汉中地区天麻萌发菌遗传多样性和促萌效果分析

以汉中地区9株天麻萌发菌及天麻花粉种子为试材,采用拮抗试验、ITS序列测定、酯酶同工酶技术和种子拌播等方法,研究了9株天麻萌发菌的遗传多样性、亲缘关系和促萌效果,以期为天麻萌发菌的种质资源管理与评价等提供参考依据。结果表明:9株萌发菌根据两两拮抗试验的程度不同分为不显著、显著和极显著3类;根据ITS序列的差异分为Mycena sp.和Heydenia sp.2类;根据酯酶同工酶酶谱条带在80%的相似水平上可分为5类;9株萌发菌与天麻种子共生萌发,其中C3菌株菌丝生长速度最高为(0.30±0.01)cm·d^(-1),C2菌株的萌发率最高为64.66%±2.89%,C2和C3菌株的综合表现最佳。

不同蒴果密度及萌发菌和蜜环菌配比对天麻零代种生产影响试验

天麻萌发菌和蜜环菌是在天麻种子萌发和生长时为其提供营养来源的共生菌和伴生菌,两者配比不同直接影响到天麻零代种的产量。本试验通过不同蒴果密度及萌发菌和蜜环菌配比,探究对零代种的产量、零代种分级产量占比的影响,结果表明萌发菌与蜜环菌配比比例为1∶3,且天麻蒴果用量为18~24个/m^(2)时,天麻零代种产量最高。

苯酚硫酸法测定萌发菌HL-003多糖方法的研究

为确定苯酚硫酸法测定萌发菌HL-003多糖的最佳参数。选取苯酚浓度和浓硫酸量为自变量,检测不同苯酚浓度和浓硫酸量下的最大吸收波长和吸光值,从而确定最佳的苯酚浓度和浓硫酸量,在此基础上检验方法的显色时间、精密度、线性范围和回收率。结果表明：最佳苯酚浓度为5%,浓硫酸量为3.5 mL,最大吸收波长为488 nm,显色时间15 min;葡萄糖浓度在0-200 mg/mL范围内线性良好;在优化方法下进行精密度实验,葡萄糖、胞内多糖和发酵液多糖测定结果的相对标准偏差（RSD）分别为0.474%、1.015%和0.712%,测定结果稳定可靠;本方法对葡萄糖和葡聚糖的回收率均在99.10%以上,回收率高,与真实值吻合;通过测定,萌发菌HL-003胞内和发酵液多糖的含量分别为2.028%和2.998 g/L。

昭通天麻种子萌发菌的筛选

自昭通本地野生乌天麻原球茎上分离获得的两株天麻种子萌发菌(SNm-01、SNm-02)。研究了它们的生长特性及促进天麻种子萌发的效果。结果显示,两株菌的生长特性相似,在PDA上生长时,菌落白色、绒毛状,菌丝分枝、无色透明,具有分隔和锁状联合,均具有气生菌丝。SNm-01菌落生长速度较快,室内促天麻种子萌发效果好。与传统的天麻种子播种方法相比,SNm-01在野外林间大田萌发试验中表现优良,天麻种子的萌发率较高,空穴率为零,原球茎平均这100个/塘,而且对萌发后原球茎的生长也具有较好的促进作用,所以菌株SNm-01是一株优良的昭通本地萌发菌。

萌发菌HL-003胞内多糖的提取及抗氧化性研究

采用乙醇沉淀法提取多糖,在单因素试验基础上进行正交试验,探讨萌发菌HL-003胞内多糖提取的最佳条件;分别采用Fe2+/H2O2体系和邻苯三酚自氧化法探讨多糖清除羟基自由基和氧自由基的能力。结果表明,最佳提取条件为液料比20∶1(m L∶g)、提取时间1.5 h、提取温度70℃、乙醇体积分数80%,其最佳提取率为7.63%;萌发菌HL-003胞内多糖对羟自由基和氧自由基清除作用明显,是一种良好的天然抗氧化剂。

紫萁小菇等天麻种子萌发菌分离方法的研究

1979～1981年间,从天麻种子发芽的原球茎中,共分离到紫箕小菇等12种可供给天麻种子萌发营养的菌株,证明在自然条件下.天麻有性繁殖阶段,必须同化紫萁小菇等萌发菌获得营养才能发芽。

基于形态学特征和ITS序列分析秦巴山区天麻萌发菌的亲缘关系

利用拮抗试验,萌发试验和ITS序列分析技术对秦巴山区12个天麻萌发菌菌株进行了亲缘关系分析。结果表明:12个萌发菌菌株分为两大类,其中8103-4、8103-6、8103-7、8103-8这4个菌株与其他菌株拮抗反应明显,并且ITS序列分析显示在同一个分支上,亲缘关系相近;萌-3、萌-7、萌MD-2、萌发菌、石斛-1、石斛-2、萌-云南此8个菌株拮抗反应不明显,ITS序列分析显示在同一个分支上,8103-3、萌发菌与标准菌种Mycena citrinomarginata亲缘关系相近,萌MD-2、石斛小菇-1、萌-3、萌-7、石斛小菇-2、萌-云南与Mycena purpureofusca亲缘关系相近。

紫萁小菇等天麻种子萌发菌的筛选

通过逐级筛选和接菌播种后天麻种子发芽率、原球茎生长速度及天麻产量的比较,证明紫萁小菇是目前天麻种子萌发菌中最优良的菌株。

一株乌天麻共生萌发菌培养条件的优化

以天麻共生萌发菌MY-001为试材,采用单因素试验和正交实验分析法,以菌丝生长速率和菌丝体生物量为主要指标,对萌发菌MY-001培养环境条件及培养基营养条件进行优化。结果表明:MY-001最适宜的环境条件为温度25℃,培养基质含水量200%下进行暗培养;MY-001最易利用的氮源和碳源分别是酵母膏、葡萄糖,复合维生素B也能促进菌丝生长,最佳的营养条件为酵母膏3g·L^(-1)、葡萄糖20g·L^(-1)、复合维生素B 0.005g·L^(-1),通过多元回归分析建立回归方程(Y=0.362+0.084A-0.014B-0.007C),方差分析显示方程为极显著。

天麻萌发菌株的生物学特性研究

对4个天麻种子萌发菌菌株在不同培养条件下菌丝的生长进行了研究。结果显示,4个天麻萌发菌的最佳生长温度为25℃,适宜生长的pH值范围为5.0-6.0,最佳培养基为木屑-麸皮培养基。

天麻萌发菌源病原菌的分离鉴定及其拮抗菌株筛选

以染病长白山乌杆天麻萌发菌为试材,通过组织分离法、形态学鉴定法、ITS分子鉴定法及平板对峙法,研究了侵染天麻萌发菌的病原菌种类及其拮抗菌株,以期为长白山乌杆天麻萌发菌的病害防治和种子田间有性繁殖提供参考依据。结果表明:从侵染天麻萌发菌袋的病原菌中分离鉴定出5株真菌,分别为2株哈茨木霉(Trichoderma harzianum),2株深绿木霉(Trichoderma atroviride),1株尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum);6株植物内生菌均为这5株病原菌的拮抗菌,其中多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)拮抗作用最强。

天麻共生萌发菌栽培种生产工艺条件优化

经试验对天麻共生萌发菌MY-001的栽培种生产的工艺条件进行了优化,结果显示,既能降低生产成本又能提高生产效率的液体发酵条件为:液体菌种培养器的气压为0.020MPa,发酵液主要成分中红糖、麦麸和蛋白胨的最佳比例为红糖10g/L、麦麸15g/L、蛋白胨1g/L,萌发菌菌丝生物量随时间的变化符合逻辑斯蒂增长模型,其观测值与逻辑斯蒂方程拟合值的拟合度较高(R2=97.7%),发酵培养144h后生物量趋于稳定,栽培种基质最合适的比例为壳斗科植物树叶60%、阔叶树木屑30%和麦麸10%。

天麻小菇属萌发菌生产技术

简要介绍了萌发菌的生活特性,并从菌种分离、鉴定、培养等方面介绍了萌发菌的生产技术,以指导实际生产。

昭通乌天麻共生萌发菌优良菌株筛选试验

研究了自昭通本地分离获得的4株天麻共生萌发菌的生长特性和对昭通乌天麻产量的影响,并与一株外地优良天麻共生萌发菌8103进行了对比。结果表明:各菌株间存在明显差异,菌丝平均生长速率和生物量依次为8103>MH-013>MY-001>XCB017>MY-002;室内萌发试验显示拌种乌天麻种子后萌发效果依次为MY-001>MH-013>8103>MY-002>XCB017,拌种MY-002后种子的生长势最好,MY-001次之;大田栽培试验表现最好的是MH-013,其次为MY-001和8103,MY-002和XCB017较差。4株昭通天麻共生萌发菌中MH-013和MY-001较适合在昭通乌天麻有性繁殖生产中大面积推广。

天麻蜜环菌和萌发菌的分离培养

天麻属兰科植物,无根无叶,是一种较特殊的异养型植物。种子的萌发是从紫箕小菇或其它萌发真菌中获得营养,而其成株球茎则靠从蜜环菌获得营养。天麻蜜环菌和萌发菌在人工培养条件下会出现退化,需要更新,必须从自然界进行新菌种的分离培养工作。本文主要介绍这两种真菌的一些分离培养技术。

应用多目标决策法对天麻种子萌发菌的评价

研究了5株萌发菌菌株的7个单一性状,结果显示,不同菌株各性状存在明显差异。为避免采用单一性状指标判断菌株的优劣造成偏差,运用基于熵权的多目标决策分析模型,结合模糊数学和熵的思想,对菌株进行综合评价,结果显示,5株萌发菌菌株由优到劣依次为MY-001>MH-013>8103>MY-002>XCB017,为优良菌株的筛选提供了理论依据。

耐高温萌发菌胞外酶活性与天麻种子萌发的关系

为探究耐高温萌发菌在模拟夏季高温条件下漆酶、木聚糖酶、淀粉酶和纤维素酶的活性与天麻种子萌发的关系。对4株萌发菌进行递增式耐高温驯化,采用2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)(ABTS)法、二硝基水杨酸(DNS)法测定萌发菌胞外酶活性,水琼脂法进行天麻种子萌发试验。结果表明,各菌株之间的酶活性及各菌株之间天麻种子萌发率存在明显差异,经过驯化的耐高温萌发菌4种酶活性和天麻种子萌发率均极显著高于各自对应亲本萌发菌(P<0.01),其中漆酶、木聚糖酶、淀粉酶、纤维素酶活性最高的分别是耐高温萌发菌SH-1、MDA-1、MDC-1、SH-1,酶活性依次为1 000.00、1062.35、402.90、40.91 U/L,天麻种子萌发率最高的是耐高温萌发菌SH-1,萌发率为71.76%,酶活性与天麻种子萌发率相关性最高的是木聚糖酶,相关系数为0.720。说明天麻种子萌发受温度、胞外酶种类及活性等多种因素共同调控,耐高温萌发菌表现出了更高的酶活性,促进天麻种子萌发,且木聚糖酶是影响天麻种子萌发的关键胞外酶。

天麻萌发菌胞外酶活性变化规律研究

目的:研究天麻萌发菌03、06菌株不同时期的胞外酶活性变化规律及菌株生长速度,为天麻有性繁殖优良萌发菌菌株筛选提供理论依据。方法:利用木屑-麦麸培养基培养菌株03和06,测量生长量,采用2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(ABTS)法和3,5-二硝基水杨酸(DNS)法测定不同生长时期2种菌株胞外酶活性。结果:培养前期2种菌株生长速度逐渐增加,03菌株生长速度大于06菌株,后期2种菌株生长速度有所减缓。漆酶和木聚糖酶是天麻萌发菌生长过程中活性较强的胞外酶,06菌株木聚糖酶活性和淀粉酶活性均高于03菌株。结论:通过对2种菌株生长速度、胞外酶活性的比较和分析,初步认为03为优势菌株。