抗菌多肽葛佬素的原核表达纯化及活性鉴定

目的 原核表达抗菌肽葛佬素,并对其生物学活性进行初步鉴定。方法 应用pET原核表达系统进行目的 蛋白的表达,应用蛋白免疫印迹对蛋白进行鉴定,并采用鲎试剂法,对表达产物的生物活性进行初步鉴定。结果 体外表 达产物经蛋白免疫印迹鉴定,为融合有聚组氨酸标签的葛佬素抗菌肽,鲎试剂检测结果表明,该表达产物对LPS有明显的 中和活性。结论 在原核表达系统中成功表达了具有生物活性的抗菌肽葛佬素。

利用RTS500系统进行抗菌肽葛佬素蛋白的体外表达

目的:构建含目的基因葛佬素(gloverin)的重组子并通过体外快速翻译系统RTS500(rapidtranslationsystem)对其进行表达。方法:采用PCR方法扩增葛佬素cDNA,将其与表达载体pIVEX2.3连接;采用PCR及双酶切方法鉴定连接产物。将含目的基因片段的阳性重组质粒通过体外表达翻译系统RTS500,使其蛋白能在大肠杆菌(E.coli)裂解产物中进行表达。应用蛋白免疫印迹方法对表达产物进行鉴定。结果:pIVEX2.3G重组表达质粒通过体外表达翻译系统RTS500可表达出分子量约为14.4的蛋白;蛋白免疫印迹证实该蛋白为带有多聚组氨酸标签的融合蛋白。结论:抗菌肽葛佬素可在体外大肠杆菌裂解产物中进行表达。

葛佬素的原核表达及其在牙髓细胞中的抗炎效应研究

目的:采用原核表达系统表达抗菌肽葛佬素,并观察其对原代牙髓细胞炎性细胞因子IL-1β分泌的影响。方法:应用pET原核表达系统进行目的蛋白的表达,应用蛋白免疫印迹对蛋白进行鉴定,并采用ELISA方法,观察重组葛佬素对内毒素诱导的牙髓细胞IL-1β释放的影响。结果:原核表达产物经蛋白免疫印迹鉴定,为融合有聚组氨酸标签的葛佬素抗菌肽,ELISA检测结果表明,该表达产物能够以剂量依赖方式抑制LPS诱导的IL-1β释放。结论:在原核表达系统中成功表达了具有生物活性的抗菌肽葛佬素,该表达产物可以抑制牙髓细胞炎性因子IL-1β的释放。

抗菌肽葛佬素在非洲绿猴肾细胞株COS-7中的表达及其活性的初步分析

目的 观察自行设计的葛佬素cDNA在非洲绿猴肾细胞株COS 7中的表达及其表达产物的抗菌作用。 方法 分析同种族蛋白质AttacinAcDNA序列各种遗传密码子的出现频度 ,结合已知的葛佬素蛋白质序列 ,设计、合成其cDNA序列。经测序验证后 ,将葛佬素基因插入真核细胞表达载体pCDSI中 ,构建载体pBZHG。随后以脂质体为载体 ,对COS 7细胞进行质粒pBZHG和空载体pCDSI的转染 ,72h后收集细胞培养上清液 ,进行杀菌活性的检测 (以正常COS 7细胞培养上清作对照 )。 结果 人工设计的葛佬素cDNA序列在COS 7中得到表达。与转染空载体的细胞和正常细胞比较 ,转染pBZHG的COS 7细胞培养上清对大肠杆菌J5具有杀菌活性。 结论 笔者所设计的葛佬素cDNA序列是正确的 ,由此可为深入研究葛佬素的抗菌及抗内毒素作用提供实验依据。