葛根药材HPLC指纹图谱与6种成分含量测定研究

目的 建立葛根Pueraria lobate药材HPLC指纹图谱,并测定不同产地葛根中6种成分(3'-羟基葛根素、葛根素、3'-甲氧基葛根素、葛根素芹菜糖苷、大豆苷、大豆苷元)的含量,为葛根优质药材产地与质量控制提供参考。方法 采用HPLC法,葛根药材30%乙醇提取液的分析采用Hypersil BDS C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);0.1%甲酸水-乙腈为流动相,梯度洗脱;体积流量1.0 mL/min;检测波长250 nm;柱温25℃。建立32批葛根药材指纹图谱,并测定不同产地葛根药材6种成分的含量。结果 建立了葛根药材HPLC指纹图谱,共提取出10个共有峰,指认6个共有峰;建立了含量测定方法,并对不同产地来源的32批葛根药材中6种成分含量测定,不同产地葛根质量对比综合评分结果显示河南最高,其次为陕西。结论 建立了葛根HPLC指纹图谱方法,通过对比,各样品与对照图谱相似度均大于0.9,为葛根道地药材质量标准提供整体质量控制依据。结合产地调研信息,可将葛根优质原料药材产地优选为陕西、河南秦岭山脉。

一测多评法测定葛酮通络胶囊中5种成分的含量

目的:研究并建立葛酮通络胶囊中3’-羟基葛根素、葛根素、3’-甲氧基葛根素、葛根素芹菜糖苷和大豆苷含量的一测多评法。方法:以葛根素为内标物,计算3’-羟基葛根素、3’-甲氧基葛根素、葛根素芹菜糖苷和大豆苷4种成分的相对校正因子,并将该方法的测定结果与传统外标曲线法测定的结果进行比较。结果:3’-羟基葛根素、3’-甲氧基葛根素、葛根素芹菜糖苷和大豆苷的相对校正因子分别为0.993、1.054、0.965、1.025;一测多评法与传统方法测定的结果比较,3’-羟基葛根素、3’-甲氧基葛根素、葛根素芹菜糖苷和大豆苷的含量无明显差异。结论:经方法学验证,该试验建立的一测多评法可用于葛酮通络胶囊中5种成分含量的同时测定。

基于指纹图谱和网络药理学对经典名方竹茹汤中葛根的质量标志物(Q-Marker)预测分析

目的基于指纹图谱和网络药理学分析预测经典名方竹茹汤(Zhuru Decoction,ZRD)中葛根的质量标志物(QMarker)。方法建立葛根药材和饮片的水煎液及竹茹汤的指纹图谱,利用中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件(2012年版)进行分析;采用网络药理学筛选和分析竹茹汤中葛根相关成分的作用靶点和通路,构建成分-靶点-通路网络,预测竹茹汤中葛根发挥治疗胃热呕吐功效潜在的Q-Marker。结果分别建立了15批葛根药材水煎液、葛根饮片水煎液和18批竹茹汤的指纹图谱,相似度均>0.95,并指认出6个共有成分,分别为4号峰3′-羟基葛根素、6号峰葛根素、7号峰3′-甲氧基葛根素、9号峰葛根芹菜糖苷、11号峰大豆苷、23号峰大豆苷元;从网络药理学数据库中筛选分析得到6个化合物的14个核心靶点,包括转录因子p65(transcription factor p65,RELA)、RAC-α丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(RAC-αserine/threonine-protein kinase,AKT1)、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)、信号转导和转录激活因子1-α/β(signal transducer and activator of transcription 1-α/β,STAT1)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、丝裂原活化蛋白激酶14(mitogen-activated protein kinase14,MAPK14)、STAT3、转录因子AP-1(transcription factor AP-1,JUN)、细胞肿瘤抗原p53(cellular tumor antigen p53,TP53)等和20条关键通路,包括IL-6、TNF信号通路、NOD样受体(NOD-like receptor)信号通路、Toll样受体(Toll-like receptor)信号通路等构建成分-靶点-通路图;基于"Q-Marker五原则"分析预测大豆苷元、葛根素、大豆苷为竹茹汤中葛根潜在的Q-Marker。结论通过指纹图谱和网络药理学分析预测竹茹汤中葛根的Q-Marker,为全面控制竹茹汤的质量提供依据,为进一步研究竹茹汤的作用机制提供参考,同时为经典名方中复方及单味药的Q-Marker的关联性研究提供示范。

一测多评法测定葛根药材中5种异黄酮类成分

目的建立葛根药材中5种异黄酮类成分大豆苷元、大豆苷、葛根素、葛根素芹菜糖苷、葛根素-6″-O-木糖苷的一测多评法,验证该方法在葛根质量分析中应用的准确性及可行性。方法以葛根素为内标,分别建立葛根素与葛根素芹菜糖苷、葛根素-6″-O-木糖苷、大豆苷、大豆苷元的相对校正因子,计算葛根中葛根素芹菜糖苷、葛根素-6″-O-木糖苷、大豆苷、大豆苷元的量,实现一测多评。同时采用外标法测定葛根药材中5种异黄酮类成分的量,并比较计算值与实测值的差异,以验证一测多评法在测定中的科学性及可行性。结果各相对校正因子重复性良好,一测多评法测定结果与外标法测定结果无显著差异。结论以葛根素为内标同时测定葛根素芹菜糖苷、葛根素-6″-O-木糖苷、大豆苷、大豆苷元的一测多评法可用于葛根药材的定量分析。

基于一测多评法含量测定及薄层鉴别的经典名方竹茹汤颗粒剂的质量评价研究

目的 建立经典名方竹茹汤颗粒(Zhuru Decoction Granules,ZDG)特征图谱及一测多评(quantitative analysis multicomponents by single marker,QAMS)法测定其主要成分,优化薄层色谱条件,建立同时鉴别葛根素和甘草苷的方法。方法优化并确定HPLC最佳色谱条件并建立特征图谱,以葛根素作为参照物,建立葛根素、3′-羟基葛根素、3′-甲氧基葛根素、葛根素芹菜糖苷、大豆苷、甘草苷、甘草酸的QAMS法,建立主要药效成分葛根素及甘草苷同时鉴别的薄层条件。结果 得到15批样品特征图谱与其对照图谱的相似度均大于0.95;15批制剂运用QAMS法和外标法得到的各成分含量无显著性差异,7种成分相对误差均低于5%;通过稳定性考察证明薄层检测条件稳定可行。结论 该方法科学可行,稳定可控,有助于经典名方ZDG质量控制方法的完善和提高,为经典名方的质量控制评价提供参考。

基于HPLC-Q-Exactive液质联用技术与HPLC的通脉降糖胶囊成分分析及指纹图谱研究

目的 开发一种基于HPLC-Q-Exactive液质联用技术的通脉降糖胶囊(Tongmai Jiangtang Capsule,TJC)全局定性分析的检测方法,同时应用液相色谱建立TJC的HPLC指纹图谱,并对其主要成分进行定量分析,为TJC的全面质量评价及质量控制提供参考依据。方法 利用Thermo Fisher Q-Exactive液质联用系统对TJC化学信息进行采集,结合数据库、文献检索及对照品比对等手段进行TJC成分鉴定。采用Capcell Pak C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,3μm),以0.5%甲酸水溶液-0.5%甲酸乙腈溶液为流动相进行梯度洗脱,柱温40℃,体积流量0.4 mL/min,对15批次TJC样品进行检测,同时建立指纹图谱,应用中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)进行相似度评价和共有峰指认,并对其中8个指标成分进行定量测定。结果 利用高分辨液质联用技术共鉴定出TJC中150种化合物。15批TJC的指纹图谱相似度均在0.97以上,共标定25个共有峰,指认其中8个色谱峰(原儿茶酸、原儿茶醛、葛根素、3′-甲氧基葛根素、葛根素芹菜糖苷、大豆苷、丹酚酸B以及丹参酮ⅡA),对其进行HPLC定量分析,结果显示所有目标成分均线性良好(R~2>0.999),平均回收率均在95.30%~103.56%,质量分数分别为原儿茶酸0.204~0.482 mg/g、原儿茶醛0.345~0.516 mg/g、葛根素5.374~8.805 mg/g、3′-甲氧基葛根素1.148~2.075 mg/g、葛根素芹菜糖苷1.327~2.204 mg/g、大豆苷1.378~2.276 mg/g、丹酚酸B 3.065~4.918 mg/g以及丹参酮ⅡA0.412~0.594 mg/g。结论 所建立的成分鉴定、指纹图谱和定量分析方法稳定可行、结果可靠,适用于TJC的综合质量评价,可为TJC产品的质量控制提供参考借鉴。