萝卜硫素对猪心肺复苏后急性肺损伤的保护作用及机制

目的 探讨萝卜硫素(SFN)对猪心肺复苏(CPR)后急性肺损伤(ALI)的保护作用及潜在机制。方法 选择24头普通级大白猪,应用随机数字表法分为假手术组(n=6)、模型组(n=9)和SFN组(n=9)。选择右心室放电诱导心脏骤停(CA)10 min与CPR 6 min的方法建立室颤型猪CA/CPR模型。于造模成功后5 min时,SFN组经股静脉泵入SFN 2 mg/kg,整个时长10 min。于造模前及造模后4 h观察期间,应用脉波指示连续心排血量监测(PiCCO)模块定期检测血管外肺水指数(ELWI)和肺血管通透性指数(PVPI)的变化。于造模后24 h处死动物并获取左肺下叶组织样本,应用凋亡细胞检测(TUNEL)法检测肺组织细胞凋亡指数,以及免疫印迹试验(Western Blot)法检测活化型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cleaved caspase 3)、受体相互作用蛋白3 (RIP3)和混合谱系激酶域样蛋白(MLKL)的表达水平。结果 (1)造模前,各组猪的ELWI和PVPI值处于一致的生理水平,组间比较差异无统计学意义(均P>0.05)。造模后,与假手术组比较,模型组各时间点ELWI和PVPI值均显著上升,SFN组2 h内ELWI值和各时间点PVPI值均显著上升(均P<0.05)。但与模型组比较,SFN组造模2 h后ELWI值和1 h后PVPI值均显著下降(均P<0.05)。(2)造模后24 h,与假手术组比较,模型组和SFN组肺组织细胞凋亡指数显著升高,cleaved caspase 3、RIP3和MLKL的蛋白表达水平显著增加(均P<0.05)。但与模型组比较,SFN组肺组织细胞凋亡指数显著降低,cleaved caspase-3、RIP3和MLKL的蛋白表达水平显著减少(均P<0.05)。结论 SFN能有效减轻猪CPR后ALI程度,同时产生积极的保护作用,其保护途径与抑制肺组织细胞凋亡和坏死性凋亡有关。

萝卜硫素诱导RASD1的表达促进宫颈癌HELA细胞凋亡及周期阻滞的机制研究

目的:探讨萝卜硫素靶向RASD1,对宫颈癌细胞(HELA)凋亡及周期的影响机制。方法:不同浓度的萝卜硫素(SFN)作用于HELA细胞48h,采用CCK-8法检测SFN对HELA细胞增殖的影响;采用RT-PCR法检测SFN对RASD1基因mRNA表达水平的影响;采用Western印迹法检测SFN对RASD1蛋白表达水平的影响;采用流式细胞技术检测加药以及过表达RASD1对HELA细胞凋亡及周期的影响,采用Western blot检测HELA中cleaved-caspase3和cleaved-parp相关凋亡蛋白以及p21和cdc2周期相关蛋白的影响。结果:SFN抑制宫颈癌细胞增殖,且加药组中RASD1的mRNA和蛋白表达水平明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。流式细胞凋亡分析结果提示:加SFN或是过表达RASD1细胞组凋亡率明显高于对照组,Western blot结果表明加SFN或过表达RASD1后细胞cleaved-caspase3以及cleaved-parp蛋白水平升高,差异具有统计学意义(P<0.05);ModFit LT软件分析结果表明加SFN或过表达RASD1细胞S期显著低于对照组,G2/M期细胞增多,同时Western blot结果示p21蛋白的表达水平增高,而cdc2蛋白表达降低,其差异有统计学意义(P<0.05)。结论:在宫颈癌HELA细胞中RASD1作为SFN的作用靶点,诱导细胞凋亡和细胞周期阻滞。

SFN通过Nrf2信号通路缓解ACAC诱导的奶牛乳腺上皮细胞氧化应激

用不同浓度(0,0.6,1.2,1.8 mmol/L)的乙酰乙酸(acetoacetic acid,ACAC)分别处理奶牛乳腺上皮细胞系(MAC-T)细胞24 h;用10μmol/L萝卜硫素(sulforaphane,SFN)预处理MAC-T 24 h后加入1.2 mmol/L ACAC处理24 h。采用WB测定核转录因子NF-E2相关因子2(nuclear factor E2-reated factor 2,Nrf2)的蛋白表达情况;通过q-PCR对血红素加氧酶1(heme oxyenase-1,HO-1)和醌氧化还原酶NADH 1(NAD(P)H quinone oxidoreductase 1,NQO1)的基因表达水平进行定量分析;使用各类试剂盒分别检测活性氧(reactive oxygen species,ROS)和脂质过氧化物丙二醛(malondialdehyde,MDA)的含量及抗氧化酶的活性,如超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)。结果显示,与对照组相比,不同浓度ACAC处理细胞后,ROS和MDA的含量呈浓度依赖性升高(P<0.05),SOD和GSH-Px的活性逐渐下降(P<0.05)。与ACAC+DMSO组相比,ACAC+SFN组的Nrf2蛋白表达量显著升高(P<0.05),HO-1、NQO1基因表达水平显著升高(P<0.05),ROS和MDA的含量显著降低(P<0.05),SOD和GSH-Px活性显著升高(P<0.05)。结果表明,SFN通过激活Nrf2信号通路保护奶牛乳腺上皮细胞免受ACAC诱导的氧化应激。本试验为筛选酮病奶牛代谢应激导致的奶牛乳腺上皮细胞氧化损伤的防治药物及治疗靶点提供理论依据。