山茱萸环烯醚萜苷的化学成分及生物活性研究进展

山茱萸是我国药食两用的大宗药材之一,广泛应用于内外妇儿各类患者及保健品的开发等。山茱萸环烯醚萜苷(cornel iridoid glycosides, CIG)为山茱萸的特征活性成分群,综述近10年的文献报道,已有103种CIG被分离鉴定。研究将对CIG的化学成分、裂解规律、体内代谢产物研究进行归纳总结,并从药理药效、作用通路及分子机制等方面综述CIG在降血糖、神经保护、心脏保护、肝脏保护、肾脏保护、睾丸保护等多种生物活性的研究进展,以期为CIG进一步的研究、开发及应用提供新的思路。

正交-满意度函数优化秦艽黄酮和环烯醚萜苷超声共提取条件

目的:优化秦艽黄酮和环烯醚萜苷超声提取工艺条件。方法:以秦艽黄酮和环烯醚萜苷提取率为考察指标,以乙醇体积分数、料液比、提取温度及提取时间为影响因素,进行单因素试验;采用正交-满意度优化秦艽黄酮和环烯醚萜苷提取工艺。结果:优选出秦艽中黄酮及环烯醚萜苷提取的最佳工艺条件为乙醇体积分数60%,料液比1∶30 g/mL,提取温度60℃,提取时间40 min,在此条件下的提取率黄酮为2.20%,环烯醚萜苷为9.32%,平均满意度为0.997,RSD=0.28%。结论:优选的条件方法简便、高效、易于实现,适合秦艽中黄酮与环烯醚萜苷的提取。

环烯醚萜苷类化合物治疗2型糖尿病及并发症机制研究概述

环烯醚萜苷类化合物是中药有效活性成分之一,目前国内外研究发现其在2型糖尿病及并发症的治疗中发挥积极作用。本文总结近二十年环烯醚萜苷治疗2型糖尿病作用的国内外文献,阐述其相关作用机制。环烯醚萜主要结构类型有环烯醚萜苷、裂环环烯醚萜和环烯醚萜酯,其中环烯醚萜苷是发挥治疗2型糖尿病作用的主要有效成分。本文将从以下四个方面分别论述:环烯醚萜苷可通过调节胰岛素代谢通路蛋白表达以及影响细胞线粒体生物信号改善细胞代谢等方式对2型糖尿病胰岛素抵抗有改善作用;环烯醚萜苷可抑制β细胞中质子载体表达以及促进胰高糖素样肽-1分泌发挥促进β细胞胰岛素分泌作用;环烯醚萜苷可通过降低葡萄糖转运蛋白5抗体的表达以及抑制α-糖苷酶活性起到延缓碳水化合物吸收作用;环烯醚萜苷可通过抑制核因子-κB等转录因子的活性以及清除晚期糖基化终产物,抑制晚期糖基化终末产物通路等途径发挥改善糖尿病炎症水平的作用。本文通过对相关文献进行综述,旨在对环烯醚萜苷治疗2型糖尿病及并发症的临床工作提供理论依据。

血管性痴呆大鼠脑内时钟基因在不同发病时程中的改变及山茱萸环烯醚萜苷的调节作用

目的观察血管性痴呆大鼠脑内时钟基因在不同发病时程中的改变及山茱萸环烯醚萜苷(CIG)的调节作用。方法选取45只SPF级雄性SD大鼠,6~8周,体重150~180 g,选取15只作为假手术组,其余采用双侧颈总动脉结扎(2VO)术制作慢性脑缺血模型。造模成功后采用随机数字表法将假手术动物分为3组,造模动物分为6组,每组5只。具体为造模1个月组(Sham组、2VO组、2VO+CIG60组、2VO+CIG120组、2VO+丁苯酞组);造模1.5个月组(Sham组、2VO组);造模3个月组(Sham组、2VO组)。造模6 h后2VO+CIG60组灌胃CIG 60 mg/(kg·d)、2VO+CIG120组灌胃CIG 120 mg/(kg·d)、2VO+丁苯酞组灌胃丁苯酞100 mg/(kg·d),Sham组与2VO组灌胃等量的生理盐水。造模后1、1.5、3个月时,取大鼠的下丘脑和中脑检测时钟基因CRY1、PER1、PER2、NPAS2 mRNA的水平,观察时钟基因的改变情况。结果在下丘脑中,与Sham组比较,造模1个月2VO组PER2 mRNA降低(P<0.01);造模1.5个月2VO组时钟基因PER2 mRNA、NPAS2 mRNA升高(P<0.05或P<0.01)。在中脑中,与Sham组比较,造模1个月2VO组CRY1 mRNA、PER1 mRNA升高(P<0.05或P<0.01);造模3个月2VO组PER2 mRNA升高(P<0.05)。在下丘脑中,与Sham组比较,2VO组PER2 mRNA降低(P<0.01);与2VO组比较,2VO+CIG60组NPAS2 mRNA升高,2VO+CIG120组PER1 mRNA降低(P<0.05)。在中脑中,与Sham组比较,2VO组CRY1 mRNA、PER1 mRNA升高(P<0.05或P<0.01);与2VO组比较,2VO+CIG120组CRY1 mRNA降低(P<0.01)。结论血管性痴呆模型大鼠的下丘脑和中脑中时钟基因表达紊乱,引起调节昼夜节律的反馈环破坏,而CIG能纠正下丘脑和中脑时钟基因紊乱表达现象。

基于响应面法优化环烯醚萜苷提取工艺研究

通过响应面法优化秦艽药材中环烯醚萜苷类成分的提取工艺。在单因素试验的基础上,根据响应面法设计,以马钱苷酸、獐牙菜苦苷和龙胆苦苷3种环烯醚萜苷总含量作为考察指标,优化最佳提取工艺条件。研究得出最佳提取工艺条件,即以80%甲醇作为溶剂,温度50℃,超声功率720 W,液料比40 mL:1g,提取时间30 min并连续提取2次。按照此条件,实际测定值和预测值分别为15.562%和15.904%,两者相差2.20%,其结果基本一致。本法操作工艺相对简单,检测结果比较理想,可以为秦艽药材中环烯醚萜苷类的提取工艺提供参考。

不同基原洪连中7种环烯醚萜苷类成分的对比分析

目的建立测定洪连类药材环烯醚萜苷类成分(梓醇、桃叶珊瑚苷、栀子新苷、京尼平苷酸、玉叶金花苷酸、8-表马钱子苷酸、乔木状车前苷酸)的HPLC-DAD含量测定方法,比较不同基原洪连的含量差异,为其质量控制研究提供依据。方法采用Waters Atlantis T3 C_(18)(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱;流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液,梯度洗脱;流速:1.0 mL·min^(-1);检测波长:205 nm(0~42 min)、236 nm(42~80 min);柱温:30℃;进样量:10μL。根据测定结果,使用含量范围、平均值、总量及正交偏最小二乘法判别分析(OPLS-DA)进行比较研究。结果7种基原77批次洪连样品各环烯醚萜苷类成分色谱峰分离度及线性关系均良好。通过比较含量范围、平均值及总量的结果可知,不同基原所含的单体成分既有共性也有差异,而总含量无明显差异;云南兔耳草所含各单体成分均最高。OPLS-DA结果显示,云南兔耳草为一类,短穗兔耳草与全缘兔耳草聚为一类,圆穗兔耳草、短筒兔耳草与紫叶兔耳草聚为一类。结论建立的环烯醚萜苷类分析方法可针对不同基原洪连进行定量分析,为洪连的质量控制及资源开发提供了依据。

山茱萸环烯醚萜苷对延缓大鼠脑动脉瘤进展的影响

目的 探讨山茱萸环烯醚萜苷(CLG)通过Ras同源基因家族蛋白(Rho)/Rho关联含卷曲螺旋结合蛋白激酶(Rock)信号通路对大鼠动脉瘤进展的影响。方法 选取50只雄性大鼠建立脑动脉瘤(CA)模型,48只造模成功大鼠随机分为模型组、CLG低剂量、中剂量和高剂量组(各12只),未造模大鼠取12只为对照组。CLG低剂量、中剂量和高剂量组灌胃100、150、200 mg·kg^(-1)的CLG溶液(蒸馏水配制),连续30 d,对照组及模型组给予等量蒸馏水。检测各组大鼠血压变化;ELISA法检测各组大鼠血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1(IL-1)、白细胞介素-6(IL-6)水平;HE染色观察脑组织病理学变化;RT-PCR和Western blot检测大鼠脑组织Rho、Rock2 mRNA和蛋白表达情况。结果 与模型组比较,3组大鼠收缩压、舒张压、平均动脉压、TNF-α、IL-1、IL-6、Rho、Rock2 mRNA和蛋白表达水平降低(P<0.05),与CLG低剂量组比较,CLG中剂量、高剂量组诸项指标水平降低(P<0.05),与CLG中剂量组比较,CLG高剂量组诸项指标水平降低(P<0.05)。结论 CLG可调节CA大鼠血压水平、降低炎性因子水平,在一定程度上抑制动脉瘤样扩张,可能与抑制Rho/Rock信号通路有关。

药用植物裂环烯醚萜苷类化合物生物合成途径关键酶基因研究进展

裂环烯醚萜苷类化合物是植物体内产生的具有保肝、消炎、降血糖血脂等多重生物活性的次级代谢产物,在临床上应用广泛。该文依据近年来国内外有关裂环烯醚萜苷类化合物生物合成途径及关键酶基因的挖掘与调控机理研究进展,主要对药用植物裂环烯醚萜苷类化合物生物合成途径、关键酶(GPPS、GES、G10H、8HGO、IS、IO、7DLGT、DL7H、LAMT、SLS)与编码基因的研究进展进行综述,为进一步阐明其生物合成途径机制与关键酶调控作用、提高有效活性成分积累、减缓药用植物野生资源紧张等问题提供参考。

响应面法优化川西獐牙菜中三种环烯醚萜苷的提取工艺研究

对川西獐牙菜中三种环烯醚萜苷抗炎活性成分进行提取工艺研究,建立快速高效的提取方法,提高药材的利用率。以川西獐牙菜中獐牙菜苦苷、龙胆苦苷、獐牙菜苷三种环烯醚萜苷为研究对象,考察提取次数、液料比、提取时间、乙醇浓度以及提取温度5个因素对川西獐牙菜中三种环烯醚萜苷提取率的影响,通过响应面法和Box-Behnken优化得到最优工艺参数。结果表明:川西獐牙菜中三种环烯醚萜苷的最优提取工艺参数为:提取次数2次,提取时间60 min,液料比46 mL·g^(-1),乙醇浓度73%,提取温度50℃;验证结果显示在该条件下川西獐牙菜中三种环烯醚萜苷的提取率为4.73 mg·g^(-1),与预测值4.75 mg·g^(-1)相差0.0255 mg·g^(-1),RSD<5%。实验所采用的超声法提取川西獐牙菜中三种环烯醚萜苷的优化工艺可行,耗时短、效率高、简单易行,能够满足提取要求。

滇丁香萜苷类化合物研究

目的：对滇丁香乙醇提取物的正丁醇部位进行研究。方法：色谱技术进行分离，MS，NMR，2DNMR等波谱方法进行结构鉴定。结果：分离得到7个化合物Vogeloside（1），epi-Vogeloside（2），Loganoside（3），Loganin（4），Cineholieacid28-O-β-D—glucopyranosylester（5），Cincholicacid-3-O-β-D-glueopyranoside，28-O-β-D—glucopyranosylester（6），Cincholicacid-3-O-βD—glucopyranoside（7）。结论：化合物1—7为首次从该属植物中分离鉴定。

山茱萸环烯醚萜苷对蛋白磷酸酶抑制剂冈田酸拟阿尔采末病细胞模型的作用

目的探讨中药山茱萸环烯醚萜苷(COIG)对蛋白磷酸酶2A和1(PP2A和PP1)抑制剂冈田酸(okadaicacid,OA)拟阿尔采末病细胞模型tau蛋白过度磷酸化水平和细胞微管的影响。方法COIG与人神经母细胞瘤细胞系SKNSH细胞预孵育24h,再用OA10nmol·L-1与SKNSH细胞共孵育6h,在显微镜下观测细胞形态变化,用Westernblot方法观察磷酸化和非磷酸化tau蛋白表达,用间接免疫荧光法观察神经细胞微管的变化。结果正常SKNSH细胞铺展良好,OA模型组细胞变圆,突起断裂;OA模型组tau蛋白ser199/202和ser404位点磷酸化水平较正常对照组明显增高,非磷酸化水平下降;OA模型组细胞微管平均面积较正常对照组明显减少。COIG(100和200mg·L-1)给药组细胞形态基本恢复正常,tau蛋白ser199/202和ser404位点磷酸化水平较OA模型组明显下降、非磷酸化水平升高,细胞微管平均面积比模型组明显增大。结论山茱萸环烯醚萜苷能够抑制神经细胞tau蛋白过度磷酸化,保护细胞微管结构,因此可能具有治疗AD的应用前景。

金银花中裂环环烯醚萜苷类化学成分研究

目的系统研究金银花Lonicera japonica水提物中的化学成分。方法利用D101、Sephadex LH-20、硅胶等各种柱色谱法进行分离纯化,通过波谱分析手段(IR、UV、NMR等)及化合物的理化性质进行结构鉴定。结果从金银花水提物中分离得到7个裂环环烯醚萜苷类化合物,分别为:vogeloside(Ⅰ)、7-epi-vogeloside(Ⅱ)、secologanicacid(Ⅲ)、sweroside(Ⅳ)、secoxyloganin(Ⅴ)、secologanoside(Ⅵ)、(E)-aldosecologanin(Ⅶ)。结论其中化合物Ⅲ和Ⅵ为首次从忍冬属植物中分离得到,化合物Ⅶ为迄今为止较为罕见的通过碳碳键相连的二聚体环烯醚萜苷。

金银花药材中抗呼吸道病毒感染的环烯醚萜苷类成分的定量研究

目的:寻找金银花中的抗呼吸道病毒感染的成分,并进行定量研究。方法:采用柱层析等方法分离、细胞病变法进行抗病毒作用的研究,采用 RP-HPLC 方法进行定量方法的研究。色谱系统:色谱柱为 HiQ Sil C_(18)色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈-水(15:85),柱温:室温,检测波长240nm,流速1mL·min^(-1),进样量10μL。结果:分离得到了10种环烯醚萜苷类化合物,确认环烯醚萜苷类成分具有中等强度的抗呼吸道病毒感染的作用,并采用RP—HPLC方法测定了金银花药材中的4种环烯醚萜苷的含量。结论:环烯醚萜苷类成分为金银花中的有效成分,定量方法准确,重复性好。

大孔树脂富集纯化藏药独一味总环烯醚萜苷

目的:进行藏药独一味止血活性成分总环烯醚萜苷的富集纯化。方法:以一阶导数分光光度法检测,以总环烯醚萜苷含量为跟踪指标,比较10种不同厂家、不同型号的大孔树脂对独一味水提取物中环烯醚萜苷类成分的吸附与解吸附条件,优选最佳的纯化工艺。结果:富集后总环烯醚萜苷的含量达到67.53%。结论:XDA-1型大孔吸附树脂对独一味水提取物中环烯醚萜苷类成分有较好的吸附能力,50%乙醇溶液解吸附快速有效。树脂重复利用度高。

环烯醚萜苷对大鼠脑梗死后NF-κB与凋亡调节因子Bcl-2/Bax表达变化的影响

目的观察光化学法诱导大鼠脑梗死形成过程中核转录因子(Nuc lear factor-kappa B,NF-κB)与凋亡调节因子Bax和Bc l-2表达的变化,并探讨山茱萸环烯醚萜苷(iridoid gly-coside,IG)对这一过程的影响。方法大鼠预先灌胃给药7d后,制作光化学致脑梗死模型,采用免疫组织化学法检测脑组织中NF-κB表达的变化,W estern b lot技术检测凋亡调节因子Bax和Bc l-2表达的变化。结果模型组与对照组相比,脑皮层内NF-κB和Bax蛋白表达增多,Bc l-2蛋白表达减少。与模型组相比,IG能够明显的减少NF-κB和Bax蛋白表达,增高Bc l-2蛋白的表达。结论IG可通过影响脑内NF-κB和凋亡调节基因的表达而发挥对脑梗死的治疗作用。

山茱萸环烯醚萜苷对D-GalN/TNF-α损伤肝细胞的保护作用研究

目的研究山茱萸环烯醚萜苷(CIG)对D-Gal N联合TNF-α造成的肝细胞损伤模型的保护作用。方法提取并分离、制备CIG;体外培养人源性肝细胞L-02,建立D-Gal N/TNF-α致L-02细胞损伤模型,以总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、细胞内钙离子浓度为指标,观察CIG对损伤肝细胞的保护作用;Western blot检测p-PERK、p-e IF-2α、caspase-3蛋白的表达,进行机制研究。结果44 mg·L^(-1)D-Gal N联合100μg·L^(-1)TNF-α可作为细胞损伤模型的剂量。CIG高、中、低剂量预保护组可明显提高损伤细胞的活性,明显提高损伤细胞的SOD活性、T-AOC能力,与模型组比较差异具有显著性(P<0.05),降低MDA活性,但低浓度组对MDA活性的降低不明显;Western blot结果显示,CIG不同浓度组可以明显降低内质网应激关联蛋白p-PERK、p-e IF-2α、凋亡关联蛋白caspase-3表达。结论山茱萸环烯醚萜苷对D-Gal N/TNF-α造成的肝细胞损伤具有保护作用,其作用机制可能与增强细胞的抗氧化能力,降低内质网应激造成的损伤,降低凋亡相关蛋白的表达有关。

藏药独一味中总环烯醚萜苷的含量测定

目的建立测定藏药独一味及其水提取物中止血活性成分总环烯醚萜苷含量的方法。方法用聚酰胺柱预先除去其中黄酮类成分,然后采用一阶导数法。结果8-乙酰氧基山栀苷甲酯在10.2-71.4μg.m l-1范围内有良好的线性关系(r=0.9999),平均回收率为98.53%±2.56%,RSD=2.69%。结论所建立的方法快速、可靠。

山茱萸环烯醚萜苷对APP/PS1/tau小鼠脑内阿尔茨海默病样病理变化的作用机制

目的阿尔茨海默病(AD)最典型的病理变化是β-淀粉样蛋白(Aβ)在脑部沉积形成的老年斑和过度磷酸化的tau蛋白聚集导致的神经纤维原缠结(NFT),同时伴随氧化应激、神经炎症、突触损伤、神经元变性或死亡等。本研究利用APP/PS1/tau三转基因(3x Tg)模型小鼠,观察山茱萸环烯醚萜苷(CIG)对小鼠脑内多种病理变化的影响。方法 16月龄3x Tg模型小鼠每天灌胃给予CIG 100或200 mg·kg-1至18月龄。采用刚果红染色法观察3x Tg小鼠海马中老年斑沉积;Western蛋白印迹法检测tau蛋白在Thr212和Thr217位点的磷酸化水平;免疫组化法观察小鼠海马中脑源性神经营养因子(BDNF)的表达和分布;实时荧光定量PCR法(q RT-PCR)检测小鼠BDNF转录水平;尼氏染色法观察小鼠海马中尼氏小体的变化。结果 18月龄模型组小鼠与对照组相比,Aβ淀粉样斑块沉积明显增加,而给予CIG 100或200 mg·kg-1均能不同程度降低脑内斑块负荷。模型组小鼠tau蛋白在Thr217位点的磷酸化水平明显升高,而在Thr212位点的磷酸化水平无明显升高;CIG治疗组能明显拮抗tau蛋白在Thr217位点的过度磷酸化。模型组小鼠海马BDNF蛋白和m RNA的水平均降低,CIG能够明显恢复BDNF蛋白和m RNA表达;模型组小鼠海马内尼氏小体数量减少,染色变浅,排列散乱,CIG有增高尼氏体数量的趋势。结论 CIG能够减少Aβ在脑内的沉积和tau蛋白异常过度磷酸化,恢复BDNF在脑内的表达,并且保护神经元。

生地环烯醚萜苷类成分对AGEs损伤HUVEC的保护作用

目的观察生地环烯醚萜苷类成分梓醇、毛蕊花糖苷对晚期糖基化终产物（AGEs）损伤人脐静脉内皮细胞（HUVEC）的保护作用。方法体外培养HUVEC,将细胞分为正常对照组、模型组、梓醇组及毛蕊花糖苷组,并设氨基胍组作为阳性对照。加入终浓度为0.05、0.1、0.5、1、5、10、100μmol/L的药物分别预孵1h后,加入200mg/L的AGEs作为刺激物继续培养,24h后用MTT法检测并计算药物对AGEs致HUVEC损伤的保护率。体外培养HUVEC,加入氨基胍及梓醇、毛蕊花糖苷（终浓度分别为1、10、100μmol/L）预孵1h后,加入终浓度为200mg/L的AGEs,另设模型组及空白对照组,24h后取各组细胞培养上清液,试剂盒测定超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、活性氧（ROS）和NO;ELISA法测定内皮素（ET）、血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）、转化生长因子-（TGF-β）及白介素1（IL-1）。结果生地环烯醚萜苷类成分梓醇、毛蕊花糖苷（0.05、0.1、0.5、1、5、10、100μmol/L）可减轻AGEs致HUVEC的损伤。与空白对照组比较,模型组细胞上清液中ROS、AngⅡ、MDA含量增加（P〈0.05-0.01）,SOD活力和NO水平降低（P〈0.05-0.01）,TGF-β、IL-1β分泌增加（P〈0.05-0.01）。而梓醇、毛蕊花糖苷给药组（1、10、100μmol/L）能不同程度的降低ROS、AngⅡ、MDA含量,升高SOD活力和NO水平,减少TGF-、IL-1分泌,与模型组比较具有显著性差异（P〈0.05-0.01）。结论生地环烯醚萜苷类成分梓醇、毛蕊花糖苷可通过抑制氧化应激、调节内皮细胞分泌功能、抑制炎症因子及抗细胞粘连等保护血管内皮细胞。

山茱萸环烯醚萜苷对血栓形成和凝血功能的影响

目的观察山茱萸环烯醚萜苷(comel iridoid glycoside,CIG)对血栓形成和凝血功能的影响。方法大鼠灌胃给予不同剂量的CIG(20,60,180 mg·kg^(-1)),连续7 d,于末次给药后1h建立动-静脉旁路形成模型,测量血栓干重和湿重;并进行体外血栓形成实验,测定血栓长度、干重和湿重。取新西兰兔抗凝血,分离血浆,加入不同剂量CIG(10,20,40 mg·mL^(-1)),测定凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)和凝血酶时间(TT)。结果CIG各剂量能明显抑制动-静脉旁路实验大鼠血栓形成,减轻血栓干重和湿重;缩短体外血栓实验大鼠血栓长度,减轻其干重和湿重。CIG可明显延长TT,中、大剂量组与生理盐水组比较有显著性差异(P<0.01);延长PT,大剂量组与生理盐水组比较有显著性差异(P<0.01);延长APTT,各剂量组与生理盐水组比较均有显著性差异(P<0.01)。结论CIG具有抑制血栓形成和抗凝血的作用,为CIG用于防治缺血性血管疾病提供实验依据。