葛根素糖苷生物合成及对乳腺癌细胞增殖抑制的影响

目的研究约氏不动杆菌G2菌株对葛根素糖苷生物合成的最佳转化条件,以及葛根素糖苷对人乳腺癌细胞株MDAMB-231的增殖抑制作用。方法考察生物合成体系中转化温度、pH和蔗糖浓度对转化率的影响;并以四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)观察不同浓度的葛根素及葛根素糖苷对MDA-MB-231细胞生长的影响。结果葛根素糖苷的最佳转化条件为温度30℃,pH 7.38,蔗糖浓度60g/L,在此条件反应24h,转化率为85%。MTT法显示,不同浓度的葛根素及其糖苷对MDA-MB-231细胞均有抑制作用,并随浓度升高而抑制作用增强;其中200μmol/L浓度葛根素及葛根素糖苷作用MDA-MB-231细胞48h后,其抑制率分别为61.91%和59.42%。结论约氏不动杆菌G2菌株可有效催化葛根素合成葛根素糖苷;葛根素及其糖苷均能明显抑制人乳腺癌细胞株MDA-MB-231的增殖。

葛根素6″-O-木糖苷对ox-LDL诱导HUVECs细胞损伤的影响

目的 探讨葛根素6″-O-木糖苷对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导人静脉内皮细胞(HUVECs)损伤的影响。方法 将HUVECs随机分为对照组、ox-LDL组及葛根素6″-O-木糖苷10、20、40μmol/L组,MTT法检测细胞活性,ELISA法检测白介素(IL)-1β和肿瘤坏死因子(TNF)-α水平,试剂盒检测caspase-3活性,Western blot检测细胞间黏附分子(ICAM1)、血管细胞黏附分子(VCAM1)、cleaved caspase-3、p-p65、p-IκB-α表达。结果 与对照组比较,ox-LDL处理使HUVECs细胞活性降低(P<0.05),caspase-3活性及IL-1β、TNF-α水平升高(P<0.05),cleaved caspase-3、ICAM1、VCAM1、p-p65、p-IκB-α蛋白表达升高(P<0.05);与ox-LDL组比较,葛根素6″-O-木糖苷能改善以上指标(P<0.05),并呈剂量依赖性。结论 葛根素6″-O-木糖苷能抵抗ox-LDL诱导的血管内皮细胞损伤,包括提高细胞活性、抑制细胞凋亡和炎症,其机制可能与抑制NF-κB信号通路有关。

参芍心欣方有效部位化学成分研究

;目的:研究参芍心欣方(人参、赤芍、葛根)有效部位的化学成分,阐明其抗心功能不全的物质基础。方法:采用硅胶、聚酰胺、交联葡萄糖凝胶等多种柱层析手段,根据化合物性质和紫外、快中子轰击质谱核磁光谱数据鉴定结构。结果:从参芍心欣方有效部位的三个部分中分离得到8个单体化合物,它们分别为:大豆素、4′-甲氧基大豆苷、染料木苷、3′-甲氧基葛根素、葛根素、芍药苷、葛根素芹菜糖苷、大豆苷元4′、7-葡萄糖苷。结论:分离得到的化合物能部分反映出该复方醇溶性的有效部位。

葛根药材HPLC指纹图谱与6种成分含量测定研究

目的 建立葛根Pueraria lobate药材HPLC指纹图谱,并测定不同产地葛根中6种成分(3'-羟基葛根素、葛根素、3'-甲氧基葛根素、葛根素芹菜糖苷、大豆苷、大豆苷元)的含量,为葛根优质药材产地与质量控制提供参考。方法 采用HPLC法,葛根药材30%乙醇提取液的分析采用Hypersil BDS C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);0.1%甲酸水-乙腈为流动相,梯度洗脱;体积流量1.0 mL/min;检测波长250 nm;柱温25℃。建立32批葛根药材指纹图谱,并测定不同产地葛根药材6种成分的含量。结果 建立了葛根药材HPLC指纹图谱,共提取出10个共有峰,指认6个共有峰;建立了含量测定方法,并对不同产地来源的32批葛根药材中6种成分含量测定,不同产地葛根质量对比综合评分结果显示河南最高,其次为陕西。结论 建立了葛根HPLC指纹图谱方法,通过对比,各样品与对照图谱相似度均大于0.9,为葛根道地药材质量标准提供整体质量控制依据。结合产地调研信息,可将葛根优质原料药材产地优选为陕西、河南秦岭山脉。

一测多评法测定葛酮通络胶囊中5种成分的含量

目的:研究并建立葛酮通络胶囊中3’-羟基葛根素、葛根素、3’-甲氧基葛根素、葛根素芹菜糖苷和大豆苷含量的一测多评法。方法:以葛根素为内标物,计算3’-羟基葛根素、3’-甲氧基葛根素、葛根素芹菜糖苷和大豆苷4种成分的相对校正因子,并将该方法的测定结果与传统外标曲线法测定的结果进行比较。结果:3’-羟基葛根素、3’-甲氧基葛根素、葛根素芹菜糖苷和大豆苷的相对校正因子分别为0.993、1.054、0.965、1.025;一测多评法与传统方法测定的结果比较,3’-羟基葛根素、3’-甲氧基葛根素、葛根素芹菜糖苷和大豆苷的含量无明显差异。结论:经方法学验证,该试验建立的一测多评法可用于葛酮通络胶囊中5种成分含量的同时测定。

UPLC同时测定小儿柴桂退热颗粒中的12种成分

为建立多波长同时测定小儿柴桂退热颗粒中12种成分含量的UPLC分析方法,本文采用Accucore aQ C18色谱柱(2.1 mm×150 mm,2.6μm),以乙腈-0.005 moL/L乙酸铵水溶液为流动相进行检测。结果显示,供试品溶液主峰的保留时间与对照品溶液主峰的保留时间一致,阴性对照无相应的色谱峰出现,12种有效成分的线性范围良好,加样回收率在94.86%~104.91%之间,RSD值为1.29%~2.94%。由此可见,该方法快速高效、灵敏度高、专属性好,可应用于小儿柴桂退热颗粒的质量控制。

一测多评法测定葛根药材中5种异黄酮类成分

目的建立葛根药材中5种异黄酮类成分大豆苷元、大豆苷、葛根素、葛根素芹菜糖苷、葛根素-6″-O-木糖苷的一测多评法,验证该方法在葛根质量分析中应用的准确性及可行性。方法以葛根素为内标,分别建立葛根素与葛根素芹菜糖苷、葛根素-6″-O-木糖苷、大豆苷、大豆苷元的相对校正因子,计算葛根中葛根素芹菜糖苷、葛根素-6″-O-木糖苷、大豆苷、大豆苷元的量,实现一测多评。同时采用外标法测定葛根药材中5种异黄酮类成分的量,并比较计算值与实测值的差异,以验证一测多评法在测定中的科学性及可行性。结果各相对校正因子重复性良好,一测多评法测定结果与外标法测定结果无显著差异。结论以葛根素为内标同时测定葛根素芹菜糖苷、葛根素-6″-O-木糖苷、大豆苷、大豆苷元的一测多评法可用于葛根药材的定量分析。

葛根芩连片特征图谱及含量测定方法研究

目的：建立葛根芩连片的特征图谱,并对葛根素和盐酸小檗碱进行定量研究。方法：采用HPLC法建立特征图谱和含量测定方法,并以液质联用对特征峰进行指认。采用TC-C18色谱柱（4.6 mm×250 mm,5μm）,以甲醇为流动相A,以0.15%三氟乙酸溶液为流动相B,梯度洗脱（0-25 min,23%A→30%A;25-26 min,30%A→35%A;26-39 min,35%A→42%A;39-40 min,42%A→45%A;40-55 min,45%A）,流速1.0 mL·min-1,检测波长250 nm（用于特征图谱建立和葛根素含量测定）、348 nm（用于盐酸小檗碱怾含量测定）;采用电喷雾离子源进行正离子模式扫描,对葛根芩连片特征图谱中8个特征峰进行指认。结果：建立了以葛根素和小檗碱为参照峰的葛根芩连片HPLC特征图谱,并指认了葛根素、盐酸小檗碱、3＇-羟基葛根素、3＇-甲氧基葛根素、葛根素木糖苷、大豆苷、盐酸巴马汀和黄芩苷8个特征峰;葛根素含量在8.8-12.9 mg·片-1之间,盐酸小檗碱含量在2.5-7.0 mg·片-1之间。结论：本法为葛根芩连片的质量控制提供了有效的技术方法;提出的以双标峰进行特征峰相对保留时间定位,为中药特征图谱评价系统提供新的思路。

基于一测多评法含量测定及薄层鉴别的经典名方竹茹汤颗粒剂的质量评价研究

目的 建立经典名方竹茹汤颗粒(Zhuru Decoction Granules,ZDG)特征图谱及一测多评(quantitative analysis multicomponents by single marker,QAMS)法测定其主要成分,优化薄层色谱条件,建立同时鉴别葛根素和甘草苷的方法。方法优化并确定HPLC最佳色谱条件并建立特征图谱,以葛根素作为参照物,建立葛根素、3′-羟基葛根素、3′-甲氧基葛根素、葛根素芹菜糖苷、大豆苷、甘草苷、甘草酸的QAMS法,建立主要药效成分葛根素及甘草苷同时鉴别的薄层条件。结果 得到15批样品特征图谱与其对照图谱的相似度均大于0.95;15批制剂运用QAMS法和外标法得到的各成分含量无显著性差异,7种成分相对误差均低于5%;通过稳定性考察证明薄层检测条件稳定可行。结论 该方法科学可行,稳定可控,有助于经典名方ZDG质量控制方法的完善和提高,为经典名方的质量控制评价提供参考。

基于HPLC-Q-Exactive液质联用技术与HPLC的通脉降糖胶囊成分分析及指纹图谱研究

目的 开发一种基于HPLC-Q-Exactive液质联用技术的通脉降糖胶囊(Tongmai Jiangtang Capsule,TJC)全局定性分析的检测方法,同时应用液相色谱建立TJC的HPLC指纹图谱,并对其主要成分进行定量分析,为TJC的全面质量评价及质量控制提供参考依据。方法 利用Thermo Fisher Q-Exactive液质联用系统对TJC化学信息进行采集,结合数据库、文献检索及对照品比对等手段进行TJC成分鉴定。采用Capcell Pak C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,3μm),以0.5%甲酸水溶液-0.5%甲酸乙腈溶液为流动相进行梯度洗脱,柱温40℃,体积流量0.4 mL/min,对15批次TJC样品进行检测,同时建立指纹图谱,应用中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)进行相似度评价和共有峰指认,并对其中8个指标成分进行定量测定。结果 利用高分辨液质联用技术共鉴定出TJC中150种化合物。15批TJC的指纹图谱相似度均在0.97以上,共标定25个共有峰,指认其中8个色谱峰(原儿茶酸、原儿茶醛、葛根素、3′-甲氧基葛根素、葛根素芹菜糖苷、大豆苷、丹酚酸B以及丹参酮ⅡA),对其进行HPLC定量分析,结果显示所有目标成分均线性良好(R~2>0.999),平均回收率均在95.30%~103.56%,质量分数分别为原儿茶酸0.204~0.482 mg/g、原儿茶醛0.345~0.516 mg/g、葛根素5.374~8.805 mg/g、3′-甲氧基葛根素1.148~2.075 mg/g、葛根素芹菜糖苷1.327~2.204 mg/g、大豆苷1.378~2.276 mg/g、丹酚酸B 3.065~4.918 mg/g以及丹参酮ⅡA0.412~0.594 mg/g。结论 所建立的成分鉴定、指纹图谱和定量分析方法稳定可行、结果可靠,适用于TJC的综合质量评价,可为TJC产品的质量控制提供参考借鉴。

基于多组分含量测定和化学计量学的风寒感冒颗粒整体质量评价研究

目的建立一种超高效液相色谱(UHPLC-UV)波长切换法同时测定风寒感冒颗粒中D-苦杏仁苷、葛根素、橙皮苷等14种化学成分的含量,结合化学计量学分析不同来源样品的质量差异。方法色谱柱为AgilentPoroshell120EC-C18(150 mm×2.1 mm,2.7μm),以乙腈-0.1%磷酸水溶液为流动相梯度洗脱,切换波长(210、254、310 nm)对5家生产企业68批样品中14种化学成分含量进行测定;并使用雷达图分析、相似度评价、热图聚类分析和主成分分析法对数据进行统计分析。结果 68批样品中各成分质量分数分别为D-苦杏仁苷0.063~3.885 mg/g、3′-羟基葛根素0.012~1.540 mg/g、葛根素0.036~4.017 mg/g、3′-甲氧基葛根素0.016~1.837 mg/g、葛根素-6″-O-木糖苷0.004~0.449 mg/g、芹糖葛根素苷0.021~2.076mg/g、大豆苷0.010~1.527 mg/g、升麻素苷0.007~0.471 mg/g、5-O-甲基维斯阿米醇苷0.062~1.029 mg/g、橙皮苷0.210~8.453 mg/g、迷迭香酸0.001~0.237 mg/g、水合氧化前胡素0.007~0.204 mg/g、甘草酸0.056~1.311 mg/g、氧化前胡素0.002~0.042 mg/g。化学计量学分析表明,同一厂家不同批次样品的整体质量一致性较好,但不同厂家之间样品的整体质量一致性存在较大差异。结论建立的基于UHPLC波长切换法的多组分含量测定方法简便、重复性好、专属性强,可为风寒感冒颗粒的整体质量评控提供方法参考。