Duchenne型肌营养不良症患儿肌膜抗肌萎缩蛋白-糖蛋白复合物表达研究

研究背景离心运动或高张力运动可以损伤骨骼肌结构,使抗肌萎缩蛋白(dystrophin)缺失,并继发性引起抗肌萎缩蛋白-糖蛋白复合物(DGC)缺乏,表明dystrophin蛋白表达下降是离心运动对骨骼肌损伤的关键标记之一。DMD基因突变致dystrophin蛋白缺失继而导致Duchennne型肌营养不良症,表明Duchenne型肌营养不良症患儿自出生起即处于骨骼肌离心运动所承载的高张力力量传递通路的自然状态。本研究探讨Duchenne型肌营养不良症患儿骨骼肌功能进行性下降与DGC复合物表达水平之间的关系。方法共197例9天至12岁Duchennne型肌营养不良症患儿,采用免疫荧光染色观察肱二头肌肌膜DGC复合物中的肌营养不良蛋白聚糖(α-和β-DG),肌聚糖蛋白(α-、β-、γ-和δ-SG),互生蛋白(syntrophin)表达变化。结果各年龄段Duchenne型肌营养不良症患儿肌膜α-和β-DG,α-、β-、γ-和δ-SG,syntrophin蛋白均呈现不同程度缺乏,但与增龄伴随的肌力下降并无关联性。结论 DGC复合物缺乏可能在出生前即已发生,建议Duchenne型肌营养不良症患儿在日常生活活动和康复训练中避免离心运动和抗高阻力动作对骨骼肌的进一步损伤。

神经肌肉病患者肌肉中utrophin和dystrophin蛋白表达的相关性

目的探讨 utrophin 和 dystrophin 蛋白在神经肌肉病患者肌肉中的表达及其相关性。方法采用免疫荧光方法观察26例共8种神经肌肉疾病患者及2名无神经肌肉疾病者的正常肌肉活检标本冰冻切片 utrophin 和 dystrophin 蛋白的表达。结果 dystrophin 蛋白在 Duchenne 型肌营养不良(DMD)患者显示为大部分肌纤维荧光圈带缺失、荧光圈带亮度减弱或荧光圈带呈不连续状;在非DMD 的肌营养不良、脂肪累积性肌病、强直性肌营养不良、神经源性肌萎缩、多发性肌炎、线粒体脑肌病、肌源性肌萎缩患者肌肉膜上呈现一圈完整的强荧光圈带;在对照组肌肉膜上呈现一圈完整的强荧光圈带。utrophin 蛋白在 dystrophin 蛋白重度减少的 DMD 患者少部分肌纤维肌膜上呈现不连续的荧光圈带,但强度较弱;在 dystrophin 蛋白中度减少的 DMD 患者、非 DMD 的肌营养不良及其他6种神经肌肉病患者肌肉膜上不显示荧光;在对照组肌肉膜上不显示荧光。结论 DMD 患者肌肉的dystrophin 蛋白表达重度减少的同时,出现 utrophin 蛋白的表达;而包括 DMD 患者 dystrophin 蛋白中度减少、非 DMD 的肌营养不良在内的其他神经肌肉病患者肌肉的 dystrophin 蛋白正常表达时,其utrophin 未出现表达。

脓毒血症应用丙氨酰谷氨酰胺双肽强化早期肠内营养治疗

目的探讨脓毒血症患者应用丙氨酰谷氨酰胺双肽强化早期肠内营养治疗的临床疗效,为临床应用提供参考。方法随机抽取2017年2月至11月门诊中脓毒血症患者128例,随机分为试验组和对照组,各64例。两组都给予补液及机械通气等常规治疗,同时采取针对性的抗感染治疗,和早期的肠内营养治疗。试验组在此基础上加入丙氨酰谷氨酰胺双肽静脉滴注治疗2周。比较两组治疗前后营养相关蛋白[转铁蛋白(TF)、血红蛋白(Hb)、白蛋白(ALB)]、代谢指标[血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、乳酸(Lac)]、凝血功能相关指标[血小板计数(PLT)、凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)]、免疫指标[免疫球蛋白(Ig)G、IgA、IgM]及治疗前后序贯器官衰竭评分(SOFA评分)。结果治疗后,两组TF、Hb、ALB水平高于治疗前(P <0. 01),Scr、BUN低于治疗前(P <0. 01),Lac比较无统计学差异(P> 0. 05);且试验组TF、Hb、ALB水平高于对照组(P <0. 01),Scr、BUN低于对照组(P <0. 01)。治疗后,试验组PLT高于治疗前(P <0. 01),PT、APTT低于治疗前(P <0. 01);对照组治疗后PLT高于治疗前(P <0. 01),APTT低于治疗前(P <0. 01),PT治疗前后无统计学差异(P> 0. 05);且两组治疗后PLT、PT、APTT比较差异有统计学意义(P <0. 01)。治疗后,试验组IgG水平高于治疗前(P <0. 01),IgM水平低于治疗前(P <0. 01),IgA治疗前后无统计学差异(P> 0. 05);对照组IgG、IgA、IgM水平治疗前后无统计学差异(P>0. 05);且两组治疗后IgG、IgM水平比较差异有统计学意义(P <0. 01)。两组治疗后SOFA评分均低于治疗前(P <0. 01);且试验组低于对照组(P <0. 01)。结论脓毒血症患者应用丙氨酰谷氨酰胺双肽强化早期肠内营养治疗具有较好的临床疗效,可有效改善免疫功能、降低病死率。

Duchenne型肌营养不良基因治疗研究进展

Duchenne型肌营养不良(DMD)是由编码抗肌萎缩蛋白的DMD基因突变导致的X连锁隐性遗传病。它的特点是进行性肌无力和因缺乏抗肌萎缩蛋白而导致的骨骼肌和心肌退化。患儿多于2~5岁起病,常在20岁左右死于心力衰竭或呼吸功能不全。目前,临床上多采用支持疗法改善疾病症状,但并不能改变疾病的最终结局。基因治疗的兴起为该病的治愈提供了希望。本文总结了DMD的基因替代疗法,包括腺相关病毒介导的DMD基因转导技术、肌营养不良蛋白相关蛋白(utrophin)上调技术和成簇规律间隔的短回文重复序列基因编辑技术的研究进展,并为解决腺相关病毒载量、转基因产物的长期有效表达、utrophin蛋白表达量问题提出的建议进行综述,为研究者们进一步研究提供参考。

补骨脂汤对血管性痴呆大鼠海马内BDNF/TrkB、GAP-43蛋白的影响

目的探讨补骨脂汤改善血管痴呆大鼠学习记忆的作用靶点。方法将60只SD大鼠随机分成假手术组、模型组、银杏叶片组、补骨脂汤低剂量组(补低组)、补骨脂汤高剂量组(补高组),每组12只,制备血管性痴呆大鼠模型,手术后第3d开始给药,采用二维电泳分离海马内总蛋白,用ImageMaster软件分析蛋白差异点,用蛋白印迹法、免疫组化分析差异蛋白的表达量。结果补高组、补低组总蛋白二维电泳的结果与模型组比较,发现差异蛋白点19个,其中与空间学习记忆相关的蛋白脑源性神经营养因子(BDNF)、生长相关蛋白-43(GAP-43)灰度比值及TrkB阳性细胞数补高量组明显高于模型组(P<0.05或P<0.01)。结论补骨脂汤可能通过提高BDNF/TrkB、GAP-43基因的表达水平,改善和治疗血管性痴呆者学习记忆能力。

温胆汤含药血清对CREB mRNA沉默海马神经元细胞凋亡及BDNF/TrkB/CREB信号通路的影响

目的:探讨温胆汤对环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)mRNA沉默海马细胞活性、凋亡及海马脑源性神经营养因子/原肌球蛋白相关受体激酶/CREB(BDNF/TrkB/CREB)信号通路作用的影响。方法:制备温胆汤含药血清,将SD雄性大鼠随机分为温胆汤高、中、低剂量组、氯氮平组、正常生理盐水组,每组10只,其中每组15只。正常组予20 mL·kg-1生理盐水灌胃,氯氮平组给予0.02 g·kg-1氯氮平原药灌胃,温胆汤高、中、低剂量组分别予质量浓度为2,1,0.5 g·mL-1的等量温胆汤浓缩生药灌胃,1次/d,连续灌胃8 d后,股动脉取血,5 000 r·min-1离心15 min,倾取上清液,灭活,-80℃保存,备用。通过脂质体转染至海马细胞中,构建CREB mRNA沉默海马神经元细胞系,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)验证小分子干扰核糖核酸(siRNA)转录后效果。检测海马细胞周期和凋亡,正常海马细胞和CREB基因沉默海马细胞内BDNF,TrkB,CREB,钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)mRNA表达水平。结果:对于细胞凋亡,与正常大鼠血清组比较,各组别在24,48 h时,细胞凋亡显著降低(P<0.01);与正常大鼠血清-siRNA组比较,各给药组细胞凋亡显著降低(P<0.01)。对于BDNF,TrkB,CREB,CaMKⅡmRNA表达,与正常大鼠血清组比较,基因沉默正常组CREB,BDNF mRNA表达均显著下降(P<0.01);与正常大鼠血清-siRNA组比较,各给药组可显著提高BDNF mRNA表达(P<0.01),其中TrkB,CaMKⅡ各组间差异无明显统计学意义。结论:温胆汤含药血清可提高BDNF mRNA表达,通过调控BDNF/TrkB/CREB信号通路,以保护海马神经元,达到防治精神分裂症认知障碍的目的。