用三氧化硫磺化制备1,3,6-萘三磺酸——H酸的工艺改进

一、前言 H酸是染料工业重要的中间体,每年国内和国外需要量都很大。在H酸的生产中,磺化是关键的单元操作。通常采用无水硫酸与精萘磺化得到一磺酸(主要是β-位),然后用65％发烟硫酸进行二磺化、三磺化,得到萘三磺酸化合物。这种磺化工艺的缺点是耗用大量的硫酸。

HPLC/MS测定8-硝基-1,3,6-萘三磺酸加氢还原的中间产物

建立了8-硝基-1,3,6-萘三磺酸(硝基T酸)加氢还原的中间产物的HPLC/MS的分析方法。液相色谱条件如下:Hypersil ODS2色谱柱(5μm,4.6 mm×250 mm),流动相为V(甲醇)∶V(水)∶V(乙酸)∶V(三乙胺)=7∶92.1∶0.6∶0.3,流速0.5 mL/min,检测波长234 nm。采用面积归一化法对样品进行定量分析,采用液质联用鉴定硝基T酸加氢还原的中间产物。该方法可用于监测硝基T酸加氢还原的生产过程,并为其它磺酸类化合物的定量和定性分析提供借鉴。

基于双功能荧光标签8-氨基1,3,6-萘三磺酸的N-连接糖基化富集方法

发展了基于双功能荧光标签8-氨基1,3,6-萘三磺酸(ANTS)选择性糖基化蛋白质标记和二氧化钛(TiO2)亲和富集的N-连接糖基化富集新方法.模式蛋白质细胞色素c、肌红蛋白、核糖核酸酶b、抗生素和α-1-抗胰蛋白酶经ANTS标记后,所有糖基化蛋白质均发出亮绿色荧光,而非糖基化蛋白质则不能观测到荧光;进一步采用TiO2对酶切产生的N-连接糖基化肽段进行富集,同时实现了中性糖肽和唾液酸糖肽的选择性富集.通过进一步分析人血清N-连接糖基化蛋白质,共鉴定到39个唯一的N-连接糖蛋白,包括了53个唯一的N-连接糖基化位点;此外,该方法与采用TiO2法直接富集以及肼化学法富集鉴定到的交叠糖基化位点数均小于40%,说明这一新方法与传统方法在糖基化肽段富集方面具有一定的互补性,有望用于复杂蛋白质样品的N-连接糖基化高效富集.

萘三氧化硫磺化制备1,3,6一萘三磺酸反应历程研究

以萘为原料,依次采用100%硫酸及三氧化硫为磺化试剂,制得1,3,6-萘三磺酸,并且对反应历程进行了研究,明确了反应过程中各物种的变化规律.

基于8-氨基1,3,6-萘三磺酸二钠盐的糖基化蛋白质标记方法

发展了基于荧光试剂8-氨基1,3,6-萘三磺酸二钠盐(ANTS)的糖基化蛋白质选择性标记和荧光检测的新方法.实验中以标准蛋白质细胞色素c和核糖核酸酶b为样品,优化了pH和反应时间.在优化的条件下,核糖核酸酶b的检测灵敏度可提高22倍,而非特异性的标记仅为1%,显示了这种衍生方法极好的选择性.进一步将该方法应用于卵清蛋白的衍生,通过结合二氧化钛(TiO2)亲和富集,共鉴定到14个蛋白质,其中超过85%的蛋白质具有一致的N-X-T/S(X为除脯氨酸以外的其他氨基酸)序列,为潜在的糖基化蛋白,进一步验证了该方法的高选择性.

荧光辅助糖电泳的优化

荧光辅助糖电泳(FACE)是一种快捷、花费少的分离糖类方法。寡糖首先经8-氨基萘-1,3,6-三磺酸(ANTS)胺化还原衍生,该反应过程在所给实验条件下需要16 h。然后,经ANTS衍生的寡糖在ρ(丙烯酰胺)=0.32 g/mL、ρ(双丙烯酰胺)=0.024 g/mL组成的碱性分离胶上电泳从而得以分离。该方法无需专门的仪器和操作熟练的技术人员。