葛根总黄酮对胰岛素抵抗模型HepG2细胞糖代谢的改善作用及机制研究

目的研究葛根总黄酮对胰岛素抵抗(IR)HepG2细胞模型糖代谢的影响,并探讨其作用机制。方法采用含胰岛素0.1μmol/L的培养液诱导HepG2细胞IR模型,使用10、20和50μmol/L葛根总黄酮干预细胞,筛选出最佳浓度。Western blot检测各组细胞内葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)、泛素E3连接酶(c-Cbl)、磷脂酰肌醇三羟基激酶(PI3K)、磷酸化PI3K(p-PI3K)、蛋白激酶B(AKT)和磷酸化AKT(p-AKT)蛋白表达水平;比色法测定细胞内葡萄糖、乳酸及ATP含量;蒽酮法测定细胞内糖原含量。结果成功构建HepG2细胞IR模型。与对照组比较,模型组细胞内GLUT4、c-Cbl、p-PI3K和p-AKT蛋白表达水平显著降低(均P<0.01),葡萄糖、乳酸、ATP及糖原含量也显著降低(均P<0.01)。50μmol/L葛根总黄酮干预IR HepG2细胞模型24 h后,细胞内GLUT4、c-Cbl、p-PI3K和p-AKT蛋白表达升高(均P<0.01),且细胞内葡萄糖、乳酸、ATP及糖原含量升高(均P<0.01)。结论葛根总黄酮可提高IR模型HepG2细胞对胰岛素的敏感性,促进葡萄糖摄取及细胞内的糖代谢过程,其作用机制可能与上调c-Cbl/PI3K/AKT信号通路相关。

中药复杂提取物无定形态转晶现象及其对溶出行为的影响研究——以葛根总黄酮为例

为保障中药产品质量,研究了中药复杂提取物的转晶现象及固态形式对理化性质的影响。以葛根总黄酮提取物为模型药物,通过不同条件下放样使其转晶,并进行特性溶出试验。发现环境应力条件下湿度是诱导葛根总黄酮转晶的关键因素,湿度越高,转晶越快;转晶后,葛根总黄酮溶出速率最高下降了96.51%。进一步模拟葛根总黄酮的制剂工艺后发现,引入了水分后的湿法制粒过程也将导致转晶行为并降低溶出速率。转晶样品的溶出速率与转晶量之间存在反比例关系。中药提取物在储存和制剂过程中均存在转晶风险,其转晶行为会对溶出速率产生显著影响,进而影响中药产品质量。本研究发现了无定形态中药复杂提取物的转晶现象,并系统研究了转晶现象对溶出行为的影响,为保障中药产品质量、促进中药制剂水平的提高提供了新的研究思路。

三七总皂苷联合葛根总黄酮对高脂血症合并骨质疏松大鼠的改善作用及机制

目的探讨三七总皂苷联合葛根总黄酮对高脂血症合并骨质疏松大鼠的改善作用及机制。方法50只健康雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组、模型组、骨化三醇组(45 ng/kg)、三七总皂苷-葛根总黄酮1∶2组(0.6 g/kg+0.4 g/kg)、三七总皂苷-葛根总黄酮2∶1组(1.2 g/kg+0.2 g/kg),每组10只。分别于给药前、给药12 w、给药24 w测量大鼠体质量、腹围、体长,计算李氏指数。给药24 w结束时麻醉后眼眶取血,检测血清三酰甘油、总胆固醇、低密度脂蛋白、骨钙素、碱性磷酸酶含量。之后处死大鼠,快速剥取股骨和胫骨,苏木素-伊红(HE)染色观察胫骨病理形态变化;RT-PCR和Western印迹检测大鼠骨组织中过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)γ、Runt相关转录因子(RUNX)2mRNA和蛋白表达。结果给药前、给药12 w、给药24 w后,与正常对照组相比,模型组大鼠体质量明显升高(P<0.01);给药12 w、给药24 w后,与模型组相比,各给药组体质量明显降低,其中三七总皂苷-葛根总黄酮2∶1组下降幅度最明显(P<0.05)。模型组腰围、李氏指数明显高于正常对照组(P<0.01);各给药组腰围、李氏指数明显低于模型组,其中三七总皂苷-葛根总黄酮2∶1组下降幅度最明显(P<0.05)。给药24 w后,与正常对照组相比,模型组三酰甘油、总胆固醇、低密度脂蛋白水平明显升高,骨钙素、碱性磷酸酶水平明显降低(P<0.05);与模型组相比,三七总皂苷-葛根总黄酮1∶2组、三七总皂苷-葛根总黄酮2∶1组三酰甘油、低密度脂蛋白水平明显降低(P<0.05);与模型组相比,各给药组总胆固醇水平明显降低,骨钙素、碱性磷酸酶水平明显升高(P<0.05)。给药24 w后,与正常对照组相比,模型组PPARγmRNA和蛋白表达水平明显升高,Runx2 mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.05);与模型组相比,各给药组PPARγmRNA和蛋白表达水平明显降低,Runx2 mRNA和蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。结论三七总皂苷联合葛根总黄酮能够下调PPARγ表达、上调Runx2表达,进而影响血液中脂代谢和骨代谢,改善骨骼系统功能,达到对高脂血症和骨质疏松的治疗作用,其中以三七总皂苷-葛根总黄酮2∶1效果最佳。

葛根总黄酮中葛根素的分离研究

在对吸附分离所用吸附剂进行筛选的基础上 ,提出使用大孔吸附树脂吸附、浓度梯度洗脱分离葛根素的柱层析工艺路线。实验表明 ,高径比为 1 0∶ 1的层析柱在 30℃时以 2 .0 m L/min的流速洗脱 ,其效果最佳 ,葛根素的收率达 93.75 %。实验中以薄层层析法为定性分析手段 ,以紫外一阶导数分光光度法为定量分析手段。

葛根总黄酮生物黏附性缓释片在家犬体内的药动学及生物利用度研究

目的研究葛根总黄酮(TPF)生物黏附性缓释片和普通片在家犬体内的药动学与生物利用度,揭示葛根总黄酮生物黏附性缓释片在家犬体内的药动学变化规律,为临床合理运用该药提供实验依据。方法健康家犬6只,以自身前后交叉对照方式,单剂量分别给予葛根总黄酮生物黏附性缓释片和普通片600mg。葛根素血药浓度经时数据以3P87药动学程序处理,以对两种片剂在家犬体内的动态过程进行拟合。以非室模型统计矩方法,计算药时曲线下面积(AUC0→12),并由血药浓度数据读取Cmax,tmax,经统计分析比较普通片与缓释片的生物利用度。结果单剂量给予家犬TPF片及生物黏附片后,葛根素血药浓度变化符合一级吸收一室模型,Ke分别为(0.461±0.115)h-1,(0.238±0.042)h-1;Ka分别为(0.844±0.404)h-1,(0.446±0.100)h-1;t1/2ka分别为(0.954±0.352)h,(1.609±0.292)h,t1/2ke分别为(1.570±0.333)h,(2.995±0.617)h。普通片的AUC0-12,Cmax,tmax分别为(4430±998)ng·h·mL-1,(1241±247)ng·mL-1和(2.2±0.6)h。缓释片的AUC0→12,Cmax和tmax分别为(6459±738)ng·h·mL-1,(1040±134)ng·mL-1和(4.0±0.7)h。以普通片为参比制剂,缓释片的生物利用度为(151.4±37.6)%。结论葛根总黄酮缓释片在家犬体内表现出较好的缓释特性,主要药动学参数发?

大孔吸附树脂分离纯化葛根总黄酮的研究

目的 研究大孔吸附树脂分离纯化葛根总黄酮的工艺 ,为葛根总黄酮的工业化生产提供实验依据。方法 采用D1 0 1 型、D2 0 1 型、AB 8型 3种大孔吸附树脂对葛根总黄酮进行吸附纯化 ,以总黄酮收率、纯度为考察指标综合评价。结果 D1 0 1 型、D2 0 1型、AB 8型大孔吸附树脂吸附 3种方法中静态饱和吸附量以干树脂计分别为 1 1 3 .5 ,1 33 .1和 1 33 .9mg·g- 1 ;静态脱吸附率分别为 75 .6 % ,66 .7% ,94.2 % ;以 70 %的乙醇为洗脱剂洗脱率最高为 92 .4 % ;AB 8型吸附树脂饱和吸附 洗脱量为 82 .0mg·g- 1 ;稳定性实验中第 1 1个周期总黄酮收率为 91 .3 % ,纯度为 86 .0 %。结论 3种纯化方法中 ,以AB 8型树脂综合性能最好 。

饲粮中添加葛根总黄酮对爱拔益加肉鸡生长性能及肉品质的影响

本试验旨在研究饲粮中添加不同水平葛根总黄酮对爱拔益加（AA）肉鸡生长性能及肉品质的影响。选择健康1日龄AA肉鸡275羽,随机分为5个组,每组5个重复,每个重复11羽鸡。对照组饲喂基础饲粮,试验组分别在基础饲粮中添加10、50、250、1 250 mg/kg葛根总黄酮。试验期42 d。结果表明：1）10 mg/kg添加组AA肉鸡的平均日增重在8～14日龄、15～21日龄和29～35日龄时均显著高于对照组（P〈0.05）,但在22～28日龄时显著低于对照组（P〈0.05）;250 mg/kg添加组AA肉鸡的平均日增重在8～14日龄时显著高于对照组（P〈0.05）。10 mg/kg添加组AA肉鸡的料重比在15～21日龄、29～35日龄和36～42日龄时显著低于对照组（P〈0.05）,但在22～28日龄时显著高于对照组（P〈0.05）。各组AA肉鸡的平均日采食量差异不显著（P〉0.05）。2）与对照组相比,10 mg/kg添加组AA肉鸡胸肌、腿肌的亮度（L＊）值显著降低（P〈0.05）,红度（a＊）值有升高趋势但差异不显著（P〉0.05）;250 mg/kg添加组腿肌亮度值显著低于对照组（P〈0.05）;50 mg/kg添加组胸肌、腿肌的黄度（b＊）值均显著低于对照组（P〈0.05）。与对照组相比,250、1 250 mg/kg添加组AA肉鸡的胸肌剪切力显著降低（P〈0.05）;250 mg/kg添加组的胸肌水分含量显著高于对照组（P〈0.05）。结果表明,饲粮中添加10 mg/kg的葛根总黄酮可提高AA肉鸡的生长性能,但添加250 mg/kg的葛根总黄酮可改善肌肉的色泽和嫩度。

葛根总黄酮诱导人早幼粒细胞白血病细胞株NB4细胞凋亡的实验研究

本研究探讨葛根有效成分对恶性白血病可能的凋亡诱导作用及其分子机制。采用葛根总黄酮(flavonoids of puerarin,PR)处理人早幼粒细胞白血病(APL)细胞株NB4,用MTT法检测细胞增殖抑制率;FITC-Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡率;实时定量PCR检测pml/rarα、bcl-2、survivin基因表达;Western blot检测JNK、p38MAPK、FasL及caspase相关酶的变化。结果发现,PR能明显抑制NB4细胞增殖,并诱导细胞凋亡。随着PR浓度的增加,pml/rarα、bcl-2及survivin基因在mRNA水平表达下调,JNK、FasL、caspase3及caspase8蛋白表达增加,与PR浓度呈正相关;PR联合三氧化二砷(arsenic trioxide,ATO)处理后上述作用更为明显。结论:PR诱导NB4细胞凋亡的机制可能与JNK相关信号分子的活化有关;PR联合ATO具有协同诱导NB4细胞凋亡的作用。

葛根总黄酮生物粘附性缓释片体外组织粘附力及释放度研究

目的 :探讨葛根总黄酮缓释片的体外释放度及其释药动力学 ,测定、比较生物粘附性缓释片和普通片与家兔离体胃、小肠组织的粘附力。方法 :采用转篮法 ,以0 1mol/LHCl900ml为溶出介质 ,转速100r/min测定其累积释放度 ,并分别用单指数模型、威布尔分布函数、Higuchi方程、零级释放模型对释放度进行释药动力学模拟 ,根据各模型拟合的AIC计算值与实测值的绝对误差和相对误差确定缓释片的最佳拟合模型 ,同时以自制粘附力测定装置测定、比较生物粘附性缓释片及普通片与家兔离体胃、肠组织的粘附力。结果 :缓释片以单指数模型拟合最佳 ,生物粘附性缓释片与家兔离体胃、肠组织的粘附力明显大于普通片 (P<0 01) ,且与小肠的粘附力大于胃 (P<0 05)。结论 :缓释片在体外释药动力学符合单指数模型 ;生物粘附性缓释片在胃、肠道具有较强的粘附作用。

葛根总黄酮对去势大鼠骨质疏松的保护作用

目的研究葛根总黄酮对去势大鼠骨质疏松的保护作用。方法 10周龄SPF级SD雌性大鼠随机分为正常组、假手术组、去势模型组、替勃龙组(1.25 mg/kg)和葛根总黄酮(50、100、200 mg/kg)给药组。各给药组按上述剂量灌胃给药,每天1次,持续12周。12周后,双能X射线骨密度仪测定各组大鼠右股骨骨密度(BMD)和骨矿物含量(BMC),三点弯曲实验测左股骨生物力学的性能,左胫骨HE染色做组织形态学分析。ELISA法测尿液的羟脯氨酸(HOP)、血清骨特异性碱性磷酸酶(BALP)、卵泡生成素(FSH)、黄体生成素(LH)和雌激素(E2)水平,RT-PCR法检测下丘脑促性腺激素释放激素(GnRH)mRNA的水平。结果葛根总黄酮(100、200 mg/kg)可显著增加去势大鼠右股骨BMD、左股骨生物力学性能,上调下丘脑GnRH mRNA表达,并可降低尿液HOP、血清BALP、FSH和LH的水平,减少骨吸收。结论葛根总黄酮对去势大鼠的骨质疏松有保护和预防性治疗的作用。

大孔树脂分离葛根总黄酮工艺优化

目的 :筛选分离葛根总黄酮的最佳树脂 ,并对影响分离的各种因素进行系统的研究 ,使分离工艺达到最优化。方法 :采用静态与动态的吸附 解吸两种方法 ,用紫外分光光度法测定葛根总黄酮的含量对工艺进行评价。结果 :SP70分离效果最好 ,其最佳工艺为药液浓度 0 .5 g·mL-1 (相当于原生药 )、pH为 5～ 6、上样量为 6 0BV(树脂床体积 ) ,以 2BV/h吸附速率进行吸附 ,4BV的 70 %乙醇、2BV/h的流速进行洗脱效果最佳。经SP70处理后的葛根总黄酮可达 80 %以上。结论 :该法简单可行 ,分离效果好 ,能满足于大生产的要求。

葛根总黄酮对高糖致血管内皮细胞损伤的保护作用及其机制

目的观察葛根总黄酮对高糖致脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖和细胞周期的影响,探讨葛根总黄酮保护高糖致HUVEC损伤的作用机制。方法采用MTT法观察不同浓度葡萄糖对HUVEC增殖的影响,并观察不同浓度葛根总黄酮对高糖环境下HUVEC增殖及用流式细胞仪检测细胞周期的变化,并测定细胞上清液中SOD活性、NO和ICAM-1的含量。结果30 mmol.L-1葡萄糖可明显抑制HUVEC的增殖反应;降低S期细胞的百分率,增加G0/G1期细胞百分率;并降低HUVEC上清液中SOD活性和NO的含量、升高ICAM-1的含量。葛根总黄酮干预后,随着药物浓度的增加,G0/G1期细胞百分率递减,而S期细胞百分率递增;并可提高细胞上清液中NO水平和SOD活性,降低ICAM-1水平,与30 mmol.L-1葡萄糖比较(P<0.05)。结论葛根总黄酮对高糖致HUVEC损伤具有一定的保护作用,该作用的产生可能与其抑制高浓度葡萄糖作用下HU-VEC的增殖,促使细胞由G0/G1进入S期,使DNA合成增加,使细胞上清液中SOD活性和NO含量增加,而ICAM-1的含量降低等有关。葛根总黄酮对防治糖尿病血管病变的发生发展具有积极的意义。

葛根总黄酮对不同急性髓系白血病细胞株增殖抑制的影响

为了探讨葛根总黄酮对急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)的作用及其可能的机制,观察不同浓度葛根总黄酮体外对4种AML细胞株Kasumi-1、HL-60、NB4和U937的增殖抑制影响和细胞周期的变化。应用MTT法检测细胞株细胞的增殖抑制作用,用流式细胞术检测细胞周期的变化。结果表明:一定浓度葛根总黄酮对4种AML细胞株增殖抑制作用差异显著,抑制强度依次为NB4细胞>Kasumi-1细胞>U937细胞>HL-60细胞;葛根总黄酮不同程度地改变NB4、Kasumi-1、U937及HL-60细胞周期进程,使G1期细胞比例下降,S期细胞比例增高,出现亚二倍体峰,呈现浓度依赖性。结论:葛根总黄酮体外对不同AML细胞株具有选择性增殖抑制作用,以对NB4细胞株的影响最为显著。

葛根总黄酮对利血平致偏头痛大鼠的保护作用

目的研究葛根总黄酮经鼻给药对利血平致偏头痛模型动物的主要治疗作用及其机制。方法采用皮下注射利血平制备大鼠偏头痛模型,实验设阴性对照组、模型组、麦角胺咖啡因组和葛根总黄酮组。除麦角胺咖啡因组给药1次外,其余各组共给药3次,每次间隔20 min。各组首次给药后60 min取血与脑组织,观察给药后大鼠脑内去甲肾上腺素、多巴胺、高香草酸、5-羟色胺(5-HT)、5-羟吲哚乙酸等神经递质水平的变化及大鼠血液中一氧化氮合酶(NOS)水平的变化。结果模型组动物脑内多巴胺、5-HT水平显著降低,血液中的NOS水平明显升高;滴鼻给予不同剂量的葛根总黄酮能明显提高利血平致偏头痛模型动物脑内去甲肾上腺素、多巴胺的水平,大鼠血液中的NOS水平显著降低。结论葛根总黄酮滴鼻给药能明显改善利血平致偏头痛的症状。

葛根总黄酮对脑缺血的保护作用

葛根总黄酮５００，１０００ｍｇ／ｋｇ，连续ｐｏ７ｄ，能显著对抗反复性脑缺血大鼠脑组织含水量、Ｃａ２＋及丙二醛（ＭＤＡ）的含量升高，Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ及超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）活性的降低；还能明显延长小鼠断头后张口呼吸持续时间。

不同纯化工艺对葛根总黄酮质量的影响

目的 :系统考察葛根总黄酮的纯化工艺 ,为葛根总黄酮的分离纯化提供实验依据。方法 :采用D101、D201、AB -8型大孔吸附树脂吸附 ,聚酰胺吸附及水饱和正丁醇萃取5种方法对葛根总黄酮进行纯化 ,以总黄酮收率、纯度及总黄酮中各成分的保留情况为考察指标综合评价。结果 :5种方法制备的总黄酮的百分含量依次为 :89 4 %、83 6 %、91 0 %、96 0 %、82 9 % ,产品收率依次为 :79 3 %、64 2 %、88 0 %、55 7 %、77 2 %。结论 :5种纯化方法中 ,AB -8型树脂综合性能最好 。

葛根总黄酮对刀豆蛋白A诱导的小鼠免疫性肝损伤保护作用及其机制的初步研究

病毒性肝炎（viral hepatitis）是常见病、多发病,通过一系列的免疫应答可引起肝细胞损伤,其中以细胞免疫为主,特别是TNF-α大量释放,可导致肝脏急性出血性坏死[1]。葛根是豆科植物野葛Pueraria lobata（Willd.）Ohwi.的干燥根,含多种黄酮类成分,具有解酒毒、降血脂等多种药理活性[2]。

葛根总黄酮对小鼠记忆行为的影响

在避暗法实验中，小鼠ｐｏ葛根总黄酮４００，８００，１２００ｍｇ／ｋｇ连续７ｄ，能够对抗东莨菪碱、亚硝酸钠、乙醇、氮气吸入、双侧颈总动脉阻断再灌流引起的记忆障碍；５００，１０００ｍｇ／ｋｇ连续ｐｏ４２ｄ，可显著改善Ｄ－半乳糖所致亚急性衰老小鼠的记忆功能。在Ｙ形迷宫试验中，ｐｏ葛根总黄酮４００，８００，１２００ｍｇ／ｋｇ还可剂量依赖性地对抗东莨菪碱引起的自主选择能力降低。

葛根总黄酮体外诱导人早幼粒细胞白血病细胞株NB4凋亡的实验研究

目的探讨葛根主要成分葛根总黄酮对急性早幼粒细胞白血病(APL)细胞株NB4增殖及凋亡的影响。方法采用MTT比色法检测葛根总黄酮对NB4细胞增殖抑制率;光学显微镜及荧光显微镜观察细胞形态改变;AnnexinV/PI双染法检测细胞凋亡率;DNAPI染色法分析细胞周期及亚二倍体峰。结果12.5～200μg/ml葛根总黄酮均能抑制NB4细胞的增殖。光镜及荧光显微镜下可见核固缩、凋亡小体等典型的细胞凋亡改变;AnnexinV+/PI-细胞呈时间-剂量依赖性增加;DNAPI染色法发现细胞亚二倍体比例增加,G1期比例下降、S期比例增高。结论葛根总黄酮能有效抑制NB4细胞增殖、阻滞细胞周期进程、诱导细胞凋亡。