一叶萩生物碱类成分研究

目的对一叶萩的生物碱类成分进行研究。方法采用各种色谱技术对一叶萩的总生物碱部位进行分离,应用理化常数和波谱技术(NMR、MS等)鉴定化合物的结构。结果自一叶萩枝叶的总碱部位中分离得到2个新的生物碱类化合物,分别命名为叶下珠碱B(phyllanthidine B,4α-methoxy-phyllanthidine,Ⅰ)和一叶萩醇D(securi-nolD,14β-hydroxyviroallosecurinine,Ⅱ)。结论化合物和均为新化合物。

一叶萩药材质量控制方法研究

目的建立一叶萩药材的质量控制方法。方法参照2020年版《中国药典》(四部)方法对一叶萩药材进行显微鉴别和薄层色谱(TLC)鉴别,并测定药材中的水分、总灰分及酸不溶性灰分、醇溶性浸出物;采用高效液相色谱(HPLC)法测定药材中一叶萩碱的含量。结果一叶萩药材的粉末呈灰绿色,气孔、花粉粒、草酸钙簇晶、导管等显微特征明显。TLC鉴别结果显示,16批药材样品的供试品色谱中,在与一叶萩碱、芦丁、槲皮素对照品及一叶萩对照药材色谱相应的位置上分别显相同颜色的斑点。16批药材样品的水分、总灰分、酸不溶性灰分、醇溶性浸出物的平均质量分数分别为9.26%、6.96%、1.17%、28.89%。一叶萩碱进样量在0.0524~0.5240μg范围内与峰面积成良好的线性关系(R^(2)=0.9998);精密度、重复性、稳定性(24 h)试验的RSD均小于3%(n为6或7);平均加样回收率为97.47%,RSD为1.63%(n=6)。16批药材样品中的一叶萩碱含量为1.003~6.872 mg/g。结论建立了一叶萩药材的质量控制方法,并初步拟定该药材中水分、总灰分及酸不溶性灰分分别不得过12.0%、9.0%、2.0%,醇溶性浸出物不得少于20%,一叶萩碱含量不得低于1.00 mg/g。

叶底珠各部位中一叶萩碱和别一叶萩碱的含量测定

采用高效液相色谱法测定叶底珠中一叶萩碱和别一叶萩碱在各部位中的含量。结果表明,一叶萩碱在各部位的质量分数w_(根皮)>w_(细根)>w_(枝干皮)>w_(木部)>w_(嫩叶芽(济南))>w_(枝叶)>w_根>w_(嫩叶芽(临沂))。别一叶萩碱在各部位的质量分数w_(根皮)>w_(细根)>w_(木部)>w_(枝干皮)>w_根>w_(嫩叶芽(临沂))>w_(嫩叶芽(济南))>w_(枝叶)。本实验为叶底珠生药成分中一叶萩碱和别一叶萩碱的定性和定量测定提供了科学依据。

一叶萩的化学成分

目的:对一叶枝叶的化学成分进行研究。方法:应用各种色谱技术从一叶总碱部位中分离化合物,根据理化常数和波谱(NMR及MS等)分析方法对化合物的结构进行鉴定。结果:自一叶枝叶的总碱部位中分离得到11个化合物。分别鉴定为:(-)-15β-ethoxy-14,15-dihydroviroallosecurinine(1),一叶碱(securi-nine,2),二氢一叶碱(14,15-dihydrosecurinine,3),4-epiphyllanthine(4),securitinine(5),右旋别一叶碱(viroal-losecurinine,6),一叶醇A(securinol A,7),secu’amamine A(8),ent-phyllanthidine(9),(+)-aquilegiolide(10)和(+)-menisdaurilide(11)。结论:1为新化合物,4,8,10和11为首次从一叶中分离得到。

右旋一叶萩碱对小鼠黑色素瘤B16增殖及细胞周期的影响

目的:探讨右旋一叶萩碱对小鼠黑色素瘤B16细胞增殖和细胞周期的影响及其作用机制。方法:右旋一叶萩碱作用于小鼠黑色素瘤细胞B16,MTT法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞周期。结果:右旋一叶萩碱以时间和浓度依赖的方式抑制B16细胞生长;药物作用72 h IC50为63.34μmol/L;右旋一叶萩碱诱导B16细胞凋亡并显著减少S期、G2/M期细胞。结论:右旋一叶萩碱可以抑制黑色素瘤细胞的恶性增殖,其作用机制与诱导细胞凋亡、减少S期和G2/M期细胞有关。

一叶萩碱的研究进展

目的为进一步展开一叶萩碱的研发工作奠定基础。方法查阅并总结有关一叶萩碱的文献资料。结果与结论综述了一叶萩碱的物化性质、提取分离和生物活性等研究现状,相关质量分析工作尚需完善。

一叶萩大孢子发生和雌配子体发育

采用石蜡切片法对一叶萩(Flueggea suffruticosa(Pall.)Baill.)雌花大孢子发生及雌配子体的发育过程进行了观察。结果表明:一叶萩子房上位,中轴胎座,三室,每室2枚倒生胚珠,双珠被,厚珠心,具大戟科常见的珠心喙和珠孔塞。胚囊发育为蓼型,成熟胚囊结构为:卵器位于珠孔端,包括2个助细胞和1个卵细胞;中央是1个二核的中央细胞;合点端为3个反足细胞。本研究为大戟科植物生殖生物学和传粉生物学研究提供了基础资料,同时对大戟科植物系统分类研究有一定意义。

基于BP神经网络的萩芦溪流域水质变化趋势研究

根据2007-2011年萩芦溪流域白沙桥、狮亭桥、南安陂和江口桥4个监测点水质监测数据,应用主成分分析法确定水质主要富营养化指标为TP、BOD5和DO。利用Matlab 6.5软件构建BP神经网络模型,对2012-2014年萩芦溪流域4个监测点的水质主要富营养化指标进行预测,分析萩芦溪流域水质变化趋势,表明TP为萩芦溪流域水体污染的主导因子,为萩芦溪流域的限制性营养元素,并提出相应对策。

一叶萩碱对大鼠脑缺血再灌注损伤后神经功能的影响

目的基于Toll样受体4(TLR4)/核转录因子-κB(NF-κB)通路,探讨一叶萩碱(SE)对大鼠脑缺血再灌注损伤(CIRI)后神经功能的影响及相关机制。方法100只成年SD大鼠随机分为假手术组(Sham组),模型组(CIRI组),SE低、中、高剂量组,每组20只。采用线栓法建立大鼠CIRI模型,建模成功后立即腹腔注射低、中、高剂量(20 mg/kg、40 mg/kg、80 mg/kg)的SE,连续3 d,Sham组与CIRI组给予等量生理盐水。术后24、48、72 h,参照Longa法对各组大鼠进行神经功能缺损评分;术后72 h,干湿重法测定大鼠脑组织含水量,2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色评估大鼠脑梗死体积百分比,Western blot检测大鼠脑组织离子钙结合衔接分子1(Iba-1)、TLR4、NF-κB p65和p-NF-κB p65蛋白表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大鼠脑组织白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和IL-6水平,免疫荧光染色检测小胶质细胞活化和神经元存活情况。结果与Sham组相比,CIRI组大鼠神经功能缺损评分、脑组织含水量升高,脑梗死体积百分比增大,脑组织中TLR4、p-NF-κB p65、Iba-1、IL-1β、TNF-α和IL-6表达水平升高(P<0.05)。中、高剂量的SE可降低大鼠CIRI后神经功能缺损评分和损伤后脑组织含水量,降低脑梗死体积百分比及损伤区域TLR4、p-NF-κB p65、Iba-1蛋白表达水平及IL-1β、TNF-α和IL-6水平(P<0.05)。结论SE可通过抑制TLR4/NF-κB通路激活降低大鼠CIRI后神经炎症反应,发挥脑保护作用。

萩芦溪流域农业面源污染负荷研究

基于输出系数法和等标负荷法对萩芦溪流域农业面源污染负荷进行了研究,选取总氮(TN)、总磷(TP)两个重要污染物指标,对流域内各乡镇及主要污染源的TN、TP负荷进行估算,并运用GIS软件Mapinfo绘制专题地图。结果表明,萩芦溪流域各乡镇TN等标排放量为江口镇>三江口镇>庄边镇>新县镇>萩芦镇>大洋乡>白沙镇,主要污染源为农村人口、畜禽养殖和耕地;TP等标排放量为三江口镇>江口镇>新县镇>梧塘镇>白沙镇>庄边镇>萩芦镇,主要污染源为畜禽养殖、农村人口。

一叶萩嫩枝叶中6种无机元素的含量测定

采用原子吸收分光光度法,测定了一叶嫩芽中6种无机元素含量,结果表明:一叶嫩枝叶中富含人体必需的锰、锌等元素。

一叶萩碱对延髓迷走复合体神经元电活动及十二指肠运动的影响

目的:初步探讨左旋一叶萩碱是否对延髓迷走复合体神经元具有兴奋作用,以及对十二指肠运动是否有促进作用。方法:以SD大鼠为实验对象,采用下丘脑腹内侧区微量注射、微电极神经元放电记录及十二指肠运动记录等方法,观察下丘脑腹内侧区微量注入不同剂量的一叶萩碱对延髓迷走复合体神经元电活动与十二指肠运动的影响。实验中VMH微量注射L-Sec解除了GABA能紧张性抑制而引起MFR增加和十二指肠收缩幅度与频率均增强。随着剂量的加大,MRF增加值亦逐渐加大。呈剂量-效应正相关关系,相关系数γ=0.9975(P<0.001)。结果:一叶萩碱对延髓迷走复合体神经元具有兴奋效应,并能促进十二指肠运动。当注射剂量从4μg逐渐加大至54μg时,平均放电率的增加值从(0.61±0.38)脉冲/S增大到(12.24±1.62)脉冲/S1呈现剂量-效应正相关关系。结论:一叶萩碱通过解除γ-氨基丁酸能紧张性抑制机制而引起延髓迷走复合体神经元的平均放电率增加,并使十二指肠收缩幅度与频率均增大。

一叶萩小孢子发生和雄配子体发育

采用石蜡切片法对一叶萩(Flueggea suffruticosa(Pall.)Baill.)的小孢子发生及雄配子体的发育过程进行了解剖学研究。结果表明:一叶萩雄花含5枚雄蕊,每个花药4个花粉囊,但有个别雄花仅含4枚雄蕊,且其中一枚具7～8个花粉囊;不同花药以及同一花药各花粉囊发育不完全同步;花药壁发育为基本型,由外到内依次为表皮、药室内壁、中层(2层)和绒毡层,绒毡层为腺质绒毡层;小孢子母细胞减数分裂为同时型,产生四分体为正四面体型,也有少数对称型;有部分小孢子在四分体时期败育;成熟花粉二细胞型,圆球形,具三条萌发沟;雄花内着生无子房结构只有花柱发育的退化雌蕊;在花萼和花药中发现大量结晶体。本研究为大戟科植物生殖生物学和传粉生物学研究提供了基础资料。

一叶萩碱滴眼液对兔实验性单纯疱疹病毒性角膜炎的影响

目的:考察一叶萩碱滴眼液对兔实验性单纯疱疹病毒性角膜炎的影响。方法:将接种病毒的实验兔分成一叶萩碱治疗组7只(14眼)、阿昔洛韦对照组7只(14眼)、病毒模型组7只(14眼),考察病变程度及治愈时间。结果:一叶萩碱治疗组、阿昔洛韦对照组、病毒模型组平均治愈日分别为10.34,9.81,18.70d。结论:一叶萩碱滴眼液对兔单纯疱疹病毒性角膜炎有显著的疗效。

HPLC法测定硝酸一叶萩碱注射液的有关物质及含量

目的建立测定硝酸一叶萩碱注射液的有关物质及含量测定的高效液相色谱法。方法色谱柱VP-ODS,流动相为甲醇-40mmol.L-1乙酸铵溶液（45∶55）,流速1.0 mL.min-1,检测波长256nm。结果一叶萩碱经强酸、强碱、高温、氧化等剧烈条件破坏,所产生的降解产物峰与一叶萩碱峰能很好地分离。在3.2~3200μg.mL-1浓度范围内具有良好的线性关系,r=0.9999（n=7）。含量测定平均回收率为99.0%（n=9）,RSD为0.5%。结论该方法可用于硝酸一叶萩碱注射液的质量控制。

当归针、一叶萩碱针联合治疗糖尿病周围神经病变疗效观察

目的 :评价当归针、一叶碱针联合治疗糖尿病周围神经病变的疗效。方法 :3 0例糖尿病周围神经病变患者 ,随机分为 2组 ,每组各 1 5例 ,对照组 1 5例应用VitB族常规治疗 ,共 4周 ;治疗组 1 5例在对照组治疗基础上 ,再予肌注当归针、一叶碱针治疗 ,每日 1次 ,共 4周。结果 :治疗组显效率 66.67% ,有效率 86.70 % ,分别明显地高于对照组的 2 0 .0 0 %、40 .0 0 % ,2组比较差异有显著性意义 (P <0 .0 5 )。结论 :当归针、一叶碱针联合治疗能明显改善糖尿病性周围神经病变。

一叶萩碱的提取工艺研究

为研究叶底株的实用价值,采用大孔阳离子树脂工艺提取其中的活性生物碱,一叶萩碱。在索氏提取器中使用石油醚作溶剂,提取48 h,通过大孔阳离子树脂进行交换,提取液经碱化后再用二氯乙烷萃取其活性成分一叶萩总生物碱,再经大孔阳离子树脂分离后得到了黄色化合物一叶萩碱。实验结果表明,优化的提取条件是:样品液上柱量为90 mg/m L,洗脱流速为4 m L/min,选择80%乙醇为洗脱溶剂;洗脱液流速对纯化收率影响最大,其次是洗脱剂配比,最后是上柱量。

左旋一叶萩碱诱导人非小细胞肺癌A549细胞自噬机制的研究

目的:研究左旋一叶萩碱诱导人非小细胞肺癌A549细胞自噬的机制。方法:常规体外培养人非小细胞肺癌A549细胞株,取对数生长期的细胞传代24h后加入不同浓度(6.25、12.5、25、50、100、200μmol/L)左旋一叶萩碱处理,分别继续培养24、36、48h后,用CCK-8法测定细胞增殖活性;倒置显微镜下观察对照组和各实验组的细胞形态变化;分别用不同浓度(0、20μmol/L)左旋一叶萩碱作用A549细胞48h后,进行单丹磺酰尸胺(monodansylcadaverine,MDC)染色,分别通过荧光显微镜检测细胞自噬发生情况;荧光定量RT-PCR法检测Beclin 1在mRNA水平表达变化情况。结果:左旋一叶萩碱可以抑制A549细胞增殖,并且呈浓度和时间依赖性(P<0.05)。其中,21.204μmol/L左旋一叶萩碱作用A549细胞48h后,细胞死亡率接近50%;倒置显微镜观察到药物作用后细胞形态发生了明显变化;随着左旋一叶萩碱剂量增加,MDC阳性细胞的荧光强度及细胞内MDC荧光颗粒数目明显增加。另外,研究还发现随着药物浓度的上升,自噬基因Beclin 1的表达明显增强。结论:左旋一叶萩碱具有抑制人非小细胞肺癌A549细胞增殖、诱导细胞自噬性凋亡,其作用具有浓度和时间依赖性。左旋一叶萩碱上调自噬基因Beclin 1 mRNA的表达水平可能是其诱导A549细胞自噬性凋亡的机制之一。

Aspergillus sp.D-1专一性还原左旋一叶萩碱

目的筛选具有还原左旋一叶碱能力的微生物菌株。方法通过TLC分析进行菌株的筛选,利用RP HPLC测定左旋一叶碱和产物的浓度,利用硅胶柱色谱法分离纯化产物,通过光谱分析鉴定了产物的化学结构。结果与结论筛选到一菌株Aspergillussp.D 1能够专一性地还原左旋一叶碱的γ,δ双键产生14,15二氢一叶碱。在丝状真菌中发现了一种新型的生物催化的还原反应。

盐酸一叶萩碱在神经科临床的应用

应用盐酸一叶萩碱治疗各种神经系统疾病共55例，其中周缘神经病28例，脊髓前角灰质炎后遗症3例，由增生性椎骨病引起的肩臂及腰腿痛共19例，以头晕及晕厥为主要症状的神经官能症共5例，一如应用硝酸一叶萩碱治疗时，均取得满意效果。