落叶松脂醇体外抗肿瘤作用的实验研究

目的:通过体外细胞培养技术考察落叶松脂醇(laricircsinol,以下称LA)对肿瘤细胞的增殖抑制及诱导凋亡作用。方法:采用MTT比色法、生长曲线法考察LA对肿瘤细胞增殖抑制率,荧光显微镜观察LA作用PC-3细胞后的细胞形态,流式细胞术检测LA对PC-3、KB、NB4、B16肿瘤细胞的凋亡率。结果:LA对4种肿瘤细胞均有较强的细胞毒作用,IC50分别为(0.32±0.04)、(3.92±0.09)、(0.59±0.05)、(2.17±0.11)μg.mL-1;生长曲线法结果表明LA对PC-3细胞的抑制作用呈显的著量-效关系,且在一定剂量范围内呈显著的时-效关系;荧光显微镜观察结果表明给药组细胞的细胞核改变和凋亡小体的形成;流式细胞术检测结果表明随LA浓度的增加细胞凋亡率增加,呈显著的量-效关系。结论:LA对多种肿瘤细胞均有抑制作用,诱导细胞凋亡是其作用机制之一。

Threo-(±)-开环异落叶松脂醇二阿魏酸酯的全合成

报道了双木脂素threo-(±)-开环异落叶松脂醇二阿魏酸酯的全合成.以香草醛为原料,经过两步Sto-bbe反应构建木脂素骨架,然后再用LiAlH4还原、加氢后,产物经柱层析分离,得到2个异构体meso-和threo-(±)-开环落叶松脂素;根据其NMR,IR和HRMS等谱图确认发现,极性较小的产物threo-(±)-开环落叶松脂素为合成的关键中间体.threo-(±)-开环落叶松脂素与甲氧甲基(MOM)保护的阿魏酸缩合得到目标产物threo-(±)-开环异落叶松脂醇二阿魏酸酯.合成采用汇聚法,经11步,以约8%的总产率得到了目标产物.该合成方法具有原料价廉易得及操作简便的优点,并具有一定的实用价值.

菘蓝中松脂醇-落叶松脂素还原酶编码基因IiPLR2的克隆与功能分析

松脂醇-落叶松脂素还原酶(pinoresinol-lariciresinol reductase,PLR)是植物中木脂素生物合成的关键酶,能连续催化两步反应分别生成落叶松脂素和开环异落叶松脂素。落叶松脂素等木脂素类成分是中药板蓝根发挥抗病毒活性的有效成分。为了研究板蓝根基原植物菘蓝中落叶松脂素生物合成关键酶PLR的功能,从菘蓝(Isatis indigotica)中克隆得到Ii PLR2基因序列,全长954 bp,编码317个氨基酸;多序列比对分析显示IiPLR2具有保守的还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(reduced nicotinamide adenine dinucleotide phosphate,NADPH)结合基序;进化树分析显示Ii PLR2与来自拟南芥的AtPrR1聚在同一分支;构建原核表达载体pET32a-IiPLR2,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中进行蛋白诱导表达纯化;体外酶活实验检测发现IiPLR2能够催化松脂醇生成落叶松脂素,并能进一步催化落叶松脂素生成开环异落叶松脂素。IiPLR2编码基因的克隆、序列分析及催化功能研究丰富了菘蓝中该类功能蛋白的认识,完善了菘蓝木脂素生物合成途径,为开展木脂素类成分的代谢调控和合成生物学研究提供了功能元件,也为深入研究该类蛋白的空间结构与催化功能的关系等奠定了基础。

HPLC法测定板蓝根颗粒中落叶松树脂醇-吡喃糖苷

目的测定板蓝根颗粒中落叶松树脂醇-吡喃糖苷,比较不同厂家板蓝根颗粒中落叶松树脂醇-吡喃糖苷的差异。方法采用高效液相色谱法测定,Zorbax SB-C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-水(11:89);体积流量为1.0 mL/min,检测波长为225 nm,进样量20μL,柱温为30℃。结果落叶松树脂醇-吡喃糖苷的线性范围为0.061 5～1.844 1μg(r=0.999 5),平均加样回收率为99.01%,RSD为1.99%。结论建立的方法可以简便、准确地测定板蓝根颗粒中落叶松树脂醇-吡喃糖昔,重现性好;各厂家生产的板蓝根颗粒中落叶松树脂醇-吡喃糖苷的差别较大,有必要建立落叶松树脂醇-吡喃糖昔的定量控制方法。

落叶松脂醇-4-β-D-吡喃葡糖苷抑制变异链球菌生长和生物膜形成的作用研究

【目的】研究落叶松脂醇-4-β-D-吡喃葡糖苷对变异链球菌生长和生物膜形成的影响。【方法】四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)用于分析落叶松脂醇-4-β-D-吡喃葡糖苷对变异链球菌生物膜形成的影响;用氧敏感性测试法检测落叶松脂醇-4-β-D-吡喃葡糖苷对变异链球菌氧敏感性的影响;用Real-time PCR方法检测基因的m RNA水平;采用人单核细胞检测了落叶松脂醇-4-β-D-吡喃葡糖苷的细胞毒性。【结果】落叶松脂醇-4-β-D-吡喃葡糖苷能显著抑制变异链球菌的生长和生物膜形成,而这种抑制作用呈现浓度依赖性。Real-time PCR实验发现,50μg/m L落叶松脂醇-4-β-D-吡喃葡糖苷作用的生物膜中,brp A(transcriptionalregulator)、rec A(recombinaseA)、nth(endonucleaseIII)、lux S(S-ribosylhomocysteinase)、ffh(fifty four homologue)、smx(sulfamethoxazole)、gtf B(glucosyltransferase-I)和gtf C(glucosyltransferase-SI)的m RNA表达水平均显著降低。同时研究发现,25、50、75μg/m L的落叶松脂醇-4-β-D-吡喃葡糖苷对人单核细胞的生长和LDH活性均无影响。【结论】落叶松脂醇-4-β-D-吡喃葡糖苷具有抑制变异链球菌生长和生物膜形成的作用,分子水平可以下调brp A、rec A、nth、lux S、ffh、smx、gtf B和gtf C等生物膜形成相关基因的mR NA表达水平,同时研究发现其无细胞毒性,因此有望成为抗菌治疗的潜在药物。

植物中松脂醇-落叶松脂素还原酶催化特征研究进展

松脂醇-落叶松脂素还原酶(PLR)是植物中木脂素生物合成的关键酶,能够催化松脂醇转化为落叶松脂素,并进一步催化落叶松脂素生成开环异落叶松脂素,且存在底物立体选择性,是一种NADPH依赖型还原酶。PLR的催化产物位于不同类型8-8′木脂素的源头,其底物选择性直接决定木脂素的骨架类型,如呋喃、二苄基丁烷、二苄基丁内酯和芳基四氢萘木脂素。因此,PLR的催化特性和表达特征在植物木脂素组成及其生物活性多样性中发挥重要作用。该文综述了PLR在植物木脂素生物合成中的作用、对映异构体选择性及其催化机制,以期为进一步研究PLR基因的生物学功能以及催化机制奠定基础,并为不同类型木脂素的精确生物合成指明方向。

刺桑皮正丁醇部位化学成分研究

为研究刺桑(Taxotrophis ilicifolia)皮正丁醇部位的化学成分,该研究采用硅胶、ODS、Sephadex LH-20、反相半制备高效液相等色谱法对刺桑皮正丁醇萃取部位进行分离纯化,并综合理化性质及波谱数据鉴定其化合物的结构。结果表明:从刺桑皮正丁醇萃取物中分离得到16个化合物,分别鉴定为icariside E5(1)、裂环异落叶松脂醇-9-O-β-吡喃葡萄糖苷(2)、2,4,6-三甲氧基苯酚-1-O-β-D-葡萄糖苷(3)、9-O-β-glucopyranosyl trans-cinnamyl alcohol(4)、3,4,5-三甲氧基苯酚-1-O-β-呋喃芹糖基-(1″→6′)-β-吡喃葡萄糖苷(5)、3-羟基-4,5-二甲氧基苯酚-β-D-吡喃葡萄糖苷(6)、2,6-二甲氧基-4-羟基苯酚-1-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(7)、isotachioside(8)、ficuscarpanoside A(9)、uridine(10)、methyl syringate 4-O-β-D-glucopyranoside(11)、3,4,5-三甲氧基苯酚-β-D-吡喃葡萄糖苷(12)、木犀草素(13)、人参皂苷Rg1(14)、(+)-lyonirenisol-3α-O-β-D-glucopyranoside(15)、myricetin 3-neohesperidoside(16)。所有化合物均为首次从该属植物中分离得到。

香加皮化学成分的研究

目的:研究香加皮的化学成分。方法:采用硅胶、ODS柱色谱等方法分离纯化,利用理化性质及波谱方法鉴定化学成分的结构。结果:分离并鉴定了11个化合物,分别为异香草醛(Ⅰ),4-甲氧基水杨酸(Ⅱ),4-甲氧基水杨醛(Ⅲ),咖啡酸乙酯(Ⅳ),东莨菪内酯(Ⅴ),5,5′-二甲氧基落叶松脂醇-4′-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(tortosideB)(Ⅵ),periplocosideL(Ⅶ),Δ5-孕甾烯-3β,20(S)-二醇(Ⅷ),Δ5-孕甾烯-3β,20(S)-二醇-20-O-β-D-吡喃葡萄糖-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(Ⅸ),Δ5-孕甾烯-3β,20(S)-二醇-20-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷(Ⅹ),Δ5-孕甾烯-3β,20(S)-二醇-3-O-[2-O-乙酰基-β-D-吡喃洋地黄糖基(1→4)-β-D-吡喃加拿大麻糖]-20-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖基(1→2)-β-D-吡喃洋地黄糖苷(Ⅺ)。结论:其中化合物Ⅳ,Ⅵ,Ⅸ和Ⅹ为首次从该种药材中得到。

板蓝根的化学成分研究

目的对十字花科菘蓝属植物板蓝根 (IsatisindigoticaFort.)的提取物的化学成分进行了化学鉴定。方法色谱技术进行分离 ,MS、NMR和IR光谱解析及与对照品比较鉴定化合物。结果从 80 %乙醇洗脱部分、氯仿萃取部分、正丁醇萃取部分中共分离得到 6个化合物 ,根据理化性质和谱学分析鉴定为 ( + ) 异落叶松树脂醇 ( ( + ) isolariciresinol,Ⅰ )、5 羟甲基糠醛 ( 5 hydroxymethyl furaldehyde,Ⅱ )、5 羟甲基糠酸 ( 5 hydroxymethyl furoicacid ,Ⅲ )、正丁基 β D 吡喃型果糖 (n butyl β D fructopyronoside,Ⅳ )、表告依春 (epigoitrin ,Ⅴ )、蔗糖 (sucrose,Ⅵ )。 结论化合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ为首次从菘蓝属中分离得到的已知化合物。

血满草化学成分的研究

首次对采自峨眉山的接骨木属植物血满草进行了化学成分的研究,从氯仿部分及总浸膏的水悬浮液中分离得到5个化合物:分别是1-(3-羟基-4-甲氧基)乙烷-1′,2′-二醇(1-(3-hydroxy-4-methoxyphenyl)-1′,2′-ethane-diol,1),熊果酸(ursolic acid,2),1-(3,4,5-三甲氧基苯基)乙烷-1′,2′-二醇(1-(3,4,5-trimethoxyphenyl)-1′,2′-ethanediol,3),落叶松脂醇(lariciresinol,4),5,7,3′,4′-四羟基黄酮-3-O-吡喃鼠李糖(1→6)吡喃葡萄糖苷(5,7,3′,4′-tetramethoxyflavone-3-O-rhamnopyranosyl-(1→6)-glucopyranoside,5)。其中1、3、4、5为首次从该植物中分离得到。

板栗花中一个新木脂苷类化合物

目的 研究板栗花的活性成分。方法 通过柱色谱进行分离 ,利用波谱数据综合解析鉴定化合物结构。结果 从乙酸乙酯部位得到 5个化合物 ,分别鉴定为杨梅树皮素 (I)、槲皮素 (II)、没食子酸 (III)、4 喹啉酮 2 羧酸(IV)和 (+) 异落叶松树脂醇 9′ O α L 鼠李糖苷 (V)。结论 IV均为首次从板栗花中得到 ,其中化合物V为新化合物 。

直铁线莲宁B在人肝微粒体中的体外代谢研究

目的应用人源肝微粒体孵育体系考察直铁线莲宁B的体外代谢。方法将直铁线莲宁B与人肝微粒体共同温孵,用蛋白沉淀法处理样品,采用LC-MS/MS法对代谢产物进行定性和定量分析。色谱条件:Phenomenex Luna C18色谱柱(100 mm×2.0 mm,5μm);流动相:乙腈(含0.1%甲酸)-水(含0.1%甲酸),梯度洗脱;流速400μL·min^(-1);进样量10μL。质谱条件:电喷雾离子源,负离子模式检测。结果直铁线莲宁B(化合物1)在人肝微粒孵育体系中可代谢为落叶松脂醇-4-O-β-D-葡萄糖苷(化合物2)和落叶松脂醇-4′-O-β-D-葡萄糖苷(化合物3)。结论在人肝微粒孵育体系中,直铁线莲宁B可以部分代谢为抗流感活性更强的化合物2,提示在体内可能通过原型药和活性代谢物共同发挥抗流感药效,为该化合物药效评价提供了重要依据。

HPLC法测定不同产地功劳木中3个有效成分

目的测定功劳木中3,4,5-三甲氧基苯酚-1-O-β-D-葡萄糖苷(1)e、rythro-syringoylglycerol-8-O-β-D-glucoside(2)、5,5'-二甲氧基落叶松脂醇-4'-O-β-D-葡萄糖苷(3),为功劳木质量控制提供科学依据。方法采用高效液相色谱法,依利特Hypersil-C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相为乙腈-水(14∶86);检测波长280 nm;体积流量1 mL/min;柱温25℃。结果化合物12,,3分别在0.12～2.40μg(r=0.999 5),0.20～4.00μg(r=0.999 6),0.07～1.40μg(r=0.999 6)与峰面积Y线性关系良好,平均加样回收率依次为100.3%,98.8%,97.2%(n=6)。结论该方法快速,简单,重复性好,适用于同时测定功劳木中化合物12,3,。

HPLC法同时测定山栀茶中的3种苷类成分

目的建立HPLC法同时测定山栀茶Pittosporum glabratum Lindl.中3,4,5-三甲氧基苯-1-O-β-D-呋喃芹糖-（1→6）-β-D-吡喃葡萄糖苷、丁香脂素-4,4＇-O-双-β-D-葡萄糖苷、异落叶松树脂醇-9＇-O-β-D-葡萄糖苷的含有量。方法山栀茶提取液分析采用Diamosil C18色谱柱（4.6 mm×250 mm,5μm）;乙腈-0.1%磷酸水溶液为流动相,梯度洗脱;体积流量1.0 m L/min;柱温30℃;检测波长210 nm。结果这3种成分均达到基线分离,线性关系良好（r≥0.999 9）,加样回收率在98.5%~100.5%之间,RSD均小于3%。结论该方法灵敏准确、可靠稳定,可用于山栀茶药材的质量评价。

肉珊瑚化学成分研究

目的:研究萝藦科肉珊瑚属植物肉珊瑚Sarcostemma acidaum(Roxb.)Voigt的化学成分。方法:综合运用多种柱色谱和半制备高效液相色谱技术在活性追踪的指导下对肉珊瑚的化学成分进行分离纯化,并根据化合物的理化性质以及NMR、MS数据进行结构鉴定。结果:从肉珊瑚藤的乙醇提取物中共分离得到20个化合物,分别鉴定为:3,3′,4-三甲氧基鞣花酸(1)、3,3′-二甲氧基鞣花酸(2)、3,3′,4′-三甲氧基鞣花酸(3)、eschweilenol C(4)、4,4′-二甲氧基鞣花酸(5)、3,4′-二甲氧基鞣花酸-4-O-β-D-木糖苷(6)、3-甲氧基鞣花酸(7)、鞣花酸(8)、4-甲氧基鞣花酸(9)、3,3′,4,4′-tetra-O-methylflavellagic acid(10)、itolide B(11)、sacidumlignans A(12)、sacidumlignans B(13)、(+)-lyoniresinol(14)、异落叶松脂醇(15)、3-甲氧基异落叶松脂醇(16)、(22E,24R)-麦角甾-7,22-二烯-6β-甲氧基-3β,5α-二醇(17)、(22E,24R)-5α,6α-环氧麦角甾-8,22-二烯-3β,7α-二醇(18)、过氧化麦角甾醇(19)、啤酒甾醇(20)。结论:除化合物12和13外,其他化合物均为首次从肉珊瑚属植物中分离得到。

苍白秤钩风中木脂素类化学成分的研究

从中药苍白秤钩风Diploclisiaglaucescens的藤茎中首次分离得到三个木质素类化合物 ,根据理化性质 ,波谱分析 ,化学方法以及X衍射实验 ,分别将其结构确定为左旋丁香脂素 (1)、(7S ,8R ,8’R) 5 ,5’ 2甲氧基落叶松树脂醇 (2 )和 (7S ,8R) 二聚松柏醇 (3)。

糙叶败酱正丁醇部位化学成分研究

目的研究糙叶败酱Patrinia scabra根及根茎的化学成分。方法利用大孔吸附树脂、硅胶及Sephadex LH-20凝胶柱色谱对其化学成分进行分离、纯化,根据理化性质及波谱数据进行结构鉴定。结果从糙叶败酱水提取物的正丁醇萃取部位分离得到12个化合物,分别鉴定为5-O-阿魏酰奎宁酸（1）、7α-莫诺苷（2）、7β-莫诺苷（3）、白花败酱醇（4）、原儿茶酸（5）、β-胡萝卜苷（6）、isopatriscabroside I（7）、patriscabroside I（8）、patrinioside（9）、松脂醇-4,4′-二-O-β-D-葡萄糖苷（10）、落叶松脂醇-4′-O-β-D-葡萄糖苷（11）、villosolside（12）。结论糙叶败酱正丁醇部位以环烯醚萜类化合物居多,其中,化合物2~6为首次从该植物中分离得到,化合物1为首次从败酱科败酱属植物中分离得到。

九里香醇提物中抗肿瘤活性成分的研究

目的研究中药九里香醇提物中抗肿瘤活性的贡献成分。方法采用MTT和SRB法测定九里香醇提物(1~100μmol·L^(-1))对U937,HL-60,K562,Bel7402,Hela 5种人肿瘤细胞的生长抑制活性。运用常规色谱方法对活性成分进行追踪分离,采用现代谱学技术鉴定化合物的结构,并对分离得到的化合物进行体外活性测定。结果在给药48 h后,部分醇提物随着给药浓度的增加,肿瘤细胞的存活率明显下降,在醇提物的A8和A9部分共归属并鉴定出九里香抗肿瘤有效部位的活性化合物4个,分别为异落叶松脂醇(Ⅰ),二甲氧基异落叶松脂醇(Ⅱ),3-甲氧基异落叶松脂醇(Ⅲ)和5'-甲氧基异落叶松脂醇(Ⅳ)。结论化合物Ⅰ和Ⅱ可能为九里香醇提物中抗肿瘤作用的活性成分,化合物Ⅰ~Ⅳ为首次从该植物中分离得到。