葛根素与大豆苷元对血管平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的 :研究葛根素与大豆苷元对血管平滑肌细胞增殖的抑制作用 ,并探讨其机制。方法 :分离培养人脐动脉平滑肌细胞 ,不同浓度葛根素、大豆苷元与细胞共孵育 ,使用MTT法检测细胞活性 ,同时用Rt PCR法检测Survivin ,Bcl xl,Bax ,GapdhmRNA的表达。结果 :葛根素与大豆苷元都可降低细胞增殖活性 ,升高Bax/Gapdh/Bcl xl/Gapdh的比值。与葛根素组相比 ,相同浓度的大豆苷元组细胞活性较低 ,Bax/Gapdh/Bcl xl/Gapdh比值较高。结论 :与葛根素相比 ,大豆苷元抑制血管平滑肌细胞增殖的作用更强。

葛根素抑制大鼠血管平滑肌细胞增殖及c-fos和bcl-2蛋白表达

目的：观察葛根素对血管平滑肌细胞（VSMC）增殖的影响及对c-fos和bcl-2蛋白的表达作用，旨在认识葛根素作用的分子机制。方法：建立凝血酶（T）诱导VSMC增殖的模型，以细胞计数和流式细胞仪DNA含量测定、细胞周期分析法观察T及葛根素对VSMC增殖和DNA合成的影响。T及葛根素等各处理因素作用24h后，用免疫印迹法（Western blot）检测c-fos蛋白和bcl-2蛋白表达。结果：T对VSMC有明显促增殖作用，促增殖效应在24h末达峰，且T在0．1-1．0U·L^-1有剂量依赖关系；葛根素呈剂量依赖性地抑制T诱导的细胞增殖、DNA合成以及VSMC c-fos和bcl-2蛋白的表达。结论：葛根素能抑制T诱导的VSMC增殖，这可能与其抑制c-fos和bcl-2蛋白表达有关。

葛根素对血管平滑肌细胞增殖及增殖细胞核抗原和凋亡抑制蛋白表达的影响

目的:通过观察葛根素对培养的脐动脉平滑肌细胞增殖细胞核抗原(PCNA)和凋亡抑制蛋白(Survivin)表达的影响,探讨葛根素抑制平滑肌细胞增殖的机制。方法:分离培养人脐动脉平滑肌细胞,加入不同浓度葛根素与细胞孵育,采用免疫组化法检测血管平滑肌细胞的PCNA表达;提取RNA,采用Rt-PCR检测Survivin表达水平,并经核苷酸序列分析验证,灰度扫描测定Survivin/GAPDH(s/G)比率。结果:葛根素抑制血管平滑肌细胞的PCNA表达(P=0.0000);葛根素组Survivin/磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)(s/G)比率较对照组低。结论:葛根素具有抑制血管平滑肌细胞增殖的作用。

葛根素抑制凝血酶诱导的血管平滑肌细胞增殖

目的 观察葛根素对T诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响。方法 建立凝血酶(T)诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖模型,以细胞计数法和流式细胞仪DNA含量测定的方法观察T及葛根素对VSMC增殖和DNA合成的影响。结果 T对VSMC有明显促增殖作用,促增殖效应在2 4小时末达峰,且T浓度在0 . 1U/L～1 . 0U/L之间有剂量依赖关系;葛根素呈剂量依赖性地抑制T诱导的细胞增殖与DNA合成。结论 葛根素能抑制T诱导的VSMC增殖。

葛根素对血管平滑肌细胞增殖及对c-fos蛋白和凝血酶受体mRNA表达的影响

目的:通过建立凝血酶(T)诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)增殖模型,观察葛根素对T诱导的VSMC增殖的影响,并进一步观察其对c- fos蛋白以及凝血酶受体(TR)mRNA表达的作用,旨在认识葛根素作用的分子机制。方法:以细胞计数法和流式细胞仪测定DNA含量,细胞周期分析观察T及葛根素对VSMC增殖和DNA合成的影响。T及葛根素等各处理因素作用2 4h后,免疫印迹法(Westernblot)检测c -fos蛋白表达,半定量逆转录聚合酶链式反应(RT- PCR)检测TRmRNA的表达。结果:T对VSMC有明显促增殖作用,促增殖效应在2 4h末达到峰值,且T浓度在0 .1～1.0U·L- 1有剂量依赖关系;葛根素呈剂量依赖性地抑制T诱导的细胞增殖、DNA合成以及VSMCc fos蛋白的表达;高浓度(1.5×10 - 3mol·L- 1)的葛根素可显著抑制T诱导的TRmRNA上调。结论:葛根素能抑制T诱导的VSMC增殖,这可能与其抑制c- fos蛋白有关,并部分与其抑制TRmRNA表达有关。

碘化N-正丁基氟哌啶醇抑制机械损伤诱导的血管平滑肌细胞增殖的作用及机制

目的探讨碘化N-正丁基氟哌啶醇(F2)对机械损伤所致血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的抑制作用及其机制。方法原代培养大鼠胸主动脉VSMCs,体外建立机械划伤致VSMCs增殖模型,采用Cell Counting Kit-8(CCK-8)法检测细胞增殖情况;流式细胞术法测定细胞周期;Western blot法检测p-MEK,p-ERK,Egr-1蛋白表达;Real Time RT-PCR检测MEK和Egr-1 mRNA表达。结果 F2剂量依赖地抑制机械损伤所致VSMCs增殖,降低损伤刺激下VSMCs的生存率和DNA合成,使G0/G1期细胞比例升高,G2/M期细胞百分比下降,并且抑制损伤后VSMCs中MEK/ERK的活化,使p-MEK/ERK蛋白表达降低,同时下调损伤后MEK和Egr-1的高表达。结论 F2对机械损伤所致血管平滑肌细胞增殖有明显抑制作用,其机制可能与影响MEK/ERK/Egr-1信号途径有关。

葛根素对凝血酶诱导的血管平滑肌细胞增殖及凝血酶受体mRNA表达的影响

目的通过建立凝血酶诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)增殖模型,观察葛根素对凝血酶诱导的VSMC增殖的影响,并进一步观察其对凝血酶受体(TR)mRNA的表达有何作用,旨在认识葛根素的作用的分子机制。方法以细胞计数法和流式细胞仪DNA含量测定法观察凝血酶及葛根素对VSMC增殖和DNA合成的影响。凝血酶及葛根素等各处理因素作用24h后,以半定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测TRmRNA的表达。结果凝血酶对VSMC有明显促增殖作用,促增殖效应在24h末达峰,且凝血酶浓度在0.1U/L^1.0U/L之间有剂量依赖关系;葛根素呈剂量依赖性地抑制凝血酶诱导的细胞增殖、DNA合成;高浓度(1.5×10-3mol/L)的葛根素可显著抑制凝血酶诱导的TRmRNA上调。结论葛根素抑制凝血酶诱导的VSMC增殖,这可能部分与其抑制TRmRNA表达有关。

碘化N-正丁基氟哌啶醇抑制兔颈总动脉球囊损伤后血管内膜和平滑肌细胞增殖的作用研究

目的:探讨碘化N-正丁基氟哌啶醇(F2)对兔颈总动脉球囊损伤后内膜及平滑肌细胞增殖的影响。方法:30只新西兰兔随机分为假手术组、模型组、F2高剂量给药组(2mg/kg)、F2中剂量给药组(1mg/kg)、F2低剂量给药组(0.5mg/kg)。模型组及F2各给药组行左侧颈总动脉球囊损伤,各组分别于术后7d取颈总动脉段,常规病理切片,HE染色,免疫组化法测定α-actin、增殖细胞核抗原(PCNA)的表达水平。结果:与假手术组比较,模型组术后7d血管内膜厚度、内膜面积、内膜厚度/中膜厚度、内膜面积/中膜面积、血管壁细胞PCNA表达显著增加(P<0.01),F2剂量依赖地降低上述指标。与假手术组比较,模型组血管壁α-actin阳性染色减少,F2各给药组可增加血管壁平滑肌细胞中α-actin阳性染色率。结论:F2能抑制兔颈总动脉机械损伤后血管内膜和平滑肌细胞的增殖。

蝙蝠葛碱对大鼠血管内皮损伤后平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的研究蝙蝠葛碱(Dau)对球囊损伤后血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的抑制作用及其对细胞周期调控因子p27蛋白表达的影响。方法将25只♂SD大鼠随机均分为假手术组、单纯损伤组和Dau低、中、高剂量组,后4组行球囊内皮剥脱术,Dau组于术前3d开始,igDau25、50、100mg·kg-1·d-1,假手术组和单纯损伤组同期ig等量生理盐水。术后第14天处死所有大鼠,取胸主动脉进行HE染色,光镜下观察内膜损伤后形态学的变化,并进行图像分析。采用免疫组织化学技术检测球囊内皮损伤后血管平滑肌细胞p27蛋白表达的变化。结果球囊损伤后血管壁增生,Dau可剂量依赖性地减少新生内膜面积,增加管腔面积,降低球囊损伤后内膜及中膜厚度(P<0.05),抑制平滑肌细胞的增殖,促进p27蛋白的表达。结论p27参与了球囊损伤内皮后血管平滑肌细胞增殖的调节。Dau对损伤内皮所致平滑肌的增殖具有抑制作用,可防止血管再狭窄,其机理可能是通过调节p27的表达实现的。

粉防己碱对高血压大鼠血管平滑肌细胞增殖的抑制作用

探讨了粉防己碱 (Tet)抑制培养的大鼠主动脉平滑肌细胞 (AVSMC)增殖的作用 ,MTT法分析细胞增殖 ,[3 H]TdR参入法分析细胞DNA合成 .结果显示 :①肾血管性高血压〔RH ,二肾一夹 (2K1C)术后18周〕大鼠AVSMC超微结构呈典型的合成细胞特征 ;②RH大鼠AVSMC具有更活跃的增殖倾向 ,血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )和去甲肾上腺素 (NE)刺激下指数增长期细胞数和在NE刺激下的AVSMC生长率均明显增高 ;③Tet(50mg·kg- 1·d- 1,po ,2K1C术后 9周始 ,连续 9周 )治疗组的AVSMC对NE和AngⅡ诱导的细胞增殖反应性和生长率较RH组明显降低 ;④对RH组和伪手术组大鼠的AVSMC ,Tet(0 .1～ 10μmol·L- 1)体外给药可浓度依赖性地抑制NE或AngⅡ诱导的增殖和 [3 H]TdR参入 .研究表明 ,RH大鼠AVSMC对NE和AngⅡ促增殖作用敏感性及反应性增高 ;Tet可降低其对NE和AngⅡ的反应性 ,抑制AVSMC增殖和DNA合成 .

实验家兔血管球囊损伤后血管平滑肌细胞增殖和迁移及通心络对其影响

目的 探讨通心络对兔血管球囊损伤后血管平滑肌细胞 (VSMC)增殖和迁移的影响及其可能机制。方法 新西兰大白兔 6 4只 ,普食饲养 ,随机分为假手术组、对照组和通心络组 ,并分别于术前以及术后即刻及第 1、2、4周留取各组受损动脉标本和手术前后血液标本 ,分别行病理、电镜、RT PCR检验及血清NO浓度测定。结果 ( 1)术后对照组新生内膜明显增厚 ,内含大量增殖、迁移的VSMC ,VSMC呈典型的“合成型”表现 ,血管腔狭窄 ;通心络组以上改变较同期对照组显著减轻。 ( 2 )对照组新生内膜面积、内膜增生指数和增殖细胞核抗原 (PCNA)增殖指数均显著高于通心络组 (P <0 .0 1) ,但管腔面积和管腔狭窄指数均显著小于通心络组 ( P <0 .0 1)。 ( 3)对照组PCNA、基质金属蛋白酶 2 (MMP 2 )、MMP 3和血小板源性生长因子 BB(PDGF BB)的免疫组化及RT PCR表达均显著高于通心络组 ,而组织抑制因子 1(TIMP 1)的表达则相对低于通心络组。 ( 4 )术后对照组血清NO浓度显著低于通心络组 ( P<0 .0 5 )。结论 通心络能明显抑制球囊损伤后VSMC增殖和迁移 ,阻止内膜增生 。

川芎嗪对血管紧张素Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞增殖的抑制作用及机制

目的探讨川芎嗪对血管紧张素Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞增殖的影响。方法建立血管紧张素Ⅱ诱导血管平滑肌细胞增殖模型,用酶促反应定磷法观察不同浓度的川芎嗪在不同时段内对血管平滑肌细胞中钙调蛋白和钙调神经磷酸酶活性的影响。结果与正常对照组比较,血管紧张素Ⅱ组能够明显刺激血管平滑肌细胞增殖,血管紧张素Ⅱ处理的血管平滑肌细胞的钙调蛋白和钙调神经磷酸酶活性及细胞增殖活度均较正常对照组显著增高(P<0.01)。同时加川芎嗪处理后,各组钙调蛋白和钙调神经磷酸酶活性均显著下降(P<0.01)。结论川芎嗪对血管紧张素Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞增殖有显著抑制作用,其抑制机制可能与其干预钙调神经磷酸酶依赖的信号转导途径有关。

柿叶黄酮抑制LDL刺激的大鼠血管平滑肌细胞增殖

目的 :观察柿叶黄酮对低密度脂蛋白 (LDL)刺激时离体大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞增殖的影响。方法 :体外培养大鼠主动脉血管平滑肌细胞 ,LDL刺激时 ,应用不同剂量的柿叶黄酮作用 2 4h后 ,采用MTS/PES法确定血管平滑肌细胞的增殖状态。结果 :与对照组相比 ,LDL可以明显刺激大鼠血管平滑肌细胞的增殖 ,柿叶黄酮对LDL刺激下的大鼠血管平滑肌细胞增殖具有明显的抑制作用 (P <0 0 5 ) ,并呈现剂量依赖性。结论

过氧化氢对血管平滑肌细胞增殖和明胶酶A及其抑制因子基因表达的影响

目的 :探讨过氧化氢 (H2 O2 )对体外培养大鼠血管平滑肌细胞 (VSMC)增殖和明胶酶A(MMP - 2 )、及其抑制因子 (TIMP - 2 )基因表达的影响。方法 :先用四甲基偶氮唑 (MTT)法筛选出H2 O2 对VSMC的毒性作用浓度和增殖作用浓度 ,在此基础上用逆转录聚合酶链反应 (RT -PCR)法测定H2 O2 对MMP - 2、TIMP - 2mRNA表达的影响。结果 :H2 O2 浓度大于 30 0 μmol/L后显示出对VSMC的致死毒性作用 ;H2 O2 浓度在 0 0 1 - 50 μmol/L内可以刺激VSMC的增殖 ,且呈时间依赖性 ;1 μmol/LH2 O2 、1 0 μmol/LH2 O2 对MMP - 2基因转录有明显的促进作用 ;不同浓度的H2 O2对TIMP - 2基因转录无明显促进作用。结论 :适当浓度的H2 O2 可以促进VSMC的增殖和MMP - 2mRNA表达 ,但对TIMP - 2mRNA表达无明显作用 ,提示H2 O2 参与了血管重塑的不同病理环节。

一氧化氮在17-β雌二醇抑制血管平滑肌细胞增殖和原癌基因c-fos表达中的作用

实验利用大鼠血管平滑肌细胞 (vascularsmoothmusclecells ,VSMC)作为模型 ,观察 17 β雌二醇 (E2 )对VSMC增殖和原癌基因c fos表达的影响 ,并探讨VSMC源性一氧化氮 (NO)在其中的作用。检测指标包括NO释放的测定、细胞计数、3 H Tdr掺入、噻唑蓝 (MTT)测定和c fosmRNA表达。结果显示 ,E2 ( 10 12 ～ 10 -8mol/L)呈浓度依赖性地促进VSMC中NO的释放 ;10 -8mol/LE2 能明显抑制 10 %小牛血清 (FCS)和 10 -7mol/L内皮素 1(ET 1)诱导的细胞增殖和DNA合成 ,E2 的抑制作用均可被雌激素受体 (ER)拮抗剂tamoxifen ( 10 -7mol/L)和一氧化氮合酶抑制剂L NAME( 10 -6 mol/L)明显减轻 ;E2 ( 10 -8mol/L)可明显抑制 10 -7mol/LET 1诱导的VSMCc fos表达 ,这种抑制作用可被L NAME ( 10 -6 mol/L)明显减轻。这些结果提示E2 能抑制VSMC增殖和原癌基因c fos表达 ,这和促进VSMC的NO释放密切相关 。

抑制大鼠动脉损伤后早期中膜平滑肌细胞增殖可降低内膜肥厚

目的 :探讨早期中膜平滑肌细胞增殖与内膜肥厚的关系。方法 :球囊导管损伤大鼠动脉后 ,在不同时期投予血管紧张素转换酶抑制剂 (ACEI) (temocapril-HCl,10mg·kg-1·d-1) ,观察平滑肌细胞BrdU(5 -溴脱氧尿嘧啶尿苷 )标记率和内膜面积。结果 :损伤后动脉中膜平滑肌BrdU阳性细胞出现于术后 2 4h ,BrdU标记率呈双峰期变化 ,第 1期在 1- 3d ,峰值在 2d为 5 3% ,第 2期在 3- 7d ,峰值在 5d为 2 7%。在第 1个增殖期投予temocapril显著抑制第 2个增殖期的BrdU标记率 (0 0 5± 0 0 2 ) % ,对照组为 (4 5 0± 0 2 7) % (P <0 0 1) ,同时也显著抑制了术后10d内膜面积的增加 (10 6 70 1μm2 ± 7713 3μm2 ) (P <0 0 1)。而仅在第 2个增殖期投药 ,则不能抑制内膜面积的增加 (83499 5 μm2 ± 3136 0 0 μm2 ) (P >0 0 5 ) ,其程度与未投药组相当。结论

槲皮素及异鼠李素对去甲肾上腺素促人血管平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的观察槲皮素、异鼠李素和去甲肾上腺素对培养人血管平滑肌细胞增殖的影响.方法利用培养的人主动脉平滑肌细胞,采用细胞计数和3H-胸腺嘧啶掺入法,观察槲皮素、异鼠李素和去甲肾上腺素对血管平滑肌细胞增殖、DNA合成的影响,以及槲皮素、异鼠李素和酚妥拉明对去甲肾上腺素促血管平滑肌细胞增殖、DNA合成的影响.结果槲皮素有明显抑制血管平滑肌细胞增殖和DNA合成的作用,而异鼠李素作用较弱.在所观察1～200 μmol/L的浓度范围内,槲皮素和异鼠李素均在200 μmol/L浓度发挥了最大的抑制作用,其抑制作用有剂量依赖关系.去甲肾上腺素有促进血管平滑肌细胞增殖、DNA合成的作用, 而这些促进作用能被酚妥拉明所阻滞.槲皮素和异鼠李素均呈剂量依赖性抑制去甲肾上腺素促血管平滑肌细胞增殖和DNA合成的作用, 且槲皮素和异鼠李素有明显的协同作用.槲皮素和异鼠李素对去甲肾上腺素刺激作用的抑制明显强于酚妥拉明. 槲皮素和异鼠李素对血管平滑肌细胞无细胞毒性作用.结论槲皮素和异鼠李素是细胞毒性低的天然黄酮类物质,对血管平滑肌细胞增殖、DNA合成尤其是对去甲肾上腺素刺激的血管平滑肌细胞增殖、DNA合成有较强的抑制作用.