葡萄糖调节蛋白78对人舌癌细胞侵袭的影响及其机制

目的探讨葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein 78,Grp78)对人舌癌细胞系Tca-8113侵袭的影响及其分子机制。方法应用pc DNA3.1(+)-Grp78重组质粒转染舌癌细胞系Tca-8113筛选得到稳定表达Grp78的克隆(78C6),再应用si RNAGrp78转染78C6敲除Grp78表达,应用Transwell实验分析其侵袭能力,免疫荧光和细胞伸展实验检测细胞骨架排列和细胞伸展情况,GST-pulldown技术对Rac1和Rho A活性进行分析,Western blot检测Rac1、Rho A、MMP-9和MMP-2的表达。结果 Transwell实验结果显示,特异性上调Grp78表达明显促进舌癌细胞的侵袭,并且这种促进作用可以被si RNA-Grp78转染抑制,差异有统计学意义(P<0.05)。进一步的研究发现,与对照组相比,Grp78高表达可以促进舌癌细胞Tca-8113的伸展和极性形成,差异有统计学意义(P<0.05)。细胞骨架染色结果表明特异性上调Grp78后,细胞骨架微丝主要分布于细胞边缘,而这种作用可以被si RNA-Grp78转染抑制,导致细胞皮质部位出现明显的应力纤维。GST-pulldown结果表明,与对照组相比,Grp78高表达使Rac1的活性水平增高,Rho A活性降低,而si RNA-Grp78转染的细胞中Rac1活性降低,Rho A活性升高。Western blot研究显示,与对照组相比,Tca-8113/Grp78细胞中MMP-2和MMP-9表达增高(P<0.05),si RNA-Grp78转染的细胞中MMP-2和MMP-9表达降低(P<0.05),而Rho A和Rac1的表达前后无变化。结论 Grp78通过激活Rac1抑制Rho A活性及上调MMP-2和MMP-9表达来促进舌癌Tca-8113细胞的侵袭。

葡萄糖调节蛋白78和钙网蛋白在喉鳞状细胞癌组织中的表达及意义

目的探讨葡萄糖调节蛋白78(GRP78)及钙网蛋白(CRT)与喉鳞状细胞癌之间的关系,从而为喉凝状细胞癌的临床诊治及治疗提供新思路。方法采用免疫组化方法及Western blot方法检测60例喉癌患者喉癌组织及癌旁组织中的GRP78与CRT的表达,探讨GRP78与CRT与喉癌病理特征之间的关系。结果 CRP78和CRT在喉癌组织中阳性细胞平均光密度值分别为0.3585±0.0006和0.2962±0.0126,在喉癌癌旁组织中分别为0.331±0.006和0.2847±0.0043,CRP78和CRT在喉癌中的平均光密度值高于癌旁组织,差异均具有统计学意义(P<0.005)。采用Pearson相关分析统计分析数据结果显示:CRP78及CRT与喉鳞状细胞癌密切相关,CRP78在喉凝状细胞癌中的表达随CRT升高而增加(r=1.45,P<0.001)。CRP78及CRT在喉癌组织中的平均灰度值分别为0.53±0.21和0.65±0.23,在正常组织中分别为0.24±0.14和0.56±0.17,CRP78及CRT在喉癌组织中的平均灰度值显著高于癌旁组织,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 CRP78及CRT在喉癌中呈高表达,与喉癌的发生发展密切相关,且两者在喉凝状细胞癌组织中的表达量呈正相关。