磷和氧乐果对孢子萌发影响较大。大多数杀虫剂随混合时间延长,对孢子萌发的抑制作用明显增强;而高效氯氟氰菊酯和毒死蜱与孢子混合1和5 d对孢子的萌发没有明显差异。啶虫脒对菌落生长的抑制作用最小,辛硫磷对菌落生长的抑制作用最强。在供试的10种杀虫剂中,啶虫脒和拟除虫菊酯类杀虫剂与NEAU30503相容性较好。研究结果为布氏白僵菌与杀虫剂的合理混用使用提供了依据。

光照和温度对尖叶拟船叶藓孢子萌发及原丝体发育的影响

用组织培养法和光学显微镜技术初步研究了光照和温度对尖叶拟船叶藓孢子萌发及原丝体发育的影响。结果表明:(1)光照是影响孢子萌发的主要环境因子,20℃环境下,24h光照4d的孢子萌发率达83.3%;同温度下黑暗培养的孢子30d也不能萌发,转光照后4d的萌发率可达84.6%;(2)温度是影响原丝体发育的主要环境因子,连续光照下,20℃的原丝体生长最快、分枝最多、分化最早,第31天可长达651.64μm;25℃次之,只有379.12μm;而自然光照下5～10℃环境下的孢子萌发率(18d为70.2%)和原丝体生长速度(127.44μm)均最慢;(3)原丝体发育到一定阶段,断裂为单个细胞,单个细胞再萌芽出新原丝体。

吉林省玉米灰斑病重要流行环节的初步研究 Ⅰ孢子萌发、病斑潜育扩展和寄主抗侵染

对玉米灰斑病的重要流行环节——孢子萌发、病斑潜育扩展和寄主抗侵染进行了研究。结果表明：分生孢子在清水中就能够萌发，但未见附着胞形成；花粉和叶面物质对孢子萌发有促进作用。孢子抗干燥能力较强，萌发孢子须经3-4d干燥才完全丧失存活能力。对灰斑病菌孢子萌发抑制作用较强的杀菌剂有百菌清、甲基托布津、大生、多菌灵等。病害潜育期较长，潜育期随玉米生育期推进而增长，在不同品种上潜育期为11-18d。病斑长度（Y）和病斑13龄（x）的关系大体为对数曲线，回归方程为y=0．2635＋5．163ln（x＋1）。随着玉米生育期的推进，抗侵染力逐渐增强。施用氮、磷、钾肥可在一定程度上增强玉米的抗侵染力。

采用孢子萌发法测定化合物对黄瓜白粉病菌的生物活性

接种黄瓜白粉菌后16 h的黄瓜叶片用透明胶带在子叶表面粘孢子取样的平均发芽率与用台盼蓝染色后在光学显微镜下调查的发芽率分别为83.7%和85.0%,t测验无显著差异,表明透明胶带取样的发芽率可以代表黄瓜叶片上白粉病菌孢子的发芽率。采用孢子萌发法和叶碟法分别测定了醚菌酯、植物源活性组分大黄素甲醚(P3D)对8个黄瓜白粉菌菌株的EC50。统计结果表明:采用两种方法测定醚菌酯P、3D对黄瓜白粉菌的EC50的相关系数的平方值分别为0.880、.99,表明两种方法的测定结果有很强的相关性;采用该孢子萌发法可评价化合物对植物专性寄生病菌如白粉菌孢子萌发的生物活性。

紫茎泽兰对金毛狗孢子萌发和配子体发育的化感作用

紫茎泽兰是我国外来入侵物种中危害最为严重的植物之一,广泛分布于我国西南地区,并有向东南部和中南部蔓延的趋势。本土濒危蕨类植物金毛狗的种群正受到紫茎泽兰的威胁。本研究将金毛狗的成熟孢子分别接种在含有不同浓度的紫茎泽兰根、茎、叶水提液的培养基上,观察记录金毛狗的孢子萌发和配子体发育过程。研究结果表明,紫茎泽兰根、茎、叶水提液均可对金毛狗的孢子萌发和假根生长产生抑制作用,表现为孢子萌发延迟,萌发率有所降低,假根伸长受到抑制,上述抑制作用随水提液浓度升高而增强。其中,叶水提液的抑制作用最强,随着叶水提液浓度的升高,配子体发育阶段滞后。由此可见,紫茎泽兰对金毛狗的孢子萌发和配子体发育具有化感作用。

温度、相对湿度和pH对蜜蜂球囊菌孢子萌发的影响

研究了温度、相对湿度和 pH对蜜蜂球囊菌 (Ascosphaeraapis)孢子萌发 3个阶段 (活化、膨大、产生萌发管 )的影响 .结果表明 ,孢子活化和膨大在 15～ 40和 (2 5～ 40 )± 0 5℃范围内受温度的影响不明显 (P >0 0 5 ) ;萌发管仅发生在 2 5～ 37± 0 5℃ ,最适温度位于 (31～ 35 )± 0 5℃ .相对湿度越大 ,越有利于孢子萌发 ,而相对湿度低于 80 %对孢子萌发极为不利 .孢子萌发的 3个阶段在 pH为 5～ 7 8时几乎不受 pH变化的影响 ,而在 pH值较低影响很大 .可见 ,A .apis是一种高度专一的蜜蜂幼虫病原体 .

我国甘蔗梢腐病2种主要病原菌孢子萌发特性及品种(系)抗性评价

研究国内甘蔗梢腐病两种主要病原菌Fusarium verticillioides和F.proliferatum的分生孢子萌发特性,并对18个代表性甘蔗种质资源进行梢腐病抗性评价,为甘蔗梢腐病综合防控提供参考。结果表明:F.verticillioides在孢子浓度4×10~6、温度20℃、葡萄糖浓度0.02%、黑暗、pH 6.5、相对湿度80.00%条件下孢子萌发率最高;F.proliferatum在孢子浓度8×10~6、温度35℃、葡萄糖浓度0.05%、紫外光、pH 6.5、相对湿度80.00%条件下孢子萌发率最高。18份参试甘蔗品种(系)中16份属于梢腐病抗性材料,只有GT 37和GT 21表现出明显感病特征。F.verticillioides病原菌分生孢子萌发力和致病性强于F.proliferatum。利用两个病原菌筛选出来的2个感病品种(系)GT 37、GT 21及3个高抗品种(系)Q 202、ROC 1、YT 94-128可作为典型种质材料来进行抗感试验。

澳洲坚果根系溶提物对AM真菌孢子萌发和菌丝生长的影响

澳洲坚果(Macadamia integrifolia)根系甲醇溶提物影响离体培养条件下丛枝菌根真菌孢子生长发育的试验结果表明,澳洲坚果根系甲醇溶提物对离体条件下丛枝菌根真菌(Glomus mosseae和Gigaspora margarita)孢子生长发育有明显的促进作用,能显著提高孢子萌发率,增加菌丝长度.浓度为20%～100%的甲醇溶提物均可显著促进丛枝菌根真菌孢子的生长发育,其孢子萌发率和菌丝长度均显著高于对照,60%的甲醇溶提物效果最明显.Glomusmosse和Gigasporamargarita孢子萌发率随着甲醇溶提物浓度的升高而增加,60%甲醇溶提物孢子萌发率达到最高,分别为81.7%和76.0%.Glomus moscae和Gigaspora margarita孢子菌丝长度也表现为随洗脱剂浓度的升高,菌丝生长呈先增强后减弱趋势,洗脱剂浓度为60%时菌丝长度达最长,分别为31.2和28.0 mn.澳洲坚果根系甲醇溶提物中含丰富的黄酮类物质,其含量与甲醇洗脱剂的浓度有关,当浓度为60%时,黄酮类物质含量最高.通过对澳洲坚果根系甲醇溶提物中黄酮类物质含量与丛枝菌根真菌孢子生长发育的相关性分析发现,甲醇溶提物中黄酮类物质含量与离体条件下丛枝菌根真菌孢子的生长发育表现为极显著的正相关.甲醇溶提物中黄酮类物质含量越高,其对丛枝菌根真菌孢子的生长发育促进作用越大.

灰葡萄孢产孢和孢子萌发条件

以灰葡萄孢(Botrytis cinerea)菌株B05.10为试验材料,研究了培养基、温度、pH值以及某些营养因子对菌丝生长、产孢量和孢子萌发率的影响。结果表明,B05.10菌株在PSA培养基、pH 6.0,22℃培养7 d时产孢量最多达到1500×104cfu/皿;在1%水琼脂、pH 5.0,22℃条件下4 h时灰葡萄孢孢子开始出现萌发管,12 h时萌发管转变形成分枝的菌丝,添加木糖、果糖和可溶性淀粉等营养因子对提高孢子萌发率也有明显促进作用。

温度对绿僵菌LA菌株孢子萌发、酶活力及毒力的影响

为明确温度对绿僵菌LA菌株生物学特性和毒力的影响,采用微室萌发、酶标仪测定A值以及体外涂抹法,对不同温度下LA菌株孢子萌发率、胞外蛋白酶、几丁质酶活力以及对东亚飞蝗的毒力进行了测定,结果表明:LA菌株在30℃下孢子萌发速率最快,对东亚飞蝗的致死速率也最快;38℃下培养,孢子萌发率开始受到限制,40℃下培养孢子的萌发率接近于0;高温处理转至适温培养,对孢子萌发速率产生一定影响,48℃下处理不同时间,孢子萌发速率、萌发率均显著降低,转至30℃下培养24h仅有10.6%～20.9%的孢子可萌发;LA胞外蛋白酶活力培养至第6天达到最高,为31.37U/mL,不同温度下活力测定表明37℃下胞外蛋白酶活力最高,几丁质酶在培养至第5天酶活力达到最高,为34.62U/mL,最高酶活温度为50℃。

氰烯菌酯对禾谷镰孢菌分生孢子萌发及菌丝生长的影响

氰烯菌酯（2-氰基-3-氨基-3-苯基丙烯酸乙酯,JS399-19）是一种对禾谷镰孢菌Fusarium graminearum具有专化活性的新型杀菌剂。离体条件下,采用菌丝生长速率法测定了该药剂对禾谷镰孢菌抗性菌株和敏感菌株的生长抑制活性;同时采用孢子萌发法测定了其对禾谷镰孢菌分生孢子萌发的影响。结果表明,氰烯菌酯能够强烈地抑制禾谷镰孢菌敏感菌株菌丝的生长,EC50值分布在0.092~0.141μg/mL之间;并可降低敏感菌株分生孢子的萌发速率,以及影响其萌发的方式,使芽管从分生孢子基部和中间细胞萌发的比率增加;同时氰烯菌酯使敏感菌株分生孢子膨大、畸形,并使其芽管肿胀、扭曲,明显抑制其芽管的伸长生长;但对抗性菌株的抑制作用和致畸作用不明显。

丛藓科18种藓类植物孢子萌发与原丝体发育特征研究

比较系统地对丛藓科11属18种藓类植物孢子萌发和原丝体发育过程进行研究,分析了其发育过程中的不同特征.参照Nishida对藓类植物孢子萌发和原丝体发育类型的划分标准,将丛藓科18种藓类植物的原丝体发育类型划分成真藓型(Bryum-type)、光藓型(Schistostega-type)、虎尾藓型(Hediwigia-type)和蓑藓型(Macromitrium-type)4种孢子萌发型.根据孢子萌发型的特点,探讨分析了孢子萌发型与丛藓科植物的系统进化、生态适应和生殖策略之间的关系.