大孔吸附树脂纯化葛根总皂苷的研究

目的筛选大孔吸附树脂纯化葛根总皂苷的最佳工艺,为葛根工业化生产提供参考。方法以葛根总皂苷质量分数为指标,从树脂类型、上样吸附速度、洗脱剂用量、乙醇体积分数等参数优选葛根总皂苷的最佳纯化工艺条件。结果 D101型大孔吸附树脂纯化效果较好,其最佳工艺条件为:取适当质量浓度的供试品溶液上样,吸附速度为2 BV.h-1,吸附饱和后,先以4 BV水洗脱,再分别以体积分数30%、50%及70%乙醇各4 BV洗脱。纯化后产物中总皂苷质量分数为26.32%。结论本方法简便可行、纯化效果好,可为葛根复方新药研发及工业化生产提供参考。

葛根总皂苷调控NAMPT-Sirt1轴诱导BMSCs向髓核样细胞分化

目的研究葛根总皂苷(TSPL)对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)向髓核样细胞分化的影响及其作用机制。方法体外建立大鼠腰椎间盘退变模型,分为假手术组、模型组、30 mg/kg TSPL治疗组和50 mg/kg TSPL治疗组。原代培养的BMSCs分为BMSCs组,BMSCs-TSPL(10、20、30、40、50μmol/L)组,BMSCs-TSPL(30μmol/L)-FK866[烟酰胺磷酸核糖转移酶(NAMPT)特异性抑制剂,2.5μmol/L]组,BMSCs-TSPL(30μmol/L)-SRT2104(Sirt1激活剂,10μmol/L)组。二甲基亚甲基蓝比色法检测细胞和组织中糖胺聚糖含量,qPCR和Western blot检测髓核样细胞COL2A1、Aggrecan、Sox9、Tie2以及Sirt1的mRNA和蛋白表达量。WST-8法检测细胞中烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD^(+))水平,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测腺苷三磷酸(ATP)和NAMPT水平。结果与假手术组相比,模型组大鼠椎间盘L5~S1组织中糖胺聚糖含量减少(P<0.05);与模型组相比,TSPL治疗组大鼠糖胺聚糖含量增加,且50 mg/kg TSPL效果优于30 mg/kg TSPL(P<0.05);与BMSCs组相比,TSPL单独或联合SRT2104处理增加BMSCs中糖胺聚糖、COL2A1、Aggrecan、Sox9和Sirt1的mRNA和蛋白表达量及NAD^(+)、ATP和NAMPT含量,而降低Tie2的mRNA和蛋白表达量(P<0.05);与BMSCs-TSPL组相比,BMSCs-TSPL-FK866组COL2A1、Aggrecan、Sox9和Sirt1的mRNA和蛋白表达量及糖胺聚糖、NAD^(+)、ATP和NAMPT含量降低,而BMSCs-TSPL-SRT2104组上述指标水平增加(P<0.05)。结论TSPL可通过NAMPT-Sirt1轴诱导大鼠BMSCs向髓核样细胞分化。

大孔吸附树脂纯化葛根总黄酮和总皂苷的研究

目的筛选同时纯化葛根总黄酮和总皂苷的最佳吸附树脂,系统研究影响大孔吸附树脂吸附分离的多种因素,为葛根及其复方新药研发及工业化生产提供参考。方法以葛根总黄酮和总皂苷含量为考察指标,通过测定大孔吸附树脂的吸附和解析能力及吸附动力学曲线、吸附等温线、漏出曲线的绘制,优选葛根总黄酮和总皂苷的最佳纯化工艺条件。结果 D101型大孔吸附树脂纯化效果较好,其最佳工艺条件为取适当浓度的葛根提取液,上样吸附速度为2BV/h,饱和吸附后(总黄酮的饱和吸附量为54.93mg/g),先以4BV水洗脱,再分别以4BV30%、50%及70%乙醇解析。所得产物总黄酮和总皂苷含量分别为58.89%、26.32%。结论方法简便可行,纯化效果好,能为葛根复方新药研发及工业化生产提供参考。